Effekten af ​​Artesunate + Amodiaquine versus Artemether-lumefantrin for Falciparum Malaria i Zanzibar, 2005 (ACOII)

Alle børn i den rigtige aldersgruppe med kliniske tegn på malaria på undersøgelsesstedet blev betragtet som mulige forsøgspersoner. Disse børns værger blev informeret om undersøgelsen mundtligt på swahili i henhold til formularen til informeret samtykke. De, der ikke var villige til at deltage i undersøgelsen, blev behandlet efter lokal standardprocedure.

På dag 0 blev patienten testet for parasitter ved hjælp af lysmikroskopi på Giemsa-farvede blodfilm. En detaljeret klinisk historie og en klinisk undersøgelse inklusive en aksillær temperatur blev vurderet. Hæmoglobin blev vurderet, og blodprøver blev indsamlet på filterpapir for hvert barn til genotypebestemmelse af parasitterne samt for mulig bestemmelse af blodniveauer af forskellige antimalariamidler.

Værgen blev bedt om at bringe deres barn tilbage til undersøgelsesstedet på dag 1, 2, 3, 7, 14, 21, 28, 35 og 42. Hvis de ikke gjorde det, blev de besøgt i deres hjem for at sikre korrekt opfølgning. Ved hver opfølgning spurgte investigatoren om samtidig medicinering og bivirkninger, idet han omhyggeligt udfyldte den kliniske rapportformular (CRF).

Hvis et barn under opfølgningen mellem dag 14 og 42 havde feber, blev alle tests og undersøgelser kørt som på dag 0. Hvis barnet igen klinisk og parasitologisk diagnosticeret med malaria, blev det behandlet som en ny infektion. Hvis patienten blev diagnosticeret med svær malaria i opfølgningsperioden, fik patienten redningsbehandling (oral eller intravenøs kinin) og trak sig ud af undersøgelsen. Hver gang et indskrevet barn blev præsenteret på stedet, blev CRF afsluttet med hensyn til klinisk og laboratoriestatus, givet behandling og mulige bivirkninger.

Kliniske og laboratorievurderinger omfattede:

Malariaudstrygning: Giemsa-farvede tykke blodfilm undersøgt ved hjælp af elektrisk mikroskop eller sollysmikroskop på undersøgelsesstedet af en erfaren mikroskopist. Antallet af parasitter blev beregnet som antallet af parasitter set mod 200 leukocytter i den tykke blodfilm og registreret i CRF til den korrekte lejlighed. Objektglassene blev opbevaret centralt til kvalitetskontrol dobbelttjek (10 % af alle objektglas).

Hæmoglobin: Hæmoglobinniveauer blev målt ved hjælp af HaemoCue™-metoden ved hjælp af blodprøver opsamlet på kuvetter. Hb-niveauerne blev registreret i CRF for hver lejlighed.

Fuldt blodbillede (FBP) og leverfunktionstest (LFT): FBP og LFT blev kun udført i Kivunge-undersøgelsesstedets underpopulation (GLP-underundersøgelse). FBP blev opnået under anvendelse af Cell-Dyn 1700™ Hematology Analyzer (Abbott Laboratories, USA). LFT, inklusive ALT, AST, Gamma-GT, albumin og bilirubin, blev opnået under anvendelse af BTS-310™ Photometer UV-VIS (BioSystems, Spanien).

Temperatur og klinisk historie: En læge/officer målte patientens aksillære temperatur ved hjælp af et elektronisk termometer og tog en detaljeret klinisk anamnese samt udførte en klinisk undersøgelse.

PCR-filterpapirprøve: Blodprøver blev opsamlet på Whatman FTA-filterpapir. Efter tørring blev hver filterpapirprøve opbevaret i separate plastikposer ved -20ºC (Kivunge) eller +4ºC (Micheweni), indtil den regelmæssigt blev overført til Kivunge til -20ºC langtidsopbevaring.

HPLC-prøver (kun Kivunge): Ca. 5 ml venøst ​​blod blev udtaget fra hver patient på dag 0 og 7 til FBP- og LFT-test. I ASAQ-gruppen blev 100 µl af dette blod opsamlet på specielt filterpapir til højtryksvæskekromatografi (HPLC) analyse af amodiaquinniveauer. I AL-gruppen blev 100 µl plasma (separeret ved centrifugering ved >3000 rpm i 10 minutter) opsamlet på specielle filterpapirer til HPLC-analyse af lumefantrinniveauer. Al resterende (minimum 2 ml) plasma blev opsamlet og holdt ved -20ºC som backup.

Molekylær analyser: PCR-genotypebestemmelse af merozoitoverfladeprotein 2 (msp2), der betragtes som den mest informative enkelt genetiske markør for mangfoldighed af P. falciparum-infektioner, blev udført for at differentiere geninfektioner fra ægte gendannelse. Parrede PCR-resultater blev sammenlignet mellem dag 0 og på tidspunktet for tilbagevendende parasitæmi fra dag 14 op til dag 42. Den ydre konserverede region af den polymorfe gentagne blok 3 af msp2 blev amplificeret i en indledende reaktion efterfulgt af to indlejrede reaktioner med oligonukleotidprimere, der er specifikke for de to allelfamilier FC27 og IC/3D7 ved anvendelse af en standardprotokol. pfmdr1 Y86N og pfcrt K76T genernes Single Nucleotide Proteins (SNP'er) analyse blev udført i overensstemmelse med etablerede AluI restriktionsbaserede PCR-RFLP protokoller. Alle molekylære analyser blev udført på Malaria Research Unit, KI, Sverige.