Effets de l'extrait d'Allium Sativum et de Moringa Oleifera sur l'émail dentaire

Cette étude expérimentale sur les animaux sera réalisée à l'animal House, à l'Université des sciences de la santé de Lahore (UHS) et à l'Université COMSATS de Lahore. Pour cette étude, cinquante-quatre lapins NewZeeland blancs mâles en bonne santé (9 à 10 semaines) seront prélevés pour l'étude. Les lapins seront divisés au hasard en 6 groupes. La taille de l'échantillon sera de 9 lapins dans chaque groupe. Les animaux expérimentaux se verront attribuer le numéro 1,2,3,4, jusqu'à 54 à l'aide du générateur de nombres aléatoires et seront divisés au hasard en six groupes (n = 9) et seront attribués aux groupes A, B, C, D, E et F. Des lapins New Zeeland blancs mâles en bonne santé pesant entre 1 000 et 1 200 grammes (âgés de 9 à 10 semaines) seront sélectionnés à l'Université des sciences vétérinaires et animales de Lahore. Les animaux seront transférés à l'animalerie de l'UHS. Les animaux seront gardés dans un laboratoire de recherche expérimentale à température ambiante contrôlée (22-24°C) et humidité (45-65 %) sous un cycle de lumière naturelle et d'obscurité de 12/12 heures pendant 2 semaines pour s'acclimater dans un nouvel environnement. Tous les animaux de laboratoire seront nourris de légumes, de fruits et d'eau distillée à volonté. Au bout de 12 semaines, tous les animaux seront sacrifiés sous anesthésie profonde. Du chlorhydrate de kétamine 45 mg/kg de poids corporel et de la xylazine 5 mg/kg de poids corporel I/M seront administrés pour maintenir une anesthésie profonde. Ensuite, 20 mg de xylazine ont été injectés dans la veine pavillonnaire pour sacrifier les lapins pendant qu'ils étaient anesthésiés.(35).

Prélèvement sanguin : L'artère auriculaire centrale (36) ou la veine saphène latérale sera sélectionnée pour prélever 4 ml de sang au jour 0, après 8 semaines et au bout de 12 semaines. L'échantillon sera collecté dans un tube de séparation de sérum pour des investigations telles que la plombémie, la phosphatase alcaline, le niveau de calcium et de phosphate.

Technique d'échantillonnage des tissus :

Une portion de 4x5 mm2 du tiers médian de la surface labiale de la couronne sera prélevée pour les investigations. La coupe sera effectuée par un disque diamanté et une turbine à grande vitesse avec irrigation d'eau pour éviter la surchauffe de l'échantillon. Les incisives mandibulaires droites de tous les lapins seront sélectionnées pour SEM et AFM. Les incisives mandibulaires gauches de tous les lapins seront sélectionnées par analyse SEM-EDX et RMS. Tous les échantillons seront étiquetés et stockés dans un récipient stérilisé contenant 12 % de formol pendant 72 heures.

Traitement en laboratoire :

1. Microscopie électronique à balayage : L'incisive mandibulaire droite sera sélectionnée pour l'analyse SEM. La structure et les caractéristiques morphologiques de l'émail seront vues par ses images. L'échantillon sera lavé avec de l'eau distillée et sera séché par un ventilateur à air chaud à vitesse lente. Seize échantillons peuvent être fixés sur un échantillon à la fois. Les échantillons seront fixés sur stab par un double ruban de cuivre. Le coup exposé sera également recouvert d'un ruban de cuivre et seule la partie échantillon sera laissée à découvert.

   Le revêtement d'or sera effectué dans une machine à enduire par pulvérisation pour rendre la surface conductrice pour les détails fins des images. L'échantillon sera placé dans la chambre de la machine à pulvérisation et le couvercle sera fermé. À l'intérieur de la chambre, le vide sera créé et le gaz argon sera rempli. Un potentiel de 40 volts sera donné. Par ce plasma sera formé à l'intérieur de la chambre et les électrons du gaz argon frapperont la plaque d'or. Les minuscules particules d'or commenceront à cracher sur l'échantillon. Une fois le revêtement doré effectué, la procédure sera inversée. La chambre sera remplie d'air et le couvercle sera ouvert. Maintenant, l'échantillon sera traité dans NOVA NANOSEM 450 pour les détails ultrastructuraux.

2. Spectroscopie à dispersion d'énergie : EDX sera utilisé pour étudier la composition élémentaire des contenus minéraux. Un détecteur de OXFORD X-ACT, PENTA FET sera attaché avec NOVA NANOSEM 450. Le même échantillon utilisé pour SEM sera également utilisé pour l'analyse SEM-EDX. Cela donnera des détails sur la surface jusqu'à 2 microns d'épaisseur.

3. Microscope à force atomique : AFM (SPM-9500J3, Shimadzu Corp, Japon) sera utilisé pour l'évaluation des caractéristiques morphologiques de la surface de l'émail. Il fournit la topographie de surface tridimensionnelle sans aucune préparation d'échantillon. Cette microscopie est conçue pour balayer l'échantillon avec une sonde. L'échantillon sera attaché sur le talon, qui sera fixé et ajusté manuellement. Le réglage du laser sera effectué après avoir déterminé la fréquence de la sonde. Enfin, la numérisation et le traitement des images seront effectués avec le traitement du système WinSPM. Pour un échantillon représentatif, des micrographies dans six zones différentes (zone de balayage de 2,0 × 2,0 μm) seront prises à l'aide de l'AFM (SPM-9500J3, Shimadzu Corp, Japon) et du logiciel AFM (SPM-Offline, Shimadzu Corp, Japon).

   L'AFM crée des images 3D d'une surface en balayant un porte-à-faux de taille micronique sur la surface, qui est généralement en silicium ou en nitrure de silicium, avec une pointe dont le rayon de courbure est d'environ 10 nm. Le porte-à-faux est dévié par les forces entre la pointe et la surface, qui sont ~ nN et incluent les contributions des forces électrostatiques, des forces de solvatation, des interactions de Vander Waals et de la liaison chimique. Cette déflexion du porte-à-faux est mesurée par un point laser se reflétant depuis la surface supérieure du porte-à-faux dans un réseau de photodiodes, qui fournit des images sur l'ordinateur.

4. Spectroscopie Raman : C'est une technique d'analyse chimique non destructive qui fournit des informations détaillées sur la structure chimique, la cristallinité et les interactions moléculaires. Le RMS nous donnera les détails de toute l'épaisseur de l'émail sur la composition moléculaire et son interaction avec l'échantillon. Aucune préparation spéciale de l'échantillon ne sera nécessaire pour cette analyse et l'échantillon peut également être utilisé pour d'autres investigations. Le microscope InVia Raman de RENISHAW UK sera utilisé pour cette étude. L'intensité laser 488nm sera utilisée pendant 10 secondes. Le RMS sera effectué sur 6 points différents et la lecture moyenne sera utilisée dans l'étude.