석회화 피부병 동안 진피 탄성 섬유의 변형: 다광자 현미경을 이용한 구조적 연구 (Calciphoton)

조직의 광물 퇴적물을 수반하는 다양한 병리학(암, 감염 과정, 환경 질병)이 큽니다(1). 피부과에서 여러 병리가 칼슘 광물 퇴적물과 관련되는데, 예를 들어 석회화 및 탄성가황색종(PXE)이 있습니다. 지금까지 피부 광물 침전물의 화학적 특성, 생리병리학적 결과, 관련 병리의 발생 및 인체 장기에 미치는 영향에 대한 연구는 거의 수행되지 않았습니다.

이것은 칼시필락시스(2) 및 유육종증(3)을 포함하여 다양한 석회화 피부병에서 칼슘 침전물의 특성화에 대한 Hester COLBOC, M.D.의 박사 프로젝트에 동기를 부여했습니다. 이 기초 연구 프로젝트는 LCP(Institute of Physico-Chemistry, CNRS, Paris-Saclay University)와 AP-HP 간의 협업 프레임워크에서 수행되며, 특히 요로 신장학(요로 결석증) 및 종양학 분야에서 수행됩니다. (4) (유방암과 갑상선암의 석회화). 우리는 피부 석회화가 칼시필락시스의 카바파타이트와 유육종증의 방해석으로 구성되어 있음을 보여주었습니다. 우리는 또한 이러한 침전물이 진피 또는 혈관벽 탄성 섬유에 주로 위치한다는 것을 보여주었고, 이는 이러한 섬유 내에서 탐색할 분자 핵형성 경로를 제안합니다.

이 구조적 및 화학적 설명은 혁신적이지만 이러한 칼슘 침전물에 대해 발생하는 모든 질문에 대한 답은 아닙니다. 왜 정상적인 인칼슘 균형을 보이는 일부 환자가 피부 석회화가 심합니까? 반대로 일부 투석 환자와 같은 다른 환자는 인칼슘 대차대조표가 극도로 불안정하지만 피부 석회화는 없는 이유는 무엇입니까? 이 역설은 탄성 진피 및 혈관 섬유 내에 "핵형성 병소"의 존재 가능성을 높여 일부 환자에서 인칼슘 침전물의 침전을 촉진합니다. 일부 체외 모델은 탄성 섬유 내에서 이러한 핵 형성 초점을 탐색했습니다. (ref Gourgas et al) 놀랍게도 대부분의 석회화 피부병은 피부 염증 상태가 선행됩니다. 이러한 피부 염증 현상은 또한 칼슘 침전물의 침전을 유발할 수 있습니다. 따라서 일부 저자는 엘라스틴이 세포외 매트릭스에서 메탈로프로테이나제(MMP)에 의해 소화되어 인칼슘 침전물에 유리한 핵형성 병소를 생성한다고 추측합니다. Munavalliet al. 급속한 체중 감소의 맥락에서 칼시필락시스 환자의 소변 샘플에서 MMP의 증가 수준을 보여주었습니다(5). 그들은 이 환자의 혈청 MMP 수치 상승이 외부 탄성 한계의 변화와 혈관 석회화로 이어질 수 있다고 가정합니다. 한편, 이 가설은 피부 노화(피부다공증)와 같이 염증과 석회화가 없는 탄력 섬유 변경의 다른 모델에 의해 뒷받침됩니다.

우리 프로젝트의 배경 가설은 피부 염증이 탄성 섬유의 특정 변화를 유발하여 석회화에 도움이 된다는 것입니다.

특히 칼시필락시스 및 PXE 중에 이 가설을 탐구하기 위해 Ecole Polytechnique의 Laboratoire d'Optique et Biosciences(LOB)에서 사용할 수 있는 이미징 기술인 다광자 현미경을 사용할 것을 제안합니다. 다광자 현미경은 공초점 현미경의 대안으로 1990년대 초반에 개발되어 마이크로미터 미만의 해상도로 생물학적 조직의 심층 이미징을 개선합니다. 가장 중요한 것은 다광자 현미경은 조직의 다양한 요소를 식별하기 위해 라벨링 없이 병렬로 여러 대비 광맥을 결합할 수 있다는 것입니다. 2차 고조파 생성(SHG) 신호는 비할 데 없는 감도로 염색되지 않은 원섬유 콜라겐의 특정 이미징을 허용하는 반면, 2광자 여기 형광(2PEF)은 진피 또는 다른 조직의 엘라스틴 이미징뿐만 아니라 다양한 고유 세포 발색단 덕분에 세포 이미징을 허용합니다. 그림 1) (6).

다광자 현미경은 진피 섬유, 특히 엘라스틴 및 콜라겐 섬유의 구조적 특성화와 가능한 변경에 대한 이 기술의 높은 관련성을 입증한 LOB(그림 1참조)를 포함하여 피부에 대한 여러 연구에 사용되었습니다. 그것은 피부 노화 연구뿐만 아니라 탄성 섬유(PXE) 또는 콜라겐 섬유(마르판 증후군)의 퇴화로 이어지는 병리학에도 적용되었습니다(7-9). 따라서 이 기술은 피부 염증 현상 및 석회화 피부병 동안 탄성 섬유의 구조를 탐색하는 데 매우 적합합니다.

동시에, 피부 염증 과정은 다른 방법으로 탐구될 것입니다. 면역조직화학은 진피 MMP를 검출하는 데 사용될 것이며 X-선 형광(Synchrotron Soleil, Diffabs 라인)은 이전 연구에서 수행된 것처럼 피내 아연 및 기타 금속 침전물을 증거하는 데 사용될 것입니다(그림 2).

그림 2: 피부 생검의 X선 형광: 피부 염증 침윤물(A)과 피내 아연(B)의 존재 사이의 상관 관계 예, 여기에서는 문신에 대한 태선종 반응 동안(Soleil Synchrotron, Diffabs 라인, S. Reguer, D. Bazin 및 H. Colboc 작성).

우리 프로젝트의 주요 목적은 석회화 피부병 동안 탄력 섬유의 구조적 변화를 특성화하는 것입니다.

보조 목표는 다음과 같습니다.

• 탄성 섬유의 변화에 ​​대한 피부 염증 과정의 결과를 연구하기 위해,
• 탄성 진피 및 혈관 섬유 내에서 인-칼슘 침착물의 형성을 위한 가능한 핵 형성 초점을 식별하기 위해.

피부 샘플. 이번 연구는 주로 인간의 피부를 대상으로 진행되지만 PXE 마우스 모델인 ABCC6 KO 마우스에서도 수행될 예정이다. 더 정확하게는 LOB에서 공부하는 자료는 다음과 같습니다.

• 이러한 석회화 피부병의 진단을 위해 인간 피부 생검을 이미 수집했습니다: PXE, 칼시필락시스, 기타 석회화 염증성 피부병(루푸스 지방층염, 피부근염), Tenon 병원의 병리 실험실(Moguelet 박사).
• 대조군으로서, 테논 병원(Tenon Hospital)으로부터 다양한 연령의 환자로부터 건강한 피부의 인간 생검(피부 종양 제거 한계). 우리는 피부 노화가 진행된 환자, 특히 일광 탄력증 환자에게 집중할 것입니다. 이 UV 유도 탄성 섬유 변경 모델은 비염증성 및 비석회화 탄성 섬유 손상 측면에서 훌륭한 제어입니다.
• 테논 병원 INSERM Unit 1155의 PXE 마우스 모델(ABCC6 KO 마우스) 및 일치하는 대조군 마우스의 피부 생검.

프로토콜. 이 모든 생검은 탄성 섬유와 콜라겐 섬유를 동시에 이미지화하기 위해 2PEF와 SHG 대비를 결합하여 다광자 현미경으로 특성화됩니다. 첫 번째 단계에서 실험 프로토콜은 다음과 같습니다.

• 테논 병원에서 각 생검의 여러 연속 슬라이드 생산: 다광자 이미징을 위한 염색되지 않은("흰색") 슬라이드 1개, 일반적인 형태학적 염색(헤마톡실린-에오신-사프란, HES)이 있는 슬라이드 1개, 칼슘 침전물을 강조하는 염색이 있는 슬라이드 1개(Von Kossa ) 및 주요 MMP(MMP-1, 2 및 9에 대한 항체)의 면역조직화학적 표지가 있는 3개의 슬라이드.
• 모자이크에 의한 넓은 시야에 걸쳐 모든 스테인드 슬라이드의 표준 명시야 광학 현미경(표준 및 편광 투과광, 형광, DIC)의 LOB에서 영상화; 염증 과정, 조직 리모델링 또는 광물 침전물에 해당하는 관심 영역(ROI) 식별. 광물 퇴적물은 편광 투과광 또는 위상차 또는 DIC에 의해 드러납니다.
• 생검에 존재하는 금속 침전물, 특히 아연을 식별하기 위해 Soleil Synchrotron에서 X선 ​​형광 이미징. 이 작업은 Diffabs 라인의 광물 이미징에 강력한 전문성을 보유한 Dominique Bazin(물리화학 연구소, CNRS, Paris-Saclay University)과 협력하여 수행됩니다.
• 식별된 관심 영역의 LOB에서 또는 여러 타일을 자동으로 연결하여 넓은 시야에서 다광자 이미징. 편광 분해 이미지는 콜라겐과 엘라스틴 섬유의 방향을 매핑하기 위해 매우 밀집된 영역이나 리모델링된 영역에서도 수행됩니다(10).
• 엘라스틴의 양과 구조와 관련된 여러 매개변수를 측정하기 위한 다광자 LOB 이미지의 자동 정량 분석. 자동화된 정량 분석은 다광자 이미지 또는 조직학적 이미지에서 관찰되는 콜라겐 및 기타 관심 구조에 대해서도 수행됩니다. 다양한 이미징 양식의 결과는 각 슬라이드 시리즈에서 상호 연관됩니다. 자동 분석은 반 정량적 분석의 일반적인 편향을 피하고 보다 유익한 구조 매개변수를 얻기 위해 필수적입니다. 예를 들어, 탄성 섬유의 평균 밀도(cm²당, 유두 진피 및 망상 진피), 탄성 섬유의 배향 분포, 엔트로피 및 원형 분산과 같은 매개변수가 엘라스틴 이미지에서 추출됩니다. 이 분포의 탄성 섬유의 곡률 정도, 광상으로부터의 거리.
• 적절한 통계 테스트를 기반으로 한 다중 모드 데이터의 통계 분석. 상대적으로 적은 수의 이용 가능한 인간 샘플을 고려하여 선험적 비모수 테스트(Wilcoxon-Mann-Whitney)가 사용됩니다. 그룹당 최소 8명의 환자가 연구될 것이며, 이는 자동 측정의 정확성과 재현성으로 인해 충분해야 합니다. 동일한 환자에 대해 여러 샘플 또는 이미지 시리즈가 수행되는 경우 중첩된 통계 테스트가 사용됩니다(중첩된 t-테스트 또는 중첩된 Wilcoxon).

두 번째 단계에서 첫 번째 단계의 결과에 따라 이 프로토콜의 다양한 항목이 더 많은 정보에 액세스할 수 있도록 개선됩니다.

• 다광자 이미징은 엘라스틴의 3D 구성을 더 잘 강조하기 위해 손상되지 않은 쥐 피부 생검에서 수행됩니다.
• 염증의 고급 형광 이미징은 스펙트럼 또는 FLIM(형광 수명 이미징 현미경) 측정을 사용하여 체외 쥐 피부에서 수행됩니다.

• THG(Third Harmonic Generation)는 광상 구조를 시각화하는 데 사용됩니다.

  1. Bazin D 외. 병리학적 미세석회화의 특성화 및 일부 물리화학적 측면. Chem Rev. 2012년 10월 10일;112(10):5092-120.

조직의 광물 퇴적물을 수반하는 다양한 병리학(암, 감염 과정, 환경 질병)이 큽니다(1). 피부과에서 여러 병리가 칼슘 광물 퇴적물과 관련되는데, 예를 들어 석회화 및 탄성가황색종(PXE)이 있습니다. 지금까지 피부 광물 침전물의 화학적 특성, 생리병리학적 결과, 관련 병리의 발생 및 인체 장기에 미치는 영향에 대한 연구는 거의 수행되지 않았습니다.

이것은 칼시필락시스(2) 및 유육종증(3)을 포함하여 다양한 석회화 피부병에서 칼슘 침전물의 특성화에 대한 Hester COLBOC, M.D.의 박사 프로젝트에 동기를 부여했습니다. 이 기초 연구 프로젝트는 LCP(Institute of Physico-Chemistry, CNRS, Paris-Saclay University)와 AP-HP 간의 협업 프레임워크에서 수행되며, 특히 요로 신장학(요로 결석증) 및 종양학 분야에서 수행됩니다. (4) (유방암과 갑상선암의 석회화). 우리는 피부 석회화가 칼시필락시스의 카바파타이트와 유육종증의 방해석으로 구성되어 있음을 보여주었습니다. 우리는 또한 이러한 침전물이 진피 또는 혈관벽 탄성 섬유에 주로 위치한다는 것을 보여주었고, 이는 이러한 섬유 내에서 탐색할 분자 핵형성 경로를 제안합니다.

이 구조적 및 화학적 설명은 혁신적이지만 이러한 칼슘 침전물에 대해 발생하는 모든 질문에 대한 답은 아닙니다. 왜 정상적인 인칼슘 균형을 보이는 일부 환자가 피부 석회화가 심합니까? 반대로 일부 투석 환자와 같은 다른 환자는 인칼슘 대차대조표가 극도로 불안정하지만 피부 석회화는 없는 이유는 무엇입니까? 이 역설은 탄성 진피 및 혈관 섬유 내에 "핵형성 병소"의 존재 가능성을 높여 일부 환자에서 인칼슘 침전물의 침전을 촉진합니다. 일부 체외 모델은 탄성 섬유 내에서 이러한 핵 형성 초점을 탐색했습니다. (ref Gourgas et al) 놀랍게도 대부분의 석회화 피부병은 피부 염증 상태가 선행됩니다. 이러한 피부 염증 현상은 또한 칼슘 침전물의 침전을 유발할 수 있습니다. 따라서 일부 저자는 엘라스틴이 세포외 매트릭스에서 메탈로프로테이나제(MMP)에 의해 소화되어 인칼슘 침전물에 유리한 핵형성 병소를 생성한다고 추측합니다. Munavalliet al. 급속한 체중 감소의 맥락에서 칼시필락시스 환자의 소변 샘플에서 MMP의 증가 수준을 보여주었습니다(5). 그들은 이 환자의 혈청 MMP 수치 상승이 외부 탄성 한계의 변화와 혈관 석회화로 이어질 수 있다고 가정합니다. 한편, 이 가설은 피부 노화(피부다공증)와 같이 염증과 석회화가 없는 탄력 섬유 변경의 다른 모델에 의해 뒷받침됩니다.

우리 프로젝트의 배경 가설은 피부 염증이 탄성 섬유의 특정 변화를 유발하여 석회화에 도움이 된다는 것입니다.

특히 칼시필락시스 및 PXE 중에 이 가설을 탐구하기 위해 Ecole Polytechnique의 Laboratoire d'Optique et Biosciences(LOB)에서 사용할 수 있는 이미징 기술인 다광자 현미경을 사용할 것을 제안합니다. 다광자 현미경은 공초점 현미경의 대안으로 1990년대 초반에 개발되어 마이크로미터 미만의 해상도로 생물학적 조직의 심층 이미징을 개선합니다. 가장 중요한 것은 다광자 현미경은 조직의 다양한 요소를 식별하기 위해 라벨링 없이 병렬로 여러 대비 광맥을 결합할 수 있다는 것입니다. 2차 고조파 생성(SHG) 신호는 비할 데 없는 감도로 염색되지 않은 원섬유 콜라겐의 특정 이미징을 허용하는 반면, 2광자 여기 형광(2PEF)은 진피 또는 다른 조직의 엘라스틴 이미징뿐만 아니라 다양한 고유 세포 발색단 덕분에 세포 이미징을 허용합니다. 그림 1) (6).

다광자 현미경은 진피 섬유, 특히 엘라스틴 및 콜라겐 섬유의 구조적 특성화와 가능한 변경에 대한 이 기술의 높은 관련성을 입증한 LOB(그림 1참조)를 포함하여 피부에 대한 여러 연구에 사용되었습니다. 그것은 피부 노화 연구뿐만 아니라 탄성 섬유(PXE) 또는 콜라겐 섬유(마르판 증후군)의 퇴화로 이어지는 병리학에도 적용되었습니다(7-9). 따라서 이 기술은 피부 염증 현상 및 석회화 피부병 동안 탄성 섬유의 구조를 탐색하는 데 매우 적합합니다.

동시에, 피부 염증 과정은 다른 방법으로 탐구될 것입니다. 면역조직화학은 진피 MMP를 검출하는 데 사용될 것이며 X-선 형광(Synchrotron Soleil, Diffabs 라인)은 이전 연구에서 수행된 것처럼 피내 아연 및 기타 금속 침전물을 증거하는 데 사용될 것입니다(그림 2).

그림 2: 피부 생검의 X선 형광: 피부 염증 침윤물(A)과 피내 아연(B)의 존재 사이의 상관 관계 예, 여기에서는 문신에 대한 태선종 반응 동안(Soleil Synchrotron, Diffabs 라인, S. Reguer, D. Bazin 및 H. Colboc 작성).

우리 프로젝트의 주요 목적은 석회화 피부병 동안 탄력 섬유의 구조적 변화를 특성화하는 것입니다.

보조 목표는 다음과 같습니다.

• 탄성 섬유의 변화에 ​​대한 피부 염증 과정의 결과를 연구하기 위해,
• 탄성 진피 및 혈관 섬유 내에서 인-칼슘 침착물의 형성을 위한 가능한 핵 형성 초점을 식별하기 위해.

피부 샘플. 이번 연구는 주로 인간의 피부를 대상으로 진행되지만 PXE 마우스 모델인 ABCC6 KO 마우스에서도 수행될 예정이다. 더 정확하게는 LOB에서 공부하는 자료는 다음과 같습니다.

• 이러한 석회화 피부병의 진단을 위해 인간 피부 생검을 이미 수집했습니다: PXE, 칼시필락시스, 기타 석회화 염증성 피부병(루푸스 지방층염, 피부근염), Tenon 병원의 병리 실험실(Moguelet 박사).
• 대조군으로서, 테논 병원(Tenon Hospital)으로부터 다양한 연령의 환자로부터 건강한 피부의 인간 생검(피부 종양 제거 한계). 우리는 피부 노화가 진행된 환자, 특히 일광 탄력증 환자에게 집중할 것입니다. 이 UV 유도 탄성 섬유 변경 모델은 비염증성 및 비석회화 탄성 섬유 손상 측면에서 훌륭한 제어입니다.
• 테논 병원 INSERM Unit 1155의 PXE 마우스 모델(ABCC6 KO 마우스) 및 일치하는 대조군 마우스의 피부 생검.

프로토콜. 이 모든 생검은 탄성 섬유와 콜라겐 섬유를 동시에 이미지화하기 위해 2PEF와 SHG 대비를 결합하여 다광자 현미경으로 특성화됩니다. 첫 번째 단계에서 실험 프로토콜은 다음과 같습니다.

• 테논 병원에서 각 생검의 여러 연속 슬라이드 생산: 다광자 이미징을 위한 염색되지 않은("흰색") 슬라이드 1개, 일반적인 형태학적 염색(헤마톡실린-에오신-사프란, HES)이 있는 슬라이드 1개, 칼슘 침전물을 강조하는 염색이 있는 슬라이드 1개(Von Kossa ) 및 주요 MMP(MMP-1, 2 및 9에 대한 항체)의 면역조직화학적 표지가 있는 3개의 슬라이드.
• 모자이크에 의한 넓은 시야에 걸쳐 모든 스테인드 슬라이드의 표준 명시야 광학 현미경(표준 및 편광 투과광, 형광, DIC)의 LOB에서 영상화; 염증 과정, 조직 리모델링 또는 광물 침전물에 해당하는 관심 영역(ROI) 식별. 광물 퇴적물은 편광 투과광 또는 위상차 또는 DIC에 의해 드러납니다.
• 생검에 존재하는 금속 침전물, 특히 아연을 식별하기 위해 Soleil Synchrotron에서 X선 ​​형광 이미징. 이 작업은 Diffabs 라인의 광물 이미징에 강력한 전문성을 보유한 Dominique Bazin(물리화학 연구소, CNRS, Paris-Saclay University)과 협력하여 수행됩니다.
• 식별된 관심 영역의 LOB에서 또는 여러 타일을 자동으로 연결하여 넓은 시야에서 다광자 이미징. 편광 분해 이미지는 콜라겐과 엘라스틴 섬유의 방향을 매핑하기 위해 매우 밀집된 영역이나 리모델링된 영역에서도 수행됩니다(10).
• 엘라스틴의 양과 구조와 관련된 여러 매개변수를 측정하기 위한 다광자 LOB 이미지의 자동 정량 분석. 자동화된 정량 분석은 다광자 이미지 또는 조직학적 이미지에서 관찰되는 콜라겐 및 기타 관심 구조에 대해서도 수행됩니다. 다양한 이미징 양식의 결과는 각 슬라이드 시리즈에서 상호 연관됩니다. 자동 분석은 반 정량적 분석의 일반적인 편향을 피하고 보다 유익한 구조 매개변수를 얻기 위해 필수적입니다. 예를 들어, 탄성 섬유의 평균 밀도(cm²당, 유두 진피 및 망상 진피), 탄성 섬유의 배향 분포, 엔트로피 및 원형 분산과 같은 매개변수가 엘라스틴 이미지에서 추출됩니다. 이 분포의 탄성 섬유의 곡률 정도, 광상으로부터의 거리.
• 적절한 통계 테스트를 기반으로 한 다중 모드 데이터의 통계 분석. 상대적으로 적은 수의 이용 가능한 인간 샘플을 고려하여 선험적 비모수 테스트(Wilcoxon-Mann-Whitney)가 사용됩니다. 그룹당 최소 8명의 환자가 연구될 것이며, 이는 자동 측정의 정확성과 재현성으로 인해 충분해야 합니다. 동일한 환자에 대해 여러 샘플 또는 이미지 시리즈가 수행되는 경우 중첩된 통계 테스트가 사용됩니다(중첩된 t-테스트 또는 중첩된 Wilcoxon).

두 번째 단계에서 첫 번째 단계의 결과에 따라 이 프로토콜의 다양한 항목이 더 많은 정보에 액세스할 수 있도록 개선됩니다.

• 다광자 이미징은 엘라스틴의 3D 구성을 더 잘 강조하기 위해 손상되지 않은 쥐 피부 생검에서 수행됩니다.
• 염증의 고급 형광 이미징은 스펙트럼 또는 FLIM(형광 수명 이미징 현미경) 측정을 사용하여 체외 쥐 피부에서 수행됩니다.

• THG(Third Harmonic Generation)는 광상 구조를 시각화하는 데 사용됩니다.

  1. Bazin D 외. 병리학적 미세석회화의 특성화 및 일부 물리화학적 측면. Chem Rev. 2012년 10월 10일;112(10):5092-120.
  2. H Colboc, et al. 석회화 요독 동맥병증 환자에서 칼시필락시스 관련 피부 침착물의 국소화, 형태학적 특징 및 화학적 조성. JAMA 피부과 2019.
  3. H Colboc, et al. 피부 유육종증의 육아종과 관련된 무기 침착물의 물리화학적 특성. 유럽 ​​피부과 및 성병학 아카데미 저널 2018.
  4. Haka AS, 외. 라만 분광법을 사용하여 화학적 조성의 차이를 조사하여 양성 및 악성 유방 병변에서 미세석회화를 식별합니다. 암 해상도 2002년 9월 15일;62(18):5375-80.
  5. Munavalli G, et al. 체중 감소로 인한 칼시필락시스: 매트릭스 메탈로프로테이나제의 잠재적인 역할. J 더마톨. 2003;30(12):915-919.
  6. Schanne-Klein M-C. "L'imagerie multiphoton des peaux naturelles et synthétiques. Un nouvel outil pour l'évaluation des produits cosmétiques." Photoniques 88 (2017): 21-24.
  7. 왕, Hequn, 외. "다광자 현미경으로 생체 내에서 기록된 인간 피부의 진피 기질의 연령 관련 형태학적 변화." 생체 의학 광학 저널 23.3 (2018): 030501.
  8. Cui, 제이슨 Z., 외. "다광자 현미경에 의한 마판 증후군의 대동맥 및 피부 엘라스틴 및 콜라겐 형태의 정량화." 구조 생물학 저널 187.3 (2014): 242-253.
  9. Tong, P.L. 등 "다광자 현미경을 사용한 엘라스틴 관련 장애의 조직병리학적 해부에 대한 정량적 접근." British Journal of Dermatology 169.4 (2013): 869-879.
  10. G. Ducourthial, J.-S. Affagard, M. Schmeltz, X. Solinas, M. Lopez-Poncelas, C. Bonod-Bidaud, R. Rubio-Amador, F. Ruggiero, J.-M. Allain, E. Beaurepaire 및 M.-C. Schanne-Klein, "빠른 편광 해결 SHG 이미징으로 피부 스트레칭 중 동적 콜라겐 재구성 모니터링." J. Biophot. 12, e201800336 (2019).