Artesunate + Amodiaquine vs. Artemether-lumefantrine teho Falciparum-malariaan Sansibarissa, 2005 (ACOII)

Kaikkia oikean ikäisiä lapsia, joilla oli malarian kliinisiä oireita tutkimuspaikalla, pidettiin mahdollisina tutkimuskohteina. Näiden lasten huoltajille tiedotettiin tutkimuksesta suullisesti swahiliksi tietoisen suostumuslomakkeen mukaisesti. Ne, jotka eivät halunneet osallistua tutkimukseen, hoidettiin paikallisten standardimenettelyjen mukaisesti.

Päivänä 0 potilas testattiin loisten varalta käyttämällä valomikroskopiaa Giemsa-värjätyillä verikalvoilla. Arvioitiin yksityiskohtainen kliininen historia ja kliininen tutkimus, mukaan lukien kainalolämpötila. Hemoglobiini arvioitiin ja jokaisesta lapsesta kerättiin suodatinpaperille verinäytteitä loisten genotyypin määrittämiseksi sekä eri malarialääkkeiden mahdollisen veren pitoisuuden määrittämiseksi.

Huoltajaa pyydettiin tuomaan lapsensa takaisin tutkimusalueelle päivinä 1, 2, 3, 7, 14, 21, 28, 35 ja 42. Jos he eivät tehneet niin, he vierailivat heidän kodeissaan asianmukaisen seurannan varmistamiseksi. Jokaisessa seurannassa tutkija kysyi samanaikaisista lääkityksistä ja haittatapahtumista ja täytti huolellisesti kliinisen raporttilomakkeen (CRF).

Jos seurannan aikana päivien 14 ja 42 välillä aiemmin tutkimukseen osallistuneella lapsella oli kuumetta, kaikki testit ja tutkimukset suoritettiin kuten päivänä 0. Jos lapsella todettiin kliinisesti ja parasitologisesti malaria uudelleen, hänet hoidettiin uutena infektiona. Jos potilaalle diagnosoitiin vakava malaria seurantajakson aikana, hänelle annettiin pelastushoitoa (suun kautta tai suonensisäisesti kiniiniä) ja hänet poistettiin tutkimuksesta. Joka kerta, kun tutkimukseen merkitty lapsi saapui paikalle, CRF täydennettiin kliinisen ja laboratoriotilanteen, annetun hoidon ja mahdollisten haittatapahtumien osalta.

Kliiniset ja laboratoriotutkimukset sisälsivät:

Malarianäyte: Giemsa värjäsi paksuja verikalvoja, jotka kokenut mikroskooppi tutki sähkö- tai auringonvalomikroskoopilla tutkimuspaikalla. Loisten lukumäärä laskettiin niiden loisten lukumääränä, jotka nähtiin paksussa verikalvossa 200 leukosyyttiä vastaan ​​ja kirjattiin CRF:ään oikeaan tapaukseen. Objektilasit säilytettiin keskitetysti laaduntarkastuksia varten (10 % kaikista dioista).

Hemoglobiini: Hemoglobiinitasot mitattiin HaemoCue™-menetelmällä käyttämällä kyvetteihin kerättyjä verinäytteitä. Hb-tasot kirjattiin CRF:ään kussakin tapauksessa.

Full Blood Picture (FBP) ja maksan toimintatesti (LFT): FBP ja LFT suoritettiin vain Kivungen tutkimusalueen alapopulaatiossa (GLP-alatutkimus). FBP saatiin käyttämällä Cell-Dyn 1700™ Hematology Analyzer -laitetta (Abbott Laboratories, USA). LFT, mukaan lukien ALT, AST, Gamma-GT, albumiini ja bilirubiini, saatiin käyttämällä BTS-310™ Photometer UV-VIS -laitetta (BioSystems, Espanja).

Lämpötila ja kliininen historia: Lääkäri/poliklinikka mittasi potilaan kainaloiden lämpötilan elektronisella lämpömittarilla ja otti yksityiskohtaisen kliinisen historian sekä suoritti kliinisen tutkimuksen.

PCR-suodatinpaperinäyte: Verinäytteet kerättiin Whatman FTA -suodatinpapereille. Kuivuttuaan jokainen suodatinpaperinäyte säilytettiin erillisissä muovipusseissa -20 ºC:ssa (Kivunge) tai +4 ºC:ssa (Micheweni), kunnes se siirrettiin säännöllisesti Kivungeen -20 ºC pitkäaikaista varastointia varten.

HPLC-näytteet (vain Kivunge): Jokaiselta potilaalta otettiin noin 5 ml laskimoverta päivinä 0 ja 7 FBP- ja LFT-testejä varten. ASAQ-ryhmässä 100 ui tätä verta kerättiin erityisille suodatinpapereille amodiakiinitasojen korkeapainenestekromatografia (HPLC) -analyysiä varten. AL-ryhmässä 100 ui plasmaa (erotettu sentrifugoimalla > 3000 rpm 10 minuutin ajan) kerättiin erityisille suodatinpapereille lumefantriinitasojen HPLC-analyysiä varten. Kaikki jäljellä oleva (vähintään 2 ml) plasma kerättiin ja pidettiin -20 ºC:ssa varmuuskopiona.

Molekyylianalyysit: PCR-genotyypitys merotsoiitin pintaproteiinille 2 (msp2), jota pidettiin informatiivisimpana yksittäisenä geneettisenä markkerina P. falciparum -infektioiden moninkertaisuudelle, suoritettiin uudelleeninfektioiden erottamiseksi todellisesta uusiutumisesta. Parillisia PCR-tuloksia verrattiin päivän 0 ja toistuvan parasitemian aikana päivästä 14 päivään 42. Msp2:n polymorfisen toistuvan lohkon 3 ulompi konservoitunut alue monistettiin alkureaktiossa, jota seurasi kaksi sisäkkäistä reaktiota kahdelle alleeliperheelle FC27 ja IC/3D7 spesifisten oligonukleotidialukkeiden kanssa käyttäen standardiprotokollaa. Pfmdr1 Y86N- ja pfcrt K76T -geenien SNP:t (Single Nucleotide Proteins) -analyysi tehtiin vakiintuneiden AluI-restriktioon perustuvien PCR-RFLP-protokollien mukaisesti. Kaikki molekyylianalyysit suoritettiin Malaria Research Unitissa, KI, Ruotsi.