A dermális elasztikus rostok változása a meszesedő dermatosis során: szerkezeti vizsgálat többfoton mikroszkóppal (Calciphoton)

A szövetekben ásványianyag-lerakódásokkal járó kórképek sokfélesége nagy (rákok, fertőző folyamatok, környezeti betegségek) (1). A bőrgyógyászatban számos patológia társul a kalcium ásványianyag-lerakódásaihoz, mint például a calciphylaxis és a pseudoxanthoma elasticum (PXE). Ez idáig kevés tanulmány készült a bőr ásványi lerakódásainak kémiai jellemzőiről, fiziopatológiai következményeiről, a kapcsolódó patológiák előfordulásáról és azok emberi szervekre gyakorolt ​​hatásairól.

Ez motiválta Hester COLBOC, M.D. PhD-projektjét, amely a kalciumlerakódások jellemzésére irányult különféle meszesedő dermatózisokban, beleértve a kalcifilaxist (2) és a szarkoidózist (3). Ez az alapkutatási projekt az LCP (Fizikai-Kémiai Intézet, CNRS, Paris-Saclay Egyetem) és az AP-HP együttműködésének keretében valósul meg, különösen az uronefrológia (vizelet lithiasis) és az onkológia területén. (4) (meszesedések mell- és pajzsmirigyrákban). Kimutattuk, hogy a bőr meszesedése kalcifilaxiában karbapatitból, sarcoidosisban kalcitból áll. Azt is kimutattuk, hogy ezek a lerakódások főként a dermális vagy érfal rugalmas rostjaiban találhatók, ami arra utal, hogy ezekben a rostokban egy molekuláris nukleációs útvonalat kell feltárni.

Ez a szerkezeti és kémiai leírás innovatív, de nem ad választ minden kérdésre, amely a kalcium lerakódásokkal kapcsolatban felmerül: miért van néhány normális foszfokalcium-egyensúlyú páciensnél súlyos bőrelmeszesedés? Ellenkezőleg, miért van más betegeknél, például egyes dializált betegeknél rendkívül zavart a foszfokalcium egyensúlya, de a bőr meszesedése nem? Ez a paradoxon felveti annak lehetőségét, hogy a rugalmas dermális és vaszkuláris rostokban "gócképződési gócok" léteznek, ami egyes betegeknél a foszfokalcium lerakódások kiválását segíti elő. Néhány in vitro modell feltárta ezeket a gócképződési gócokat az elasztikus rostokon belül. (ref. Gourgas et al) Meglehetősen figyelemre méltó, hogy a legtöbb meszesedő dermatózist bőrgyulladás előzi meg. Ezek a bőrgyulladásos jelenségek a kalcium lerakódások kiválását is kiválthatják. Egyes szerzők ezért azt feltételezik, hogy az elasztint a metalloproteináz (MMP) emészti fel az extracelluláris mátrixban, így nukleációs gócokat hozva létre, amelyek kedveznek a foszfokalcium lerakódásoknak. Munavalli et al. kalcifilaxiában szenvedő beteg vizeletmintájában az MMP szintjének növekedését mutatta ki gyors testsúlycsökkenéssel összefüggésben (5). Feltételezik, hogy az emelkedett szérum MMP-szint ebben a betegben a külső rugalmassági határ megváltozásához és vaszkuláris meszesedéshez vezethet. Másrészt ezt a hipotézist alátámasztják a rugalmas rostok változásának más modelljei is, például a bőr öregedése (dermatoporosis) során, amelyben nincs gyulladás és meszesedés.

Projektünk háttérhipotézise, ​​hogy a bőrgyulladás az elasztikus rostok specifikus megváltozásához vezet, ami elősegíti azok meszesedését.

Ennek a hipotézisnek a feltárása érdekében, különösen a kalcifilaxia és a PXE során, javasoljuk a multifoton mikroszkópia használatát, amely egy képalkotó technika, amely elérhető az Ecole Polytechnique Laboratoire d'Optique et Biosciences-nél (LOB). A multifoton mikroszkópiát az 1990-es évek elején fejlesztették ki a konfokális mikroszkópia alternatívájaként, hogy javítsák a biológiai szövetek mélyreható képalkotását szubmikrométeres felbontással. A legfontosabb, hogy a multifoton mikroszkóppal több kontraszterősség kombinálható párhuzamosan, mindenféle jelölés nélkül a szövet különböző elemeinek azonosítására. A második harmonikus generációs (SHG) jelek lehetővé teszik a festetlen fibrilláris kollagén specifikus leképezését páratlan érzékenységgel, míg a kétfoton gerjesztett fluoreszcencia (2PEF) lehetővé teszi a sejtes képalkotást a különféle belső sejtkromoforoknak, valamint a dermisben vagy más szövetekben végzett elasztin képalkotásnak köszönhetően (lásd 1. ábra) (6).

A többfoton mikroszkópiát számos bőrvizsgálatban alkalmazták, többek között a LOB-ban is (lásd az 1. ábrát), amelyek bebizonyították ennek a technikának a nagy jelentőségét a bőrrostok, különösen az elasztin- és kollagénrostok szerkezeti jellemzésében, és ezek lehetséges megváltoztatásában. Alkalmazták a bőr öregedésének, valamint az elasztikus (PXE) vagy a kollagénrostok degenerációjához (Marfan-szindróma) vezető kórképeknél (7-9). Ez a technika ezért kiválóan alkalmas a rugalmas rostok szerkezetének feltárására bőrgyulladásos jelenségek és meszesedő dermatózisok esetén.

Ezzel párhuzamosan a bőr gyulladásos folyamatát más módszerekkel is feltárják. Az immunhisztokémiát a dermális MMP kimutatására, a röntgenfluoreszcenciát pedig (a Synchrotron Soleilnél, a Diffabs vonalon) az intradermális cink és más fémlerakódások kimutatására használják, amint azt korábbi tanulmányainkban is tettük (2. ábra).

2. ábra: Bőrbiopszia röntgenfluoreszcenciája: példa a dermális gyulladásos infiltrátum (A) és az intradermális cink (B) jelenléte közötti összefüggésre, itt a tetoválás lichenoid reakciója során (a képek a Soleil Synchrotron, Diffabs vonalon, S. Reguer, D. Bazin és H. Colboc).

Projektünk fő célja az elasztikus rostok szerkezeti változásainak jellemzése a meszesedő dermatosis során.

A másodlagos célok a következők:

• a bőr gyulladásos folyamatainak a rugalmas rostok megváltozására gyakorolt ​​hatásának vizsgálata,
• lehetséges gócképződési gócok azonosítása a foszfo-kalcium lerakódások kialakulásához a rugalmas dermális és vaszkuláris rostokban.

Bőrminták. A vizsgálatot főként emberi bőrön, de PXE: ABCC6 KO egér egérmodelljén is elvégzik. Pontosabban a LOB-n tanulmányozott anyag a következő lesz:

• Ezen meszesedő dermatózisok diagnosztizálására már gyűjtött humán bőrbiopsziák: PXE, calciphylaxia, egyéb meszesedő gyulladásos dermatózisok (lupus panniculitis, dermatomyositis), a Tenon kórház patológiai laboratóriumából (Dr Moguelet).
• Kontrollként egészséges bőr humán biopsziái különböző korú betegektől (bőrdaganat eltávolítás határa), a Tenon Kórházból. Az előrehaladott bőröregedésben szenvedő betegekre összpontosítunk, különösen a szoláris elasztózisban szenvedő betegekre. Az UV-indukált elasztikus rostok változásának ez a modellje remek kontrollt biztosít a nem gyulladásos és nem meszesedő elasztikus rostok károsodásai tekintetében.
• Bőrbiopsziák a PXE egérmodellből (ABCC6 KO egér) és megfelelő kontroll egerekből, az INSERM Unit 1155-től, Tenon Hospital.

Protokollok. Mindezeket a biopsziákat multifoton mikroszkóppal jellemezzük a 2PEF és SHG kontrasztok kombinálásával annak érdekében, hogy egyidejűleg leképezzük az elasztikus és kollagénrostokat. Első lépésben a kísérleti protokoll a következő lesz:

• Minden biopsziából több sorozatlemez gyártása a Tenon Kórházban: 1 festetlen ("fehér") tárgylemez többfoton képalkotáshoz, 1 tárgylemez szokásos morfológiai festéssel (hematoxilin-eozin-szafran, HES), 1 tárgylemez festéssel, kiemelve a kalcium lerakódásokat (Von Kossa ) és 3 tárgylemez a fő MMP-k (MMP-1, 2 és 9 elleni antitestek) immunhisztokémiai jelölésével.
• az összes megfestett tárgylemez leképezése LOB-ban egy szabványos világosmezős optikai mikroszkópon (standard és polarizált áteresztő fény, fluoreszcencia, DIC) egy nagy látómezőn mozaikozással; a gyulladásos folyamatoknak, szöveti átalakulásnak vagy ásványi lerakódásoknak megfelelő régiók (ROI) azonosítása. Vegye figyelembe, hogy az ásványi lerakódásokat polarizált áteresztő fény vagy fáziskontraszt vagy DIC mutatják.
• Röntgen-fluoreszcens képalkotás a Soleil Synchrotronnál a biopsziákban található fémlerakódások, különösen a cink azonosítására. Ez Dominique Bazinnal (Fizikai-Kémiai Intézet, CNRS, Paris-Saclay University) együttműködésben valósul meg, amely nagy szakértelemmel rendelkezik a Diffabs termékcsalád ásványi képalkotásában.
• Többfoton képalkotás az azonosított érdeklődésre számot tartó területek LOB-jában, vagy akár nagy látómezőn is, több lapka automatikus összefűzésével. Polarizációs felbontású képeket is készítenek nagyon sűrű vagy átalakított területeken, hogy feltérképezzék a kollagén és elasztin rostok irányát (10).
• Többfoton LOB képek automatizált kvantitatív elemzése az elasztin mennyiségével és szerkezetével kapcsolatos számos paraméter mérésére. Automatizált kvantitatív elemzéseket végeznek a kollagénen és a többfoton vagy szövettani felvételeken megfigyelt egyéb érdekes struktúrákon is. A különböző képalkotó eljárások eredményeit minden diasorozaton össze kell vetni. Megjegyzendő, hogy az automatikus elemzés elengedhetetlen mind a félkvantitatív elemzés szokásos torzításainak elkerüléséhez, mind az informatívabb szerkezeti paraméterek megszerzéséhez. Például a következő paramétereket kinyerjük az elasztin képekből: a rugalmas rostok átlagos sűrűsége (per cm², a papilláris dermisben és a reticularis dermisben), a rugalmas rostok orientációs eloszlása, az entrópia és a körkörös variancia ennek az eloszlásnak a görbületi foka a rugalmas rostok, távolságuk az ásványi lerakódásoktól.
• Multimodális adatok statisztikai elemzése, megfelelő statisztikai tesztek alapján. A rendelkezésre álló emberi minták viszonylag kis száma miatt eleve nem-paraméteres teszteket (Wilcoxon-Mann-Whitney) fognak alkalmazni. Csoportonként minimum 8 beteget vizsgálnak meg, ami az automatizált mérések pontossága és reprodukálhatósága miatt elegendő. Ha több mintát vagy képsorozatot végeznek ugyanazon a páciensen, beágyazott statisztikai teszteket alkalmaznak (beágyazott t-tesztek vagy beágyazott Wilcoxon).

A második lépésben és az első lépés eredményei alapján a protokoll különböző elemeit továbbfejlesztjük a további információk elérése érdekében:

• Az elasztin 3D-s szerveződésének jobb kiemelése érdekében többfoton képalkotást végeznek ép egérbőr biopsziákon.
• A gyulladás fejlett fluoreszcens képalkotását ex vivo egérbőrben végezzük spektrális vagy FLIM (fluorescence lifetime imaging microscopy) mérésekkel.

• A harmadik harmonikus generációt (THG) fogják használni az ásványlelőhelyek szerkezetének megjelenítésére.

  1. Bazin D és mtsai. A kóros mikromeszesedések jellemzése és néhány fizikai-kémiai vonatkozása. Chem Rev. 10., 2012. október; 112(10):5092-120.

A szövetekben ásványianyag-lerakódásokkal járó kórképek sokfélesége nagy (rákok, fertőző folyamatok, környezeti betegségek) (1). A bőrgyógyászatban számos patológia társul a kalcium ásványianyag-lerakódásaihoz, mint például a calciphylaxis és a pseudoxanthoma elasticum (PXE). Ez idáig kevés tanulmány készült a bőr ásványi lerakódásainak kémiai jellemzőiről, fiziopatológiai következményeiről, a kapcsolódó patológiák előfordulásáról és azok emberi szervekre gyakorolt ​​hatásairól.

Ez motiválta Hester COLBOC, M.D. PhD-projektjét, amely a kalciumlerakódások jellemzésére irányult különféle meszesedő dermatózisokban, beleértve a kalcifilaxist (2) és a szarkoidózist (3). Ez az alapkutatási projekt az LCP (Fizikai-Kémiai Intézet, CNRS, Paris-Saclay Egyetem) és az AP-HP együttműködésének keretében valósul meg, különösen az uronefrológia (vizelet lithiasis) és az onkológia területén. (4) (meszesedések mell- és pajzsmirigyrákban). Kimutattuk, hogy a bőr meszesedése kalcifilaxiában karbapatitból, sarcoidosisban kalcitból áll. Azt is kimutattuk, hogy ezek a lerakódások főként a dermális vagy érfal rugalmas rostjaiban találhatók, ami arra utal, hogy ezekben a rostokban egy molekuláris nukleációs útvonalat kell feltárni.

Ez a szerkezeti és kémiai leírás innovatív, de nem ad választ minden kérdésre, amely a kalcium lerakódásokkal kapcsolatban felmerül: miért van néhány normális foszfokalcium-egyensúlyú páciensnél súlyos bőrelmeszesedés? Ellenkezőleg, miért van más betegeknél, például egyes dializált betegeknél rendkívül zavart a foszfokalcium egyensúlya, de a bőr meszesedése nem? Ez a paradoxon felveti annak lehetőségét, hogy a rugalmas dermális és vaszkuláris rostokban "gócképződési gócok" léteznek, ami egyes betegeknél a foszfokalcium lerakódások kiválását segíti elő. Néhány in vitro modell feltárta ezeket a gócképződési gócokat az elasztikus rostokon belül. (ref. Gourgas et al) Meglehetősen figyelemre méltó, hogy a legtöbb meszesedő dermatózist bőrgyulladás előzi meg. Ezek a bőrgyulladásos jelenségek a kalcium lerakódások kiválását is kiválthatják. Egyes szerzők ezért azt feltételezik, hogy az elasztint a metalloproteináz (MMP) emészti fel az extracelluláris mátrixban, így nukleációs gócokat hozva létre, amelyek kedveznek a foszfokalcium lerakódásoknak. Munavalli et al. kalcifilaxiában szenvedő beteg vizeletmintájában az MMP szintjének növekedését mutatta ki gyors testsúlycsökkenéssel összefüggésben (5). Feltételezik, hogy az emelkedett szérum MMP-szint ebben a betegben a külső rugalmassági határ megváltozásához és vaszkuláris meszesedéshez vezethet. Másrészt ezt a hipotézist alátámasztják a rugalmas rostok változásának más modelljei is, például a bőr öregedése (dermatoporosis) során, amelyben nincs gyulladás és meszesedés.

Projektünk háttérhipotézise, ​​hogy a bőrgyulladás az elasztikus rostok specifikus megváltozásához vezet, ami elősegíti azok meszesedését.

Ennek a hipotézisnek a feltárása érdekében, különösen a kalcifilaxia és a PXE során, javasoljuk a multifoton mikroszkópia használatát, amely egy képalkotó technika, amely elérhető az Ecole Polytechnique Laboratoire d'Optique et Biosciences-nél (LOB). A multifoton mikroszkópiát az 1990-es évek elején fejlesztették ki a konfokális mikroszkópia alternatívájaként, hogy javítsák a biológiai szövetek mélyreható képalkotását szubmikrométeres felbontással. A legfontosabb, hogy a multifoton mikroszkóppal több kontraszterősség kombinálható párhuzamosan, mindenféle jelölés nélkül a szövet különböző elemeinek azonosítására. A második harmonikus generációs (SHG) jelek lehetővé teszik a festetlen fibrilláris kollagén specifikus leképezését páratlan érzékenységgel, míg a kétfoton gerjesztett fluoreszcencia (2PEF) lehetővé teszi a sejtes képalkotást a különféle belső sejtkromoforoknak, valamint a dermisben vagy más szövetekben végzett elasztin képalkotásnak köszönhetően (lásd 1. ábra) (6).

A többfoton mikroszkópiát számos bőrvizsgálatban alkalmazták, többek között a LOB-ban is (lásd az 1. ábrát), amelyek bebizonyították ennek a technikának a nagy jelentőségét a bőrrostok, különösen az elasztin- és kollagénrostok szerkezeti jellemzésében, és ezek lehetséges megváltoztatásában. Alkalmazták a bőr öregedésének, valamint az elasztikus (PXE) vagy a kollagénrostok degenerációjához (Marfan-szindróma) vezető kórképeknél (7-9). Ez a technika ezért kiválóan alkalmas a rugalmas rostok szerkezetének feltárására bőrgyulladásos jelenségek és meszesedő dermatózisok esetén.

Ezzel párhuzamosan a bőr gyulladásos folyamatát más módszerekkel is feltárják. Az immunhisztokémiát a dermális MMP kimutatására, a röntgenfluoreszcenciát pedig (a Synchrotron Soleilnél, a Diffabs vonalon) az intradermális cink és más fémlerakódások kimutatására használják, amint azt korábbi tanulmányainkban is tettük (2. ábra).

2. ábra: Bőrbiopszia röntgenfluoreszcenciája: példa a dermális gyulladásos infiltrátum (A) és az intradermális cink (B) jelenléte közötti összefüggésre, itt a tetoválás lichenoid reakciója során (a képek a Soleil Synchrotron, Diffabs vonalon, S. Reguer, D. Bazin és H. Colboc).

Projektünk fő célja az elasztikus rostok szerkezeti változásainak jellemzése a meszesedő dermatosis során.

A másodlagos célok a következők:

• a bőr gyulladásos folyamatainak a rugalmas rostok megváltozására gyakorolt ​​hatásának vizsgálata,
• lehetséges gócképződési gócok azonosítása a foszfo-kalcium lerakódások kialakulásához a rugalmas dermális és vaszkuláris rostokban.

Bőrminták. A vizsgálatot főként emberi bőrön, de PXE: ABCC6 KO egér egérmodelljén is elvégzik. Pontosabban a LOB-n tanulmányozott anyag a következő lesz:

• Ezen meszesedő dermatózisok diagnosztizálására már gyűjtött humán bőrbiopsziák: PXE, calciphylaxia, egyéb meszesedő gyulladásos dermatózisok (lupus panniculitis, dermatomyositis), a Tenon kórház patológiai laboratóriumából (Dr Moguelet).
• Kontrollként egészséges bőr humán biopsziái különböző korú betegektől (bőrdaganat eltávolítás határa), a Tenon Kórházból. Az előrehaladott bőröregedésben szenvedő betegekre összpontosítunk, különösen a szoláris elasztózisban szenvedő betegekre. Az UV-indukált elasztikus rostok változásának ez a modellje remek kontrollt biztosít a nem gyulladásos és nem meszesedő elasztikus rostok károsodásai tekintetében.
• Bőrbiopsziák a PXE egérmodellből (ABCC6 KO egér) és megfelelő kontroll egerekből, az INSERM Unit 1155-től, Tenon Hospital.

Protokollok. Mindezeket a biopsziákat multifoton mikroszkóppal jellemezzük a 2PEF és SHG kontrasztok kombinálásával annak érdekében, hogy egyidejűleg leképezzük az elasztikus és kollagénrostokat. Első lépésben a kísérleti protokoll a következő lesz:

• Minden biopsziából több sorozatlemez gyártása a Tenon Kórházban: 1 festetlen ("fehér") tárgylemez többfoton képalkotáshoz, 1 tárgylemez szokásos morfológiai festéssel (hematoxilin-eozin-szafran, HES), 1 tárgylemez festéssel, kiemelve a kalcium lerakódásokat (Von Kossa ) és 3 tárgylemez a fő MMP-k (MMP-1, 2 és 9 elleni antitestek) immunhisztokémiai jelölésével.
• az összes megfestett tárgylemez leképezése LOB-ban egy szabványos világosmezős optikai mikroszkópon (standard és polarizált áteresztő fény, fluoreszcencia, DIC) egy nagy látómezőn mozaikozással; a gyulladásos folyamatoknak, szöveti átalakulásnak vagy ásványi lerakódásoknak megfelelő régiók (ROI) azonosítása. Vegye figyelembe, hogy az ásványi lerakódásokat polarizált áteresztő fény vagy fáziskontraszt vagy DIC mutatják.
• Röntgen-fluoreszcens képalkotás a Soleil Synchrotronnál a biopsziákban található fémlerakódások, különösen a cink azonosítására. Ez Dominique Bazinnal (Fizikai-Kémiai Intézet, CNRS, Paris-Saclay University) együttműködésben valósul meg, amely nagy szakértelemmel rendelkezik a Diffabs termékcsalád ásványi képalkotásában.
• Többfoton képalkotás az azonosított érdeklődésre számot tartó területek LOB-jában, vagy akár nagy látómezőn is, több lapka automatikus összefűzésével. Polarizációs felbontású képeket is készítenek nagyon sűrű vagy átalakított területeken, hogy feltérképezzék a kollagén és elasztin rostok irányát (10).
• Többfoton LOB képek automatizált kvantitatív elemzése az elasztin mennyiségével és szerkezetével kapcsolatos számos paraméter mérésére. Automatizált kvantitatív elemzéseket végeznek a kollagénen és a többfoton vagy szövettani felvételeken megfigyelt egyéb érdekes struktúrákon is. A különböző képalkotó eljárások eredményeit minden diasorozaton össze kell vetni. Megjegyzendő, hogy az automatikus elemzés elengedhetetlen mind a félkvantitatív elemzés szokásos torzításainak elkerüléséhez, mind az informatívabb szerkezeti paraméterek megszerzéséhez. Például a következő paramétereket kinyerjük az elasztin képekből: a rugalmas rostok átlagos sűrűsége (per cm², a papilláris dermisben és a reticularis dermisben), a rugalmas rostok orientációs eloszlása, az entrópia és a körkörös variancia ennek az eloszlásnak a görbületi foka a rugalmas rostok, távolságuk az ásványi lerakódásoktól.
• Multimodális adatok statisztikai elemzése, megfelelő statisztikai tesztek alapján. A rendelkezésre álló emberi minták viszonylag kis száma miatt eleve nem-paraméteres teszteket (Wilcoxon-Mann-Whitney) fognak alkalmazni. Csoportonként minimum 8 beteget vizsgálnak meg, ami az automatizált mérések pontossága és reprodukálhatósága miatt elegendő. Ha több mintát vagy képsorozatot végeznek ugyanazon a páciensen, beágyazott statisztikai teszteket alkalmaznak (beágyazott t-tesztek vagy beágyazott Wilcoxon).

A második lépésben és az első lépés eredményei alapján a protokoll különböző elemeit továbbfejlesztjük a további információk elérése érdekében:

• Az elasztin 3D-s szerveződésének jobb kiemelése érdekében többfoton képalkotást végeznek ép egérbőr biopsziákon.
• A gyulladás fejlett fluoreszcens képalkotását ex vivo egérbőrben végezzük spektrális vagy FLIM (fluorescence lifetime imaging microscopy) mérésekkel.

• A harmadik harmonikus generációt (THG) fogják használni az ásványlelőhelyek szerkezetének megjelenítésére.

  1. Bazin D és mtsai. A kóros mikromeszesedések jellemzése és néhány fizikai-kémiai vonatkozása. Chem Rev. 10., 2012. október; 112(10):5092-120.
  2. H Colboc és mtsai. A kalcifilaxissal összefüggő bőrlerakódások lokalizációja, morfológiai jellemzői és kémiai összetétele calcific urémiás arteriolopathiában szenvedő betegeknél. JAMA bőrgyógyászat 2019.
  3. H Colboc és mtsai. A granulomákkal kapcsolatos szervetlen lerakódások fizikai-kémiai jellemzése a bőr sarcoidosisában. Az Európai Bőrgyógyászati ​​és Venereológiai Akadémia folyóirata 2018.
  4. Haka AS és mtsai. Mikromeszesedések azonosítása jóindulatú és rosszindulatú emlőléziókban a kémiai összetételük különbségeinek vizsgálatával Raman spektroszkópiával. Cancer Res. 2002. szeptember 15.;62(18):5375-80.
  5. Munavalli G és mtsai. Súlycsökkenés által kiváltott kalcifilaxia: a mátrix metalloproteinázok lehetséges szerepe. J Dermatol. 2003;30(12):915-919.
  6. Schanne-Klein M-C. "L'imagerie multiphoton des peaux naturelles et synthetiques. Un nouvel outil pour l'évaluation des produits cosmétiques." Photoniques 88 (2017): 21-24.
  7. Wang, Hequn és mtsai. "A dermális mátrix életkorral összefüggő morfológiai változásai az emberi bőrben, in vivo multifoton mikroszkóppal dokumentálva." Journal of Medicinal Optics 23.3 (2018): 030501.
  8. Cui, Jason Z. és mtsai. "Az aorta és a bőr elasztin és kollagén morfológiájának mennyiségi meghatározása Marfan-szindrómában multifoton mikroszkóppal." Journal of structure Biology 187.3 (2014): 242-253.
  9. Tong, P. L. és mtsai. "Az elasztinnal kapcsolatos rendellenességek kórszövettani disszekciójának kvantitatív megközelítése multifoton mikroszkóppal." British Journal of Dermatology 169.4 (2013): 869-879.
  10. G. Ducourthial, J.-S. Affagard, M. Schmeltz, X. Solinas, M. Lopez-Poncelas, C. Bonod-Bidaud, R. Rubio-Amador, F. Ruggiero, J.-M. Allain, E. Beaurepaire és M.-C. Schanne-Klein: "A dinamikus kollagén-újrarendeződés nyomon követése a bőr nyújtása során gyors polarizációs felbontású SHG képalkotással." J. Biophot. 12, e201800336 (2019).