Allium Sativum과 Moringa Oleifera 추출물이 치아 법랑질에 미치는 영향

이 동물 실험 연구는 Lahore 보건 과학 대학(UHS)의 animal House와 Lahore의 COMSATS 대학에서 수행됩니다. 이 연구를 위해 54마리의 건강한 수컷, 흰색 NewZeeland 토끼(9~10주)를 연구에 사용할 것입니다. 토끼는 무작위로 6개의 그룹으로 나뉩니다. 샘플 크기는 각 그룹의 토끼 9마리입니다. 실험동물은 난수생성기를 사용하여 1,2,3,4에서 54까지 번호를 부여하고 무작위로 6개의 그룹(n=9)으로 나누어 그룹 A, B, C, D, E, F. 체중 1000-1200g(나이 9-10주)의 건강한 수컷 흰색 뉴질랜드 토끼를 라호르의 수의학 및 동물 과학 대학에서 선택합니다. 동물들은 UHS의 동물 집으로 옮겨질 것입니다. 동물은 새로운 환경에 순응하기 위해 2주 동안 12/12시간의 자연광 및 암주기 하에 제어된 실온(22-24°C) 및 습도(45-65%)에서 실험 연구 실험실에 보관됩니다. 모든 실험 동물은 야채, 과일 및 증류수를 자유롭게 먹일 것입니다. 12주가 끝나면 모든 동물을 깊은 마취하에 희생시킨다. Ketamine hydrochloride 45 mg/kg b.w 및 xylazine 5 mg/kg b.w I/M을 투여하여 깊은 마취를 유지합니다. 그 후 20 mg xylazine을 귓정맥에 주사하여 토끼를 마취시킨 상태에서 희생시켰다(35).

혈액 샘플링: 0일, 8주 후 및 12주 말에 4ml 혈액을 수집하기 위해 중앙 귀 동맥(36) 또는 측면 복재 정맥을 선택합니다. 샘플은 혈중 납 수치, 알칼리 포스파타제, 칼슘 및 인산염 수치와 같은 조사를 위해 혈청 분리 튜브에 수집됩니다.

조직 샘플링 기법:

조사를 위해 크라운 순측 표면의 중간 1/3에서 4x5 mm2 부분을 채취합니다. 절단은 다이아몬드 디스크와 고속 터빈에 의해 물을 관개하여 시료를 가열하면서 난형으로 만들 것입니다. SEM 및 AFM을 위해 모든 토끼의 우측 하악 절치를 선택합니다. 모든 토끼의 왼쪽 하악 앞니를 SEM-EDX 및 RMS 분석으로 선택합니다. 모든 샘플은 라벨을 붙이고 72시간 동안 12% 포르말린이 포함된 멸균 용기에 보관합니다.

실험실 처리:

1. Scan Electron Microscopy: 우측 하악 절치를 SEM 분석을 위해 선택합니다. 법랑질의 구조와 형태적 특징은 이미지로 볼 수 있습니다. 샘플은 증류수로 세척되고 열풍 송풍기로 저속으로 건조됩니다. 한 번에 16개의 샘플을 샘플 찌르기에 고정할 수 있습니다. 샘플은 이중 구리 테이프로 고정됩니다. 노출된 찌르기도 구리 테이프로 덮고 샘플 부분만 덮지 않은 상태로 둡니다.

   금도금은 스퍼터 코터 기계에서 수행되어 이미지의 미세한 세부 사항을 위한 표면 도체를 만듭니다. 샘플 찌르기가 스퍼터 기계 챔버에 배치되고 뚜껑이 닫힙니다. 챔버 내부에 진공이 생성되고 아르곤 가스가 채워집니다. 40볼트의 전위가 주어집니다. 이 플라즈마에 의해 챔버 내부에 형성되고 아르곤 가스의 전자가 금판에 충돌합니다. 작은 금 입자는 샘플 찌르기에서 스퍼터링을 시작합니다. 골드 코팅이 완료되면 절차가 반대로 됩니다. 챔버가 공기로 채워지고 뚜껑이 열립니다. 이제 샘플은 초미세 구조 세부 사항을 위해 NOVA NANOSEM 450에서 처리됩니다.

2. 에너지 분산 분광법: EDX는 광물 성분의 원소 구성을 연구하는 데 사용됩니다. NOVA NANOSEM 450에는 OXFORD X-ACT, PENTA FET의 검출기가 부착됩니다. SEM에 사용되는 동일한 샘플은 SEM-EDX 분석에도 사용됩니다. 이것은 최대 2 미크론 두께의 표면에 대한 세부 정보를 제공합니다.

3. Atomic Force Microscope: AFM(SPM-9500J3, Shimadzu Corp, Japan)은 법랑질 표면의 형태학적 특징을 평가하기 위해 사용된다. 시료 전처리 없이 3차원 표면 형상을 제공합니다. 이 현미경은 프로브로 샘플을 스캔하도록 설계되었습니다. 샘플은 고정되고 수동으로 조정되는 스텁에 첨부됩니다. 레이저 조정은 프로브 주파수를 결정한 후 수행됩니다. 마지막으로 스캔 및 이미지 처리는 WinSPM 시스템 처리로 수행됩니다. 대표적인 샘플의 경우, AFM(SPM-9500J3, Shimadzu Corp, Japan) 및 AFM 소프트웨어(SPM-Offline, Shimadzu Corp, Japan)를 사용하여 6개의 다른 영역(2.0×2.0 μm 스캔 영역)에서 현미경 사진을 찍습니다.

   AFM은 곡률 반경이 ~10nm인 팁으로 일반적으로 실리콘 또는 실리콘 질화물로 만들어진 표면을 가로질러 미크론 크기의 캔틸레버를 스캔하여 표면의 3D 이미지를 생성합니다. 캔틸레버는 팁과 표면 사이의 힘(~nN)에 의해 편향되며 정전기력, 용해력, Vander Waals 상호 작용 및 화학 결합의 기여를 포함합니다. 캔틸레버의 이러한 편향은 캔틸레버의 상단 표면에서 컴퓨터에 이미지를 제공하는 포토다이오드 어레이로 반사되는 레이저 스폿으로 측정됩니다.

4. 라만 분광법: 화학 구조, 결정도 및 분자 상호 작용에 대한 자세한 정보를 제공하는 비파괴 화학 분석 기술입니다. RMS는 샘플의 분자 구성 및 상호 작용에 대한 법랑질의 전체 두께에 대한 세부 정보를 제공합니다. 이 분석에는 특별한 샘플 준비가 필요하지 않으며 샘플을 다른 조사에도 사용할 수 있습니다. RENISHAW UK의 InVia 라만 현미경이 이 연구에 사용될 것입니다. 레이저 강도 488nm가 10초 동안 사용됩니다. RMS는 6개의 다른 지점에서 수행되며 평균 판독값이 연구에 사용됩니다.