Lentinula Edodes Bar가 콜레스테롤 개체의 이상지질혈증 및 산화 스트레스에 미치는 영향: 무작위 연구

연구 설계 연구의 주요 결과는 총 콜레스테롤 수치, 트리글리세리드 또는 저밀도 지단백질(LDL) 및 고밀도 지단백질(HDL)로 평가한 콜레스테롤혈증이었습니다. 2차 결과에는 혈당, 체질량 지수(BMI) 및 산화 스트레스 바이오마커가 포함되었습니다.

2018년 9월부터 2018년 12월까지 전향적 2상, 무작위, 이중 맹검 및 위약 대조 시험을 실시했습니다. 이 연구는 브라질 상파울루 주 소로카바 대학교(UNISO)에서 수행되었습니다. 이 연구는 National Health Council(BRASIL, 2012) 및 연구 윤리 심의 위원회(ERC)의 결의안 466/2012에 따라 Sorocaba 대학의 인간 연구 윤리 위원회(프로토콜 번호 2.824.297)에서 승인(부록 D)되었습니다. (WHO, 2016).

개인 모집 개인 모집을 위해 2상 시험 시작 5개월 전에 공개가 시작되었습니다. 이 연구는 소로카바 대학교(UNISO) 웹사이트, 소셜 미디어 및 캠퍼스 전체에 배포된 폴더에 게시되었으며 연구, 포함 및 제외 기준, 연구원의 연락처에 대한 간략한 설명이 포함되어 있습니다. Anvisa(National Health Surveillance Agency)의 결의안 1.170에 따르면 12명 미만의 2상 연구는 허용되지 않습니다. 그러나 기관은 최소 24명의 지원자를 사용할 것을 제안합니다.

자격 기준 총 165명의 개인이 Google 온라인 설문 조사를 완료했습니다.

• 포함 기준 경계선 수준에서 다음 생화학적 지표 중 하나 이상을 갖는 남녀 모두 20세에서 65세 사이의 개인(총 콜레스테롤 180~239mg/dL, LDL 130~159mg/dL, 트리글리세리드 150 ~ 200 mg/dL)이 모집되었으며 모집일까지 최근 날짜의 생화학적 검사로 진단되었습니다. 바 재료와 표고 버섯에 관대합니다. 채혈 날짜 및 시간 참석 가능 여부.
• 제외 기준 그러나 그들 중 일부는 암, 심장 질환, 신경 퇴행성 질환, 당뇨병과 같은 질병을 앓았습니다. 이러한 질병은 연구의 혼동 요인으로 간주될 수 있으며 일부 모집된 사람들은 제외되어야 했습니다. 임신, 수유 또는 호르몬 대체 여성도 참가할 수 없습니다.

개인은 연구 기간 동안 식습관과 패턴, 신체 활동 수준 또는 경구 피임약 사용을 변경하지 않도록 지시받았고, 따라서 각 개인의 식단에 추가된 표고버섯이 노출된 그룹에 미치는 영향만 확인했습니다.

연구 개입. 이 연구는 정보에 입각한 동의 기간에 서명한 68명의 개인으로 공식적으로 시작되었습니다. 첫 번째(시간 0 - T0), 두 번째(시간 33일 - T33) 및 세 번째(시간 66일 - T66) 회의에서 대상자들은 영양 평가 및 기왕증, 24시간 식습관 회상에 제출되었습니다. 그리고 먹는 빈도.

연구 첫 달에 4,100개의 위약 또는 버섯 바가 생산되었고 두 번째 달에는 3,500개의 바가 생산되었습니다. Grotto와 협력자(2015)에 따르면 동물의 독성 정도를 결정하기 위해 다양한 표고버섯 농도(100, 400 및 800mg/Kg/일)를 평가하는 연구를 수행했습니다. 100mg/Kg/일의 표고버섯 농도는 안전한 것으로 나타났습니다. 또한, 표고버섯 스위트바 제형은 선행연구의 관능분석 및 구매의도에서도 인정을 받았다.

무작위화 개인(68)을 2개의 그룹으로 무작위로 할당했습니다(난수 표 사용): I - 위약 그룹(n = 32) 및 II - 개입 그룹(n = 36). 표고버섯의 일일 권장 섭취량을 100mg/Kg/일로 보장하기 위해 각 참가자에게 가중치를 부여하여 하루에 섭취하는 바의 수를 결정했습니다.

영양 평가 및 채혈 후 개인은 T33일 동안 개별 진공 막대가 포함된 미확인 불투명 및 밀봉 포장을 받았습니다. 환자와 데이터 수집자는 눈이 멀었습니다. 중재 그룹과 위약 그룹의 막대는 질감, 풍미, 향 및 외관이 유사했습니다.

한 달 후, 모든 개인은 새로운 영양 평가를 위해 소로카바 대학교로 돌아와 동일한 이중 맹검 치료(T33)로 더 많은 푸드 바와 채혈을 받았습니다. 66일(T66)의 끝에서 피험자는 마지막 혈액 수집 및 최종 영양 평가를 위해 돌아왔습니다.

생화학적 분석 총 콜레스테롤, LDL 콜레스테롤, HDL 콜레스테롤, 트리글리세리드 및 포도당은 아래 방법론에 따라 자동화 장비 COBAS C111(Roche®)에서 제조업체의 사양에 따라 상업용 키트로 분석했습니다.

콜레스테롤의 경우 시료 10µL와 효소 시약 1.0mL를 37ºC에서 10분 동안 혼합하여 지질단백질 리파제 효소에 의해 유리 콜레스테롤로 완전히 변환되었습니다. 이 반응은 콜레스테롤 옥시다제 효소에 의해 자유 콜레스테롤이 콜레스테롤-3-1과 H2O2로 산화되는 것과 관련이 있습니다. 그리고 4-아미노안티피린과 함께 페놀에 대한 퍼옥시다아제의 작용으로 체리 크로모겐을 형성했으며 색상은 콜레스테롤 농도에 비례합니다.

HDL 측정을 위해 인텅스텐산과 염화마그네슘으로 혈청을 처리하였다. 따라서, 10,000rpm에서 2분 동안 원심분리한 후 분획으로부터 LDL을 침전시켰다. 상등액에 남아있는 HDL은 콜레스테롤 방법론에 따라 수행하였다. HDL 농도는 색상에 비례합니다. LDL은 총콜레스테롤에서 HDL콜레스테롤을 빼서 계산합니다.

혈청 트리글리세리드는 지질단백질 리파아제에 의해 글리세롤과 유리 지방산으로 가수분해되었습니다. 아데노신 삼인산(ATP)과 글리세롤 키나아제의 존재 하에서 글리세롤-3-인산이 인산화되었고, 이는 글리세롤 인산 옥시다제에 의해 아세톤 인산이수소와 H2O2로 산화되었다. H2O2, 4-아미노안티피린 및 p-클로로페놀은 적색이 형성될 때까지 10분 동안 37ºC 수조에서 과산화효소에 의해 위에서 보고된 동일한 반응 과정을 거쳤습니다.

혈당 검사의 경우, 포도당-6-인산 탈수소효소는 gluconate-6-인산의 NADP 존재 하에 포도당-6-인산을 산화시켰습니다. 다른 탄수화물은 산화되지 않았습니다. 반응 중 NADPH 형성 속도는 글루코스 농도에 정비례하며 광도계로 결정됩니다.

산화 스트레스 분석 환원된 글루타티온(GSH)의 결정은 환원된 총 티올 기반의 정량화에 의해 이루어졌습니다. 이를 위해 혈액 150µL를 100µL 10% Triton X-100 및 100µL 30% TCA로 vortex한 다음 4000rpm에서 10분 동안 원심분리했습니다. 큐벳에 900µL의 1M TFK, 50µL의 상층액 및 50µL의 10mM DTNB를 피펫팅하여 노란색 복합체를 형성했습니다. 분광 광도계에서 412nm에서 판독값을 얻었습니다. 농도 계산을 위해 미리 정의된 GSH 농도(0.005; 0.01; 0.025; 0.05; 0.1mM)의 검량선을 사용했습니다.

카탈라아제 효소의 활성을 평가하기 위해 카탈라아제에 의한 H2O2 분해를 기반으로 240nm에서 모니터링되는 효소를 사용했습니다. 이를 위해 혈액을 50mM TFK에 60배 희석했습니다. 20 μL의 분취량을 1910 μL의 동일한 TFK에 혼합하고 70 μL의 H2O2를 첨가하여 3분 동안 모니터링된 반응을 시작했습니다. 분당 변동 상수(κ)는 카탈라아제 효소(κ/min)의 발현에 도움이 되었습니다.

티오바르비투르산 반응성 물질(TBARS)은 지질 과산화의 바이오마커로 사용되었습니다. 혈장 분취량(150µL)을 50µL NaOH 및 50µL Milli-Q 초순수(Direct 8, Millipore®)와 혼합하고 진탕하면서 60°C에서 30분 동안 배양했습니다. 6% H₃PO₄ 250µL, 0.8% TBA 250µL 및 10% SDS 100µL를 샘플에 첨가하고 80°C 수조에 1시간 동안 넣었습니다. 지질 과산화물은 산성 매질에서 TBA와 반응하여 분홍색 화합물을 형성하고 532nm에서 분광광도계로 읽습니다. 혈장 내 TBARS 농도를 계산하기 위해 주요 thiobarbituric acid 반응 물질인 malondialdehyde의 검량선을 만들었다(0.28; 0.56; 1.7; 3.4; 6.6 μM).