Эффективность артесуната + амодиахина по сравнению с артеметер-лумефантрином при малярии Falciparum на Занзибаре, 2005 г. (ACOII)

Все дети подходящей возрастной группы с клиническими признаками малярии в месте проведения исследования считались возможными субъектами исследования. Опекуны этих детей были проинформированы об исследовании устно на суахили в соответствии с формой информированного согласия. Тех, кто не хотел участвовать в исследовании, лечили в соответствии с местной стандартной процедурой.

В 0-й день больной был обследован на наличие паразитов с помощью световой микроскопии окрашенных по Гимзе мазков крови. Был оценен подробный анамнез и клиническое обследование, включая подмышечную температуру. У каждого ребенка оценивали гемоглобин и собирали образцы крови на фильтровальную бумагу для генотипирования паразитов, а также для возможного определения уровня различных противомалярийных препаратов в крови.

Опекуна попросили вернуть ребенка в исследовательский центр на 1, 2, 3, 7, 14, 21, 28, 35 и 42 день. Если они этого не делали, их посещали на дому, чтобы обеспечить надлежащее последующее наблюдение. При каждом последующем наблюдении исследователь спрашивал о сопутствующем лечении и нежелательных явлениях, тщательно заполняя форму клинического отчета (CRF).

Если во время наблюдения с 14 по 42 день у ребенка, ранее включенного в исследование, появлялась лихорадка, все анализы и обследования проводились, как в 0 день. как новая инфекция. Если в течение периода наблюдения диагностировали тяжелую малярию, пациенту назначали неотложную терапию (перорально или внутривенно хинин) и исключали из исследования. Каждый раз, когда зарегистрированный ребенок поступал в центр, заполнялась ИРК в отношении клинического и лабораторного статуса, проводимого лечения и возможных нежелательных явлений.

Клинические и лабораторные исследования включали:

Мазок малярии: толстые мазки крови, окрашенные по Гимзе, исследуются с помощью электрического или солнечного микроскопа в месте исследования опытным микроскопистом. Количество паразитов рассчитывали как количество паразитов, наблюдаемых на фоне 200 лейкоцитов в толстом мазке крови, и записывали в ИРК для правильного случая. Слайды были централизованно сохранены для двойной проверки контроля качества (10% всех слайдов).

Гемоглобин: Уровни гемоглобина измеряли методом HaemoCue™ с использованием образцов крови, собранных в кюветы. Уровни Hb регистрировались в CRF для каждого случая.

Полная картина крови (FBP) и тест функции печени (LFT): FBP и LFT были выполнены только в субпопуляции исследовательского центра Кивунге (подисследование GLP). ССК получали на гематологическом анализаторе Cell-Dyn 1700™ (Abbott Laboratories, США). ТФП, включая АЛТ, АСТ, гамма-ГТ, альбумин и билирубин, получали с помощью фотометра BTS-310™ UV-VIS (BioSystems, Испания).

Температура и анамнез: Врач/офицер измерил у пациента температуру в подмышечной впадине с помощью электронного термометра и составил подробный анамнез, а также провел клиническое обследование.

Образец фильтровальной бумаги для ПЦР: Образцы крови собирали на фильтровальную бумагу Whatman FTA. После высыхания каждый образец фильтровальной бумаги хранился в отдельных пластиковых пакетах при температуре -20ºC (Кивунге) или +4ºC (Мичевени) до регулярной транспортировки в Кивунге для длительного хранения при -20ºC.

Образцы ВЭЖХ (только Kivunge): у каждого пациента было взято примерно 5 мл венозной крови в дни 0 и 7 для тестов FBP и LFT. В группе ASAQ 100 мкл этой крови собирали на специальную фильтровальную бумагу для анализа уровня амодиахина методом жидкостной хроматографии высокого давления (ВЭЖХ). В группе AL 100 мкл плазмы (отделенной центрифугированием при >3000 об/мин в течение 10 минут) собирали на специальную фильтровальную бумагу для ВЭЖХ-анализа уровней люмефантрина. Всю оставшуюся (минимум 2 мл) плазму собирали и хранили при температуре -20ºC в качестве резерва.

Молекулярный анализ: ПЦР-генотипирование поверхностного белка 2 мерозоитов (msp2), считающегося наиболее информативным единственным генетическим маркером множественности инфекций, вызванных P. falciparum, было проведено для дифференциации реинфекции от истинного обострения. Результаты парной ПЦР сравнивали между 0-м днем ​​и во время рецидива паразитемии с 14-го по 42-й день. Внешнюю консервативную область полиморфного повторяющегося блока 3 msp2 амплифицировали в начальной реакции, за которой следовали две вложенные реакции с олигонуклеотидными праймерами, специфичными для двух аллельных семейств FC27 и IC/3D7, с использованием стандартного протокола. Анализ однонуклеотидных белков (SNP) генов pfmdr1 Y86N и pfcrt K76T проводили в соответствии с установленными протоколами ПЦР-ПДРФ на основе рестрикции AluI. Все молекулярные анализы были выполнены в Отделе исследования малярии, Кентукки, Швеция.