Effekten av Artesunate + Amodiaquine versus Artemether-lumefantrin for Falciparum Malaria i Zanzibar, 2005 (ACOII)

Alle barn i riktig aldersgruppe med kliniske tegn på malaria på studiestedet ble ansett som mulige studieobjekter. Foresatte til disse barna ble informert om studien muntlig på swahili i henhold til skjemaet for informert samtykke. De som ikke var villige til å delta i studien ble behandlet i henhold til lokal standardprosedyre.

På dag 0 ble pasienten testet for parasitter ved bruk av lysmikroskopi på Giemsa-fargede blodfilmer. En detaljert klinisk historie og en klinisk undersøkelse inkludert en aksillær temperatur ble vurdert. Hemoglobin ble vurdert og blodprøver ble samlet på filterpapir for hvert barn for genotyping av parasittene samt for mulig bestemmelse av blodnivåer av ulike antimalariamedisiner.

Vergen ble bedt om å bringe barnet tilbake til studiestedet på dag 1, 2, 3, 7, 14, 21, 28, 35 og 42. Hvis de ikke klarte det, ble de besøkt i hjemmene deres for å sikre riktig oppfølging. Ved hver oppfølging spurte etterforskeren om samtidig medisinering og bivirkninger, og fylte nøye ut det kliniske rapportskjemaet (CRF).

Dersom et barn under oppfølgingen mellom dag 14 og 42 presenterte feber, ble alle tester og undersøkelser kjørt som på dag 0. Dersom barnet ble klinisk og parasitologisk diagnostisert med malaria igjen, ble det behandlet som en ny infeksjon. Ved diagnosen alvorlig malaria i oppfølgingsperioden ble pasienten gitt redningsbehandling (oral eller intravenøs kinin) og trukket seg fra studien. Hver gang et påmeldt barn presenterte seg på stedet ble CRF fullført med hensyn til klinisk og laboratoriestatus, gitt behandling og mulige bivirkninger.

Kliniske og laboratorievurderinger inkluderte:

Malariautstryk: Giemsa farget tykke blodfilmer undersøkt ved hjelp av elektrisk mikroskop eller sollysmikroskop på studiestedet av en erfaren mikroskopist. Antall parasitter ble beregnet som antall parasitter sett mot 200 leukocytter i den tykke blodfilmen og registrert i CRF for riktig anledning. Lysbildene ble lagret for kvalitetskontroll dobbeltsjekk (10 % av alle lysbilder) sentralt.

Hemoglobin: Hemoglobinnivåer ble målt ved hjelp av HaemoCue™-metoden ved bruk av blodprøver tatt på kyvetter. Hb-nivåene ble registrert i CRF for hver anledning.

Fullblodsbilde (FBP) og leverfunksjonstest (LFT): FBP og LFT ble kun utført i underpopulasjonen av Kivunge Study Site (GLP Sub Study). FBP ble oppnådd ved bruk av Cell-Dyn 1700™ Hematology Analyzer (Abbott Laboratories, USA). LFT, inkludert ALT, AST, Gamma-GT, albumin og bilirubin, ble oppnådd ved bruk av BTS-310™ Photometer UV-VIS (BioSystems, Spania).

Temperatur og klinisk historie: En lege/offiser målte pasientens aksillære temperatur ved hjelp av et elektronisk termometer og tok en detaljert klinisk historie samt utførte en klinisk undersøkelse.

PCR-filterpapirprøve: Blodprøver ble samlet på Whatman FTA-filterpapir. Når den var tørr, ble hver filterpapirprøve lagret i separate plastposer ved -20ºC (Kivunge) eller +4ºC (Micheweni) inntil den regelmessig ble overført til Kivunge for -20ºC langtidslagring.

HPLC-prøver (kun Kivunge): Omtrent 5 ml veneblod ble trukket fra hver pasient på dag 0 og 7 for FBP- og LFT-tester. I ASAQ-gruppen ble 100 µl av dette blodet samlet på spesialfilterpapir for høytrykksvæskekromatografi (HPLC) analyse av amodiakinnivåer. I AL-gruppen ble 100 µl plasma (separert ved sentrifugering ved >3000 rpm i 10 minutter) samlet på spesialfilterpapir for HPLC-analyse av lumefantrinnivåer. All gjenværende (minimum 2 ml) plasma ble samlet og holdt ved -20ºC som en reserve.

Molekylære analyser: PCR-genotyping av merozoittoverflateprotein 2 (msp2), ansett som den mest informative enkelt genetiske markøren for mangfoldet av P. falciparum-infeksjoner, ble utført for å skille reinfeksjoner fra ekte gjengang. Parede PCR-resultater ble sammenlignet mellom dag 0 og på tidspunktet for tilbakevendende parasitemi fra dag 14 til dag 42. Den ytre konserverte regionen av den polymorfe repeterende blokk 3 av msp2 ble amplifisert i en initial reaksjon etterfulgt av to nestede reaksjoner med oligonukleotidprimere spesifikke for de to allelfamiliene FC27 og IC/3D7, ved bruk av en standardprotokoll. pfmdr1 Y86N- og pfcrt K76T-genenes Single Nucleotide Proteins (SNPs)-analyse ble utført i henhold til etablerte AluI-restriksjonsbaserte PCR-RFLP-protokoller. Alle molekylære analyser ble utført ved malariaforskningsenheten, KI, Sverige.