Skuteczność Artesunate + Amodiaquine Versus Artemeter-lumefantrine w przypadku malarii Falciparum na Zanzibarze, 2005 (ACOII)

Wszystkie dzieci w odpowiedniej grupie wiekowej z klinicznymi objawami malarii w miejscu badania zostały uznane za potencjalne osoby badane. Opiekunowie tych dzieci zostali poinformowani o badaniu ustnie w języku suahili zgodnie z formularzem świadomej zgody. Ci, którzy nie chcieli wziąć udziału w badaniu, byli leczeni zgodnie z lokalną standardową procedurą.

W dniu 0 pacjent został przebadany w kierunku pasożytów przy użyciu mikroskopu świetlnego na preparatach krwi barwionych metodą Giemsy. Oceniono szczegółowy wywiad kliniczny i badanie kliniczne, w tym temperaturę pod pachą. Oceniono poziom hemoglobiny i pobrano próbki krwi na bibułę filtracyjną dla każdego dziecka w celu genotypowania pasożytów, a także w celu ewentualnego określenia poziomu we krwi różnych leków przeciwmalarycznych.

Opiekun został poproszony o przyprowadzenie dziecka z powrotem do ośrodka badawczego w dniach 1, 2, 3, 7, 14, 21, 28, 35 i 42. Jeśli tego nie zrobili, odwiedzano ich w domach, aby zapewnić odpowiednią opiekę. Podczas każdej wizyty kontrolnej badacz pytał o współistniejące leki i zdarzenia niepożądane, starannie wypełniając formularz raportu klinicznego (CRF).

Jeżeli w okresie obserwacji między 14 a 42 dniem dziecko wcześniej włączone do badania miało gorączkę, wszystkie badania i badania wykonano jak w dniu 0. Jeżeli u dziecka ponownie rozpoznano klinicznie i parazytologicznie malarię, leczono jako nowa infekcja. W przypadku rozpoznania ciężkiej malarii w okresie obserwacji pacjent otrzymał leczenie ratunkowe (doustne lub dożylne podanie chininy) i został wycofany z badania. Za każdym razem, gdy zakwalifikowane dziecko prezentowało się w placówce, wypełniano CRF w odniesieniu do stanu klinicznego i laboratoryjnego, zastosowanego leczenia i możliwych zdarzeń niepożądanych.

Oceny kliniczne i laboratoryjne obejmowały:

Rozmaz malarii: grube rozmazy krwi barwione metodą Giemsy, badane za pomocą mikroskopu elektrycznego lub słonecznego w miejscu badania przez doświadczonego mikroskopistę. Liczbę pasożytów obliczono jako liczbę pasożytów widzianych na tle 200 leukocytów w grubym rozmazie krwi i odnotowano w CRF dla odpowiedniej okazji. Slajdy przechowywano centralnie do kontroli jakości (10% wszystkich preparatów).

Hemoglobina: Poziomy hemoglobiny mierzono metodą HaemoCue™ przy użyciu próbek krwi pobranych do kuwet. Poziomy Hb rejestrowano w CRF dla każdej okazji.

Pełny obraz krwi (FBP) i test czynności wątroby (LFT): FBP i LFT wykonano wyłącznie w subpopulacji ośrodka Kivunge (badanie podrzędne GLP). FBP uzyskano przy użyciu analizatora hematologicznego Cell-Dyn 1700™ (Abbott Laboratories, USA). LFT, w tym ALT, AST, Gamma-GT, albuminę i bilirubinę, uzyskano za pomocą fotometru BTS-310™ UV-VIS (BioSystems, Hiszpania).

Temperatura i historia kliniczna: Lekarz/oficer medyczny zmierzył temperaturę pod pachą pacjenta za pomocą termometru elektronicznego i zebrał szczegółowy wywiad kliniczny, a także przeprowadził badanie kliniczne.

Próbka bibuły filtracyjnej PCR: Próbki krwi pobrano na bibułę filtracyjną Whatman FTA. Po wyschnięciu każdą próbkę bibuły filtracyjnej przechowywano w oddzielnych plastikowych torebkach w temperaturze -20ºC (Kivunge) lub +4ºC (Micheweni), aż do regularnego przenoszenia do Kivunge w celu długoterminowego przechowywania w temperaturze -20ºC.

Próbki HPLC (tylko Kivunge): Od każdego pacjenta pobrano około 5 ml krwi żylnej w dniach 0 i 7 do testów FBP i LFT. W grupie ASAQ 100 µl tej krwi pobrano na specjalne bibuły filtracyjne do analizy poziomu amodiachiny za pomocą wysokosprawnej chromatografii cieczowej (HPLC). W grupie AL 100 µl osocza (oddzielonego przez wirowanie przy >3000rpm przez 10min) zebrano na specjalne bibuły filtracyjne do analizy HPLC poziomów lumefantryny. Całość pozostałego (minimum 2 ml) osocza zebrano i przechowywano w temperaturze -20ºC jako zapas.

Analizy molekularne: genotypowanie PCR merozoitowego białka powierzchniowego 2 (msp2), uważanego za najbardziej pouczający pojedynczy marker genetyczny wielości infekcji P. falciparum, przeprowadzono w celu odróżnienia reinfekcji od prawdziwej ponownej infekcji. Sparowane wyniki PCR porównano między dniem 0 a czasem nawracającej parazytemii od dnia 14 do dnia 42. Zewnętrzny konserwatywny region polimorficznego powtarzalnego bloku 3 msp2 zamplifikowano w początkowej reakcji, po której nastąpiły dwie zagnieżdżone reakcje ze starterami oligonukleotydowymi specyficznymi dla dwóch rodzin alleli FC27 i IC/3D7, stosując standardowy protokół. Analizę białek pojedynczych nukleotydów (SNP) genów pfmdr1 Y86N i pfcrt K76T przeprowadzono zgodnie z ustalonymi protokołami PCR-RFLP opartymi na restrykcjach AluI. Wszystkie analizy molekularne przeprowadzono w Malaria Research Unit, KI, Szwecja.