大蒜和辣木提取物对牙釉质的影响

这项动物实验研究将在拉合尔健康科学大学 (UHS) 和拉合尔 COMSATS 大学动物之家进行。 对于这项研究，将取 54 只健康的雄性新西兰白兔（9 至 10 周龄）进行研究。 兔子将被随机分成 6 组。 每组样本量为 9 只兔子。 实验动物将使用随机数发生器分配编号 1、2、3、4，直到 54，并随机分为六组（n=9），并分配为 A、B、C、D、E 和F.将从拉合尔兽医和动物科学大学挑选体重1000-1200克(9-10周龄)的健康雄性白色新西兰兔。 这些动物将被转移到 UHS 的动物房。 动物将在受控室温 (22-24°C) 和湿度 (45-65%) 下在 12/12 小时自然光照和黑暗循环下饲养 2 周，以适应新环境。 所有实验动物将随意喂食蔬菜、水果和蒸馏水。 在 12 周结束时，将在深度麻醉下处死所有动物。 将给予盐酸氯胺酮 45 mg/kg b.w 和甲苯噻嗪 5 mg/kg b.w I/M 以维持深度麻醉。 之后，将20 mg甲苯噻嗪注入耳廓静脉，在麻醉状态下处死兔子（35）。

采血：在第0天、8周后和12周结束时，将选择耳中央动脉(36)或外侧隐静脉采集4ml血液。 样本将收集在血清分离管中，用于血铅计数、碱性磷酸酶、钙和磷酸盐水平等研究。

组织取样技术：

从冠唇面的中间三分之一处取 4x5 mm2 的一部分用于检查。 切割将通过金刚石圆盘和高速涡轮机进行，用水冲洗使样品过热呈卵形。 将选择所有兔子的右下颌门牙进行 SEM 和 AFM。 选取所有家兔的左下颌切牙进行SEM-EDX和RMS分析。 所有样品都将被贴上标签并储存在装有 12% 福尔马林的灭菌容器中 72 小时。

实验室处理：

1. 扫描电子显微镜：将选择右下颌切牙进行 SEM 分析。 牙釉质的结构和形态特征将从它的图像中看出。 样品将用蒸馏水洗涤，并用低速热风机吹干。 一次可以将 16 个样品固定在一个样品刺上。 样品将通过双面铜带固定在刺上。 暴露的刺也将被铜带覆盖，只有样品部分会被覆盖。

   金涂层将在溅射镀膜机上完成，以制作表面导体以获得精细的图像细节。 样品棒将放置在溅射机室中并关闭盖子。 在腔室内部，将产生真空并填充氩气。 将提供 40 伏电压。 通过这种等离子体将在腔室内形成，氩气的电子将撞击金板。 微小的金颗粒将开始溅射到样品上。 一旦完成镀金，程序将被逆转。 腔室将充满空气，盖子将打开。 现在，样品将在 NOVA NANOSEM 450 中进行超微结构细节处理。

2. 能量色散光谱：EDX 将用于研究矿物含量的元素组成。 OXFORD X-ACT、PENTA FET 的检测器将与 NOVA NANOSEM 450 连接。 用于 SEM 的相同样品也将用于 SEM-EDX 分析。 这将提供高达 2 微米厚度的表面细节。

3. 原子力显微镜：AFM（SPM-9500J3，Shimadzu Corp，Japan）将用于评估牙釉质表面的形态特征。 它无需任何样品制备即可提供三维表面形貌。 该显微镜旨在使用探针扫描样品。 样品将附在存根上，存根将被固定并手动调整。 激光调整将在确定探头频率后进行。 最后，扫描和图像处理将通过 WinSPM 系统处理完成。 对于一个代表性样品，将使用 AFM（SPM-9500J3，Shimadzu Corp，Japan）和 AFM 软件（SPM-Offline，Shimadzu Corp，Japan）拍摄六个不同区域（2.0×2.0 μm 扫描区域）的显微照片。

   AFM 通过在表面上扫描微米尺寸的悬臂来创建表面的 3D 图像，该悬臂通常由硅或氮化硅制成，尖端的曲率半径约为 10nm。 悬臂被尖端和表面之间的力偏转，这些力为 ~nN，包括静电力、溶剂化力、范德瓦尔斯相互作用和化学键合的贡献。 悬臂的这种偏转是通过从悬臂的顶表面反射到光电二极管阵列中的激光点来测量的，该阵列在计算机上提供图像。

4. 拉曼光谱：这是一种非破坏性化学分析技术，可提供有关化学结构、结晶度和分子相互作用的详细信息。 RMS 将为我们提供整个牙釉质厚度的详细信息，包括样品的分子组成及其相互作用。 此分析不需要特殊的样品制备，样品也可用于其他研究。 RENISHAW UK 的 InVia 拉曼显微镜将用于这项研究。 将使用 488nm 的激光强度 10 秒。 RMS 将在 6 个不同的点进行，平均读数将用于研究。