Účinnost Artesunate + Amodiaquine versus Artemether-lumefantrin pro Falciparum Malaria na Zanzibaru, 2005 (ACOII)

Všechny děti ve správné věkové skupině s klinickými příznaky malárie v místě studie byly považovány za možné subjekty studie. Opatrovníci těchto dětí byli o studii informováni ústně ve svahilštině podle formuláře informovaného souhlasu. Ti, kteří nebyli ochotni se studie zúčastnit, byli léčeni podle místního standardního postupu.

V den 0 byl pacient testován na parazity pomocí světelné mikroskopie na krevních filmech obarvených Giemsou. Byla hodnocena podrobná klinická anamnéza a klinické vyšetření včetně axilární teploty. Byl stanoven hemoglobin a každému dítěti byly odebrány vzorky krve na filtrační papír pro genotypizaci parazitů a také pro případné stanovení krevních hladin různých antimalarik.

Opatrovník byl požádán, aby přivedl své dítě zpět na místo studie 1., 2., 3., 7., 14., 21., 28., 35. a 42. den. Pokud tak neučinili, byli navštíveni ve svých domovech, aby bylo zajištěno řádné sledování. Při každém dalším sledování se zkoušející zeptal na souběžnou medikaci a nežádoucí účinky a pečlivě vyplnil formulář klinické zprávy (CRF).

Pokud během sledování mezi 14. a 42. dnem mělo dítě dříve zařazené do studie horečku, všechny testy a vyšetření proběhly jako v den 0. Pokud byla u dítěte znovu klinicky a parazitologicky diagnostikována malárie, bylo léčeno jako nová infekce. Pokud byla během období sledování diagnostikována závažná malárie, byla pacientovi poskytnuta záchranná léčba (orální nebo intravenózní chinin) a byl vyřazen ze studie. Pokaždé, když se zapsané dítě dostavilo na místo, byl vyplněn CRF s ohledem na klinický a laboratorní stav, podanou léčbu a možné nežádoucí účinky.

Klinická a laboratorní vyšetření zahrnovala:

Nátěr z malárie: Silné krevní filmy obarvené Giemsou zkoumané pomocí elektrického nebo slunečního mikroskopu v místě studie zkušeným mikroskopem. Počet parazitů byl vypočten jako počet parazitů pozorovaných proti 200 leukocytům v tlustém krevním filmu a zaznamenán v CRF pro správnou příležitost. Sklíčka byla centrálně uložena pro kontrolu kvality (10 % všech preparátů).

Hemoglobin: Hladiny hemoglobinu byly měřeny metodou HaemoCue™ pomocí krevních vzorků odebraných do kyvet. Hladiny Hb byly zaznamenány v CRF pro každou příležitost.

Kompletní krevní obraz (FBP) a jaterní funkční test (LFT): FBP a LFT byly provedeny pouze v subpopulaci místa studie Kivunge (podstudie GLP). FBP byl získán pomocí Hematologického analyzátoru Cell-Dyn 1700™ (Abbott Laboratories, USA). LFT, včetně ALT, AST, Gamma-GT, albuminu a bilirubinu, byly získány pomocí fotometru BTS-310™ UV-VIS (BioSystems, Španělsko).

Teplota a klinická anamnéza: Lékař/důstojník změřil pacientovu axilární teplotu pomocí elektronického teploměru a odebral podrobnou klinickou anamnézu a provedl klinické vyšetření.

Vzorek PCR filtračního papíru: Vzorky krve byly odebrány na filtrační papíry Whatman FTA. Po vysušení byl každý vzorek filtračního papíru skladován v samostatných plastových sáčcích při -20 °C (Kivunge) nebo +4 °C (Micheweni), dokud nebyl pravidelně přenesen do Kivunge pro dlouhodobé skladování -20 °C.

Vzorky HPLC (pouze Kivunge): Každému pacientovi bylo odebráno přibližně 5 ml žilní krve ve dnech 0 a 7 pro testy FBP a LFT. Ve skupině ASAQ bylo 100 µl této krve odebráno na speciální filtrační papíry pro analýzu hladin amodiachinu vysokotlakou kapalinovou chromatografií (HPLC). Ve skupině AL bylo odebráno 100 ul plazmy (oddělené centrifugací při >3000 ot./min po dobu 10 minut) na speciálních filtračních papírech pro HPLC analýzu hladin lumefantrinu. Veškerá zbývající (minimálně 2 ml) plazmy byla shromážděna a udržována při -20 °C jako záloha.

Molekulární analýzy: Pro odlišení reinfekcí od skutečné rerudescence byla provedena PCR genotypizace merozoitového povrchového proteinu 2 (msp2), považovaného za nejinformativnější samostatný genetický marker pro mnohočetnost infekcí P. falciparum. Párové výsledky PCR byly porovnány mezi dnem 0 a v době rekurentní parazitémie ode dne 14 do dne 42. Vnější konzervovaná oblast polymorfního repetitivního bloku 3 msp2 byla amplifikována v počáteční reakci následované dvěma vnořenými reakcemi s oligonukleotidovými primery specifickými pro dvě alelické rodiny FC27 a IC/3D7 za použití standardního protokolu. Analýza jednoduchých nukleotidových proteinů (SNP) genů pfmdr1 Y86N a pfcrt K76T byla provedena podle zavedených protokolů PCR-RFLP založených na Alul restrikci. Všechny molekulární analýzy byly provedeny v Malaria Research Unit, KI, Švédsko.