Az Artesunate + Amodiaquine kontra Artemether-lumefantrin hatékonysága Falciparum maláriában Zanzibárban, 2005 (ACOII)

A megfelelő korcsoportba tartozó, a malária klinikai tüneteit mutató összes gyermeket lehetséges vizsgálati alanynak tekintették. Ezeknek a gyerekeknek a gyámjait szóban tájékoztatták a vizsgálatról szuahéli nyelven, a beleegyező nyilatkozatnak megfelelően. Azokat, akik nem voltak hajlandók részt venni a vizsgálatban, a helyi standard eljárás szerint kezelték.

A 0. napon a pácienst Giemsával festett vérfilmeken fénymikroszkóppal vizsgáltuk parazitákra. Részletes klinikai anamnézist és klinikai vizsgálatot végeztek, beleértve a hónalj hőmérsékletét is. Megvizsgáltuk a hemoglobint, és szűrőpapíron vérmintákat gyűjtöttünk minden gyermekről a paraziták genotipizálására, valamint a különböző maláriaellenes szerek vérszintjének lehetséges meghatározására.

A gyámot arra kérték, hogy az 1., 2., 3., 7., 14., 21., 28., 35. és 42. napon vigye vissza gyermekét a vizsgálati helyszínre. Ha ez nem sikerült, meglátogatták őket otthonukban, hogy biztosítsák a megfelelő nyomon követést. A vizsgáló minden egyes utánkövetéskor rákérdezett az egyidejűleg alkalmazott gyógyszerekre és a mellékhatásokra, gondosan kitöltve a klinikai jelentés űrlapját (CRF).

Ha a 14. és 42. nap közötti követés során egy korábban a vizsgálatba bevont gyermek lázas volt, minden tesztet és vizsgálatot a 0. napon végeztek el. Ha a gyermeknél klinikailag és parazitológiailag ismét maláriát diagnosztizáltak, kezelték. új fertőzésként. Ha súlyos maláriát diagnosztizáltak a követési időszakban, a pácienst mentőkezelésben (orális vagy intravénás kinin) kapták, és kivonták a vizsgálatból. Minden alkalommal, amikor egy beiratkozott gyermek megjelent a helyszínen, a CRF-t kitöltötték a klinikai és laboratóriumi állapot, az adott kezelés és a lehetséges nemkívánatos események tekintetében.

A klinikai és laboratóriumi vizsgálatok a következőket tartalmazták:

Malária kenet: Giemsa festett vastag vérfilmeket vizsgált elektromos vagy napfénymikroszkóp segítségével a vizsgálati helyszínen egy tapasztalt mikroszkóppal. A paraziták számát a vastag vérfilmben 200 leukocitával szemben észlelt paraziták számából számítottuk ki, és a megfelelő alkalomra rögzítettük a CRF-ben. A tárgylemezeket központilag tároltuk a minőségellenőrzés érdekében (az összes tárgy 10%-a).

Hemoglobin: A hemoglobinszintet a HaemoCue™ módszerrel mértük küvettákon gyűjtött vérminták segítségével. A Hb-szinteket minden alkalommal rögzítettük a CRF-ben.

Teljes vérkép (FBP) és májfunkciós teszt (LFT): Az FBP-t és az LFT-t csak a Kivunge vizsgálati hely alpopulációjában végezték el (GLP alvizsgálat). Az FBP-t a Cell-Dyn 1700™ Hematology Analyzer (Abbott Laboratories, USA) alkalmazásával nyertük. Az LFT-t, beleértve az ALT-t, AST-t, Gamma-GT-t, albumint és bilirubint, a BTS-310™ Photometer UV-VIS (BioSystems, Spanyolország) segítségével nyertük.

Hőmérséklet és klinikai anamnézis: Egy orvos/tisztviselő elektronikus hőmérővel megmérte a páciens hónaljhőmérsékletét, és részletes klinikai anamnézist vett fel, valamint klinikai vizsgálatot végzett.

PCR szűrőpapír minta: A vérmintákat Whatman FTA szűrőpapírokon vettük. Amikor megszáradt, minden szűrőpapír mintát külön műanyag zacskókban tároltunk -20 ºC-on (Kivunge) vagy +4 ºC-on (Micheweni) mindaddig, amíg rendszeresen át nem vitték Kivungébe -20 ºC-os hosszú távú tárolásra.

HPLC minták (csak Kivunge): Körülbelül 5 ml vénás vért vettünk minden betegtől a 0. és a 7. napon az FBP és LFT tesztekhez. Az ASAQ csoportban ebből a vérből 100 µl-t gyűjtöttünk össze speciális szűrőpapírokon az amodiakinszintek nagynyomású folyadékkromatográfiás (HPLC) elemzéséhez. Az AL csoportban 100 µl plazmát (amelyet >3000 fordulat/percnél 10 percig centrifugálva választottunk el) speciális szűrőpapírokra gyűjtöttünk a lumefantrinszintek HPLC-elemzésére. Az összes maradék (minimum 2 ml) plazmát összegyűjtöttük, és tartalékként -20 °C-on tartottuk.

Molekuláris elemzések: A merozoit felszíni fehérje 2 (msp2) PCR genotipizálását végezték el, amely a P. falciparum fertőzések multiplicitásának leginformatívabb egyetlen genetikai markere, az újrafertőződés és a valódi recrudescencia megkülönböztetésére. A páros PCR-eredményeket a 0. nap és a 14. naptól a 42. napig tartó visszatérő parazitaemia idején hasonlították össze. Az msp2 3. polimorf ismétlődő blokkjának külső konzervált régióját egy kezdeti reakcióban amplifikáltuk, majd két egymásba ágyazott reakció követte a két allélcsaládra, az FC27-re és IC/3D7-re specifikus oligonukleotid primerekkel, standard protokoll alkalmazásával. A pfmdr1 Y86N és pfcrt K76T gének Single Nucleotide Proteins (SNP) analízisét az AluI restrikciós alapú PCR-RFLP protokollok szerint végeztük. Valamennyi molekuláris elemzést a svédországi KI Malaria Research Unitban végeztek.