Efficacité de l'artésunate + Amodiaquine par rapport à l'artéméther-luméfantrine pour le paludisme à Falciparum à Zanzibar, 2005 (ACOII)

Tous les enfants du bon groupe d'âge présentant des signes cliniques de paludisme sur le site de l'étude ont été considérés comme des sujets d'étude possibles. Les tuteurs de ces enfants ont été informés de l'étude oralement en swahili selon le formulaire de consentement éclairé. Ceux qui n'étaient pas disposés à participer à l'étude ont été traités selon la procédure standard locale.

Au jour 0, le patient a été testé pour les parasites en utilisant la microscopie optique sur des frottis sanguins colorés au Giemsa. Une histoire clinique détaillée et un examen clinique comprenant une température axillaire ont été évalués. L'hémoglobine a été évaluée et des échantillons de sang ont été prélevés sur du papier filtre pour chaque enfant pour le génotypage des parasites ainsi que pour la détermination éventuelle des taux sanguins de différents médicaments antipaludiques.

Le tuteur a été invité à ramener son enfant sur le site de l'étude les jours 1, 2, 3, 7, 14, 21, 28, 35 et 42. S'ils ne le faisaient pas, ils recevaient des visites à leur domicile pour assurer un suivi approprié. A chaque suivi, l'investigateur a posé des questions sur les médicaments concomitants et les événements indésirables, en remplissant soigneusement le formulaire de rapport clinique (CRF).

Si, au cours du suivi entre le jour 14 et le jour 42, un enfant précédemment inclus dans l'étude présentait de la fièvre, tous les tests et examens étaient exécutés comme au jour 0. Si l'enfant recevait à nouveau un diagnostic clinique et parasitologique de paludisme, il était traité comme une nouvelle infection. En cas de diagnostic de paludisme grave au cours de la période de suivi, le patient a reçu un traitement de secours (quinine orale ou intraveineuse) et a été retiré de l'étude. Chaque fois qu'un enfant inscrit s'est présenté sur le site, le CRF a été complété en ce qui concerne l'état clinique et de laboratoire, le traitement administré et les événements indésirables possibles.

Les évaluations cliniques et de laboratoire comprenaient :

Frottis de paludisme : gouttes de sang épaisses colorées au Giemsa examinées à l'aide d'un microscope électrique ou solaire sur le site d'étude par un microscopiste expérimenté. Le nombre de parasites a été calculé comme le nombre de parasites observés contre 200 leucocytes dans le frottis sanguin épais et enregistré dans le CRF pour l'occasion correcte. Les lames ont été stockées de manière centralisée pour les contrôles de qualité (10 % de toutes les lames).

Hémoglobine : les taux d'hémoglobine ont été mesurés par la méthode HaemoCue™ à l'aide d'échantillons de sang prélevés sur des cuvettes. Les niveaux d'Hb ont été enregistrés dans le CRF pour chaque occasion.

Image sanguine complète (FBP) et test de la fonction hépatique (LFT) : FBP et LFT ont été réalisés dans la sous-population du site d'étude de Kivunge uniquement (sous-étude BPL). Le FBP a été obtenu à l'aide de l'analyseur d'hématologie Cell-Dyn 1700™ (Abbott Laboratories, USA). LFT, y compris ALT, AST, Gamma-GT, albumine et bilirubine, a été obtenu à l'aide du photomètre UV-VIS BTS-310 ™ (BioSystems, Espagne).

Température et antécédents cliniques : Un médecin/officier médical a mesuré la température axillaire du patient à l'aide d'un thermomètre électronique et a pris un historique clinique détaillé ainsi qu'un examen clinique.

Échantillon de papier filtre PCR : Des échantillons de sang ont été prélevés sur des papiers filtres Whatman FTA. Une fois sec, chaque échantillon de papier filtre a été stocké dans des sacs en plastique séparés à -20 °C (Kivunge) ou +4 °C (Micheweni) jusqu'à ce qu'il soit régulièrement transféré à Kivunge pour un stockage à long terme à -20 °C.

Échantillons HPLC (Kivunge uniquement) : Environ 5 ml de sang veineux ont été prélevés sur chaque patient aux jours 0 et 7 pour les tests FBP et LFT. Dans le groupe ASAQ, 100 µl de ce sang ont été prélevés sur des papiers filtres spéciaux pour l'analyse par chromatographie liquide à haute pression (HPLC) des niveaux d'amodiaquine. Dans le groupe AL, 100 µl de plasma (séparés par centrifugation à > 3 000 tr/min pendant 10 min) ont été collectés sur des papiers filtres spéciaux pour l'analyse HPLC des niveaux de luméfantrine. Tout le reste (minimum 2 ml) de plasma a été collecté et conservé à -20 °C en réserve.

Analyses moléculaires : Le génotypage par PCR de la protéine de surface de mérozoïte 2 (msp2), considérée comme le marqueur génétique unique le plus informatif de la multiplicité des infections à P. falciparum, a été effectué pour différencier les réinfections de la véritable recrudescence. Les résultats de PCR appariés ont été comparés entre le jour 0 et au moment de la parasitémie récurrente du jour 14 au jour 42. La région conservée externe du bloc répétitif polymorphe 3 de msp2 a été amplifiée dans une réaction initiale suivie de deux réactions imbriquées avec des amorces oligonucléotidiques spécifiques des deux familles alléliques FC27 et IC/3D7, en utilisant un protocole standard. L'analyse des protéines à nucléotide unique (SNP) des gènes pfmdr1 Y86N et pfcrt K76T a été effectuée conformément aux protocoles PCR-RFLP établis basés sur la restriction AluI. Toutes les analyses moléculaires ont été effectuées à l'unité de recherche sur le paludisme, KI, Suède.