Effekten av Artesunate + Amodiaquine kontra Artemether-lumefantrin för Falciparum Malaria i Zanzibar, 2005 (ACOII)

Alla barn i rätt åldersgrupp som uppvisade kliniska tecken på malaria på studieplatsen ansågs vara möjliga försökspersoner. Vårdnadshavarna för dessa barn informerades om studien muntligen på swahili enligt formuläret för informerat samtycke. De som inte var villiga att delta i studien behandlades enligt lokal standardprocedur.

På dag 0 testades patienten för parasiter med hjälp av ljusmikroskopi på Giemsa-färgade blodfilmer. En detaljerad klinisk historia och en klinisk undersökning inklusive en axillär temperatur bedömdes. Hemoglobin bedömdes och blodprover togs på filterpapper för varje barn för genotypning av parasiterna samt för eventuell bestämning av blodnivåer av olika antimalariamedel.

Vårdnadshavaren ombads att föra tillbaka sitt barn till studieplatsen dag 1, 2, 3, 7, 14, 21, 28, 35 och 42. Om de inte gjorde det fick de besök i sina hem för att säkerställa korrekt uppföljning. Vid varje uppföljning frågade utredaren om samtidig medicinering och biverkningar och fyllde noggrant i formuläret för kliniska rapporter (CRF).

Om, under uppföljningen mellan dag 14 och 42, ett barn som tidigare ingick i studien presenterades med feber, kördes alla tester och undersökningar som dag 0. Om barnet kliniskt och parasitologiskt diagnostiserades med malaria igen, behandlades det. som en ny infektion. Om patienten diagnostiserades med svår malaria under uppföljningsperioden fick patienten räddningsbehandling (oralt eller intravenöst kinin) och drogs ur studien. Varje gång ett inskrivet barn presenterades på platsen fullbordades CRF med avseende på klinisk och laboratoriestatus, behandling som ges och möjliga biverkningar.

Kliniska och laboratoriebedömningar inkluderade:

Malariautstryk: Giemsa färgade tjocka blodfilmer som undersöktes med hjälp av elektriska eller solljusmikroskop på studieplatsen av en erfaren mikroskopist. Antalet parasiter beräknades som antalet parasiter som setts mot 200 leukocyter i den tjocka blodfilmen och registrerades i CRF för rätt tillfälle. Objektglasen lagrades för kvalitetskontroller dubbelkontroll (10 % av alla objektglas) centralt.

Hemoglobin: Hemoglobinnivåer mättes med HaemoCue™-metoden med hjälp av blodprover som tagits på kyvetter. Hb-nivåerna registrerades i CRF för varje tillfälle.

Fullblodsbild (FBP) och leverfunktionstest (LFT): FBP och LFT utfördes endast i Kivunge Study Site-subpopulationen (GLP Sub Study). FBP erhölls med användning av Cell-Dyn 1700™ Hematology Analyzer (Abbott Laboratories, USA). LFT, inklusive ALT, AST, Gamma-GT, albumin och bilirubin, erhölls med hjälp av BTS-310™ Photometer UV-VIS (BioSystems, Spanien).

Temperatur och klinisk historia: En läkare/tjänsteman mätte patientens axillära temperatur med hjälp av en elektronisk termometer och tog en detaljerad klinisk historia samt utförde en klinisk undersökning.

PCR-filterpappersprov: Blodprover togs på Whatman FTA-filterpapper. När det var torrt förvarades varje filterpappersprov i separata plastpåsar vid -20ºC (Kivunge) eller +4ºC (Micheweni) tills det regelbundet överfördes till Kivunge för -20ºC långtidsförvaring.

HPLC-prover (endast Kivunge): Ungefär 5 ml venöst blod togs från varje patient dag 0 och 7 för FBP- och LFT-tester. I ASAQ-gruppen samlades 100 µl av detta blod på speciella filterpapper för högtrycksvätskekromatografi (HPLC) analys av amodiakinnivåer. I AL-gruppen samlades 100 µl plasma (separerad genom centrifugering vid >3000 rpm under 10 min) på speciella filterpapper för HPLC-analys av lumefantrinnivåer. All återstående (minst 2 ml) plasma samlades upp och hölls vid -20ºC som backup.

Molekylära analyser: PCR-genotypning av merozoit ytprotein 2 (msp2), som anses vara den mest informativa enskilda genetiska markören för mångfald av P. falciparum-infektioner, utfördes för att skilja återinfektioner från verklig återväxt. Parade PCR-resultat jämfördes mellan dag 0 och vid tidpunkten för återkommande parasitemi från dag 14 upp till dag 42. Den yttre konserverade regionen av det polymorfa repetitiva blocket 3 av msp2 amplifierades i en initial reaktion följt av två kapslade reaktioner med oligonukleotidprimrar specifika för de två allelfamiljerna FC27 och IC/3D7, med användning av ett standardprotokoll. pfmdr1 Y86N- och pfcrt K76T-genernas analys av singelnukleotidproteiner (SNPs) gjordes enligt etablerade AluI-restriktionsbaserade PCR-RFLP-protokoll. Alla molekylära analyser utfördes vid Malariaforskningsenheten, KI, Sverige.