2005 年桑给巴尔青蒿琥酯 + 阿莫地喹与蒿甲醚-苯蒽对恶性疟的疗效比较 (ACOII)

所有在研究地点出现疟疾临床症状的适当年龄组的儿童都被认为是可能的研究对象。 根据知情同意书，这些儿童的监护人被以斯瓦希里语口头告知该研究。 那些不愿意参加研究的人按照当地标准程序进行治疗。

在第 0 天，使用光学显微镜在吉姆萨染色的血膜上对患者进行了寄生虫检测。 评估了详细的临床病史和临床检查，包括腋窝温度。 对每个儿童的血红蛋白进行了评估，并在滤纸上收集了血液样本，用于对寄生虫进行基因分型，并可能确定不同抗疟药的血液水平。

监护人被要求在第 1、2、3、7、14、21、28、35 和 42 天将他们的孩子带回研究地点。 如果他们没有这样做，他们将被上门拜访，以确保采取适当的后续行动。 在每次随访中，研究者都会询问伴随用药和不良事件，并仔细填写临床报告表 (CRF)。

如果在第 14 天和第 42 天之间的随访期间，先前参加研究的儿童出现发烧，则所有测试和检查均按第 0 天进行。作为一种新的感染。 如果在随访期间诊断出患有严重的疟疾，则患者将接受抢救治疗（口服或静脉注射奎宁）并退出研究。 每次有登记的儿童出现在现场时，CRF 就临床和实验室状态、给予的治疗和可能的不良事件完成。

临床和实验室评估包括：

疟疾涂片：吉姆萨染色的厚血膜由经验丰富的显微镜技术人员在研究地点使用电镜或日光显微镜检查。 寄生虫的数量计算为针对厚血膜中的 200 个白细胞观察到的寄生虫数量，并在正确的情况下记录在 CRF 中。 载玻片被集中存储用于质量控制双重检查（所有载玻片的 10%）。

血红蛋白：血红蛋白水平是通过 HaemoCue™ 方法使用收集在比色杯上的血液样本测量的。 每种情况下的 Hb 水平都记录在 CRF 中。

全血图片 (FBP) 和肝功能测试 (LFT)：FBP 和 LFT 仅在 Kivunge 研究地点亚群中进行（GLP 子研究）。 使用 Cell-Dyn 1700™ 血液学分析仪（美国雅培实验室）获得 FBP。 LFT，包括 ALT、AST、Gamma-GT、白蛋白和胆红素，使用 BTS-310™ 光度计 UV-VIS（BioSystems，西班牙）获得。

体温和临床病史：医生/官员使用电子温度计测量患者的腋窝温度，记录详细的临床病史并进行临床检查。

PCR 滤纸样本：血液样本收集在 Whatman FTA 滤纸上。 干燥后，每个滤纸样品在 -20ºC (Kivunge) 或 +4ºC (Micheweni) 下储存在单独的塑料袋中，直到定期转移到 Kivunge 进行 -20ºC 长期储存。

HPLC 样本（仅 Kivunge）：在第 0 天和第 7 天从每位患者身上抽取大约 5ml 的静脉血用于 FBP 和 LFT 测试。 在 ASAQ 组中，100 微升这种血液被收集在特殊的滤纸上，用于阿莫地喹水平的高压液相色谱 (HPLC) 分析。 在 AL 组中，将 100 微升血浆（通过以 >3000rpm 离心 10 分钟分离）收集在特殊滤纸上，用于 HPLC 分析苯蒽浓度。 收集所有剩余的（最少 2ml）血浆并保存在 -20ºC 作为备用。

分子分析：裂殖子表面蛋白 2 (msp2) 的 PCR 基因分型被认为是恶性疟原虫感染多样性的最有用的单一遗传标记，用于区分再感染和真正的复发。 比较第 0 天和第 14 天至第 42 天寄生虫血症复发时的配对 PCR 结果。 msp2 的多态性重复块 3 的外部保守区域在初始反应中被放大，随后使用标准方案使用对两个等位基因家族 FC27 和 IC/3D7 特异的寡核苷酸引物进行两个嵌套反应。 pfmdr1 Y86N 和 pfcrt K76T 基因的单核苷酸蛋白 (SNP) 分析是根据已建立的基于 AluI 限制的 PCR-RFLP 协议进行的。 所有分子分析均在瑞典 KI 的疟疾研究中心进行。