Werkzaamheid van artesunaat + amodiaquine versus artemether-lumefantrine voor Falciparum Malaria in Zanzibar, 2005 (ACOII)

Alle kinderen in de juiste leeftijdsgroep die klinische tekenen van malaria vertoonden op de onderzoekslocatie werden beschouwd als mogelijke proefpersonen. De voogden van deze kinderen werden mondeling in het Swahili geïnformeerd over het onderzoek volgens het toestemmingsformulier. Degenen die niet bereid waren deel te nemen aan het onderzoek werden behandeld volgens de lokale standaardprocedure.

Op dag 0 werd de patiënt getest op parasieten met behulp van lichtmicroscopie op met Giemsa gekleurde bloedfilms. Een gedetailleerde klinische geschiedenis en een klinisch onderzoek inclusief een okseltemperatuur werden beoordeeld. Hemoglobine werd beoordeeld en bloedmonsters werden verzameld op filterpapier voor elk kind voor genotypering van de parasieten en voor mogelijke bepaling van bloedspiegels van verschillende antimalariamiddelen.

De voogd werd gevraagd om hun kind terug te brengen naar de onderzoekslocatie op dag 1, 2, 3, 7, 14, 21, 28, 35 en 42. Als ze dat niet deden, werden ze thuis bezocht om een ​​goede follow-up te verzekeren. Bij elke follow-up vroeg de onderzoeker naar gelijktijdige medicatie en bijwerkingen, waarbij hij het klinische rapportformulier (CRF) zorgvuldig invulde.

Als tijdens de follow-up tussen dag 14 en 42 een kind dat eerder in de studie was opgenomen koorts kreeg, werden alle tests en onderzoeken uitgevoerd zoals op dag 0. Als het kind opnieuw klinisch en parasitologisch werd gediagnosticeerd met malaria, werd hij behandeld als een nieuwe infectie. Als tijdens de follow-upperiode ernstige malaria werd vastgesteld, kreeg de patiënt een reddingsbehandeling (orale of intraveneuze kinine) en werd hij uit het onderzoek teruggetrokken. Elke keer dat een ingeschreven kind zich op de locatie presenteerde, werd het CRF ingevuld met betrekking tot de klinische en laboratoriumstatus, de gegeven behandeling en mogelijke bijwerkingen.

Klinische en laboratoriumbeoordelingen omvatten:

Malaria-uitstrijkje: Giemsa-gekleurde dikke bloedfilms onderzocht met behulp van een elektrische of zonlichtmicroscoop op de onderzoekslocatie door een ervaren microscopist. Het aantal parasieten werd berekend als het aantal parasieten dat werd waargenomen tegen 200 leukocyten in de dikke bloedfilm en voor de juiste gelegenheid in het CRF geregistreerd. De objectglaasjes werden centraal opgeslagen voor kwaliteitscontroles dubbelcheck (10% van alle objectglaasjes).

Hemoglobine: hemoglobinewaarden werden gemeten met de HaemoCue™-methode met behulp van bloedmonsters verzameld op cuvetten. Per gelegenheid werden de Hb-waarden in de CRF vastgelegd.

Full Blood Picture (FBP) en leverfunctietest (LFT): FBP en LFT werden alleen uitgevoerd in de Kivunge Study Site subpopulatie (GLP Sub Study). FBP werd verkregen met behulp van de Cell-Dyn 1700™ Hematology Analyzer (Abbott Laboratories, VS). LFT, inclusief ALT, AST, Gamma-GT, albumine en bilirubine, werd verkregen met behulp van de BTS-310™ Photometer UV-VIS (BioSystems, Spanje).

Temperatuur en klinische geschiedenis: een arts/officier mat de okseltemperatuur van de patiënt met behulp van een elektronische thermometer en nam een ​​gedetailleerde klinische geschiedenis op en voerde een klinisch onderzoek uit.

PCR-filterpapiermonster: bloedmonsters werden verzameld op Whatman FTA-filterpapier. Eenmaal droog werd elk filtreerpapiermonster opgeslagen in afzonderlijke plastic zakken bij -20°C (Kivunge) of +4°C (Micheweni) totdat het regelmatig werd overgebracht naar Kivunge voor langdurige opslag bij -20°C.

HPLC-monsters (alleen Kivunge): ongeveer 5 ml veneus bloed werd op dag 0 en 7 bij elke patiënt afgenomen voor FBP- en LFT-testen. In de ASAQ-groep werd 100 µl van dit bloed verzameld op speciaal filterpapier voor hogedrukvloeistofchromatografie (HPLC)-analyse van amodiaquine-niveaus. In de AL-groep werd 100 µl plasma (gescheiden door centrifugatie bij >3000 rpm gedurende 10 minuten) verzameld op speciaal filterpapier voor HPLC-analyse van lumefantrine-niveaus. Al het resterende plasma (minimaal 2 ml) werd verzameld en bewaard bij -20°C als back-up.

Moleculaire analyses: PCR-genotypering van merozoïet oppervlakte-eiwit 2 (msp2), beschouwd als de meest informatieve enkele genetische marker voor multipliciteit van P. falciparum-infecties, werd uitgevoerd om herinfecties te onderscheiden van echte recrudescentie. Gepaarde PCR-resultaten werden vergeleken tussen dag 0 en op het moment van recidiverende parasitemie van dag 14 tot dag 42. Het buitenste geconserveerde gebied van het polymorfe repetitieve blok 3 van msp2 werd geamplificeerd in een eerste reactie, gevolgd door twee geneste reacties met oligonucleotideprimers die specifiek zijn voor de twee allelische families FC27 en IC/3D7, met behulp van een standaardprotocol. De analyse van de enkelvoudige nucleotide-eiwitten (SNP's) van de pfmdr1 Y86N- en pfcrt K76T-genen werd uitgevoerd volgens gevestigde AluI-restrictiegebaseerde PCR-RFLP-protocollen. Alle moleculaire analyses werden uitgevoerd bij de Malaria Research Unit, KI, Zweden.