Eficácia de Artesunato + Amodiaquina versus Arteméter-lumefantrina para Malária Falciparum em Zanzibar, 2005 (ACOII)

Todas as crianças na faixa etária adequada apresentando sinais clínicos de malária no local do estudo foram consideradas como possíveis sujeitos do estudo. Os responsáveis ​​por essas crianças foram informados sobre o estudo oralmente em suaíli de acordo com o termo de consentimento informado. Aqueles que não quiseram participar do estudo foram tratados de acordo com o procedimento padrão local.

No dia 0, o paciente foi testado para parasitas usando microscopia de luz em esfregaços de sangue corados com Giemsa. Uma história clínica detalhada e um exame clínico incluindo uma temperatura axilar foram avaliados. A hemoglobina foi avaliada e amostras de sangue foram coletadas em papel de filtro para cada criança para genotipagem dos parasitas, bem como para possível determinação dos níveis sanguíneos de diferentes drogas antimaláricas.

O responsável foi solicitado a trazer seu filho de volta ao local do estudo nos dias 1, 2, 3, 7, 14, 21, 28, 35 e 42. Caso não o fizessem, eram visitadas em suas casas para garantir o devido acompanhamento. A cada seguimento o investigador questionava sobre medicação concomitante e eventos adversos, preenchendo cuidadosamente o formulário de relato clínico (CRF).

Se, durante o acompanhamento entre o dia 14 e 42, uma criança previamente incluída no estudo apresentasse febre, todos os testes e exames eram realizados como no dia 0. Se a criança voltasse a ter diagnóstico clínico e parasitológico de malária, era tratada como uma nova infecção. Se diagnosticado com malária grave durante o período de acompanhamento, o paciente recebeu tratamento de resgate (quinina oral ou intravenosa) e foi retirado do estudo. Cada vez que uma criança matriculada se apresentava no local, o CRF era preenchido com relação ao estado clínico e laboratorial, tratamento administrado e possíveis eventos adversos.

As avaliações clínicas e laboratoriais incluíram:

Esfregaço de malária: esfregaços de sangue espessos corados com Giemsa examinados usando microscópio elétrico ou de luz solar no local do estudo por um microscopista experiente. O número de parasitas foi calculado como o número de parasitas observados contra 200 leucócitos no esfregaço sanguíneo espesso e registrados no CRF para a ocasião correta. As lâminas foram armazenadas centralmente para controle de qualidade (10% de todas as lâminas).

Hemoglobina: Os níveis de hemoglobina foram medidos pelo método HaemoCue™ usando amostras de sangue coletadas em cubetas. Os níveis de Hb foram registrados no CRF para cada ocasião.

Hemograma completo (FBP) e teste de função hepática (LFT): FBP e LFT foram realizados apenas na subpopulação do Centro de Estudo de Kivunge (Subestudo GLP). O FBP foi obtido usando o Cell-Dyn 1700™ Hematology Analyzer (Abbott Laboratories, EUA). LFT, incluindo ALT, AST, gama-GT, albumina e bilirrubina, foi obtido usando o BTS-310™ Fotômetro UV-VIS (BioSystems, Espanha).

Temperatura e histórico clínico: Um médico/funcionário mediu a temperatura axilar do paciente usando um termômetro eletrônico e obteve um histórico clínico detalhado, bem como realizou um exame clínico.

Amostra de papel de filtro de PCR: As amostras de sangue foram coletadas em papéis de filtro Whatman FTA. Quando seco, cada amostra de papel de filtro foi armazenada em sacos plásticos separados a -20ºC (Kivunge) ou +4ºC (Micheweni) até ser regularmente transferida para Kivunge para armazenamento de longo prazo a -20ºC.

Amostras de HPLC (somente Kivunge): Aproximadamente 5 ml de sangue venoso foram coletados de cada paciente nos dias 0 e 7 para testes de FBP e LFT. No grupo ASAQ, 100 µl deste sangue foram coletados em papéis de filtro especiais para análise por cromatografia líquida de alta pressão (HPLC) dos níveis de amodiaquina. No grupo AL, 100 µl de plasma (separados por centrifugação a > 3.000 rpm por 10 minutos) foram coletados em papéis de filtro especiais para análise por HPLC dos níveis de lumefantrina. Todo o restante (mínimo 2ml) de plasma foi coletado e mantido a -20ºC como reserva.

Análises moleculares: a genotipagem por PCR da proteína de superfície merozoíta 2 (msp2), considerada o marcador genético único mais informativo para a multiplicidade de infecções por P. falciparum, foi realizada para diferenciar reinfecções de verdadeira recrudescência. Os resultados pareados de PCR foram comparados entre o dia 0 e o momento da parasitemia recorrente do dia 14 até o dia 42. A região conservada externa do bloco repetitivo polimórfico 3 de msp2 foi amplificada em uma reação inicial seguida de duas reações aninhadas com primers oligonucleotídicos específicos para as duas famílias alélicas FC27 e IC/3D7, usando um protocolo padrão. A análise das Proteínas de Nucleótido Único (SNPs) dos genes pfmdr1 Y86N e pfcrt K76T foi feita de acordo com protocolos de PCR-RFLP baseados em restrição AluI estabelecidos. Todas as análises moleculares foram realizadas na Malaria Research Unit, KI, Suécia.