Effekter av Allium Sativum og Moringa Oleifera-ekstrakt på tannemalje
Beskyttende effekter av Allium Sativum og Moringa Oleifera-ekstrakt for å lindre blyinduserte defekter på tannemalje hos kaniner
Primært mål er å observere effekten av bly på tannemaljen til kanin ved å måle;
- Strukturell og morfologisk endring av SEM, AFM
- Elementær komposisjon av SEM-EDX
- Molekylær sammensetning og hydroksyapatittkrystallendringer ved Raman-spektroskopi
- Blodparametre ved serumanalyse Sekundære mål inkluderer
- For å sammenligne de beskyttende effektene av Allium sativum og Moringa oleifera på tannemaljefeil på grunn av bly
- For å bestemme de gunstige effektene av AS og MO ekstrakt i remineralisering av tannemalje.
Studieoversikt
Status
Forhold
Intervensjon / Behandling
Detaljert beskrivelse
Denne dyreeksperimentelle studien vil bli utført i animal House, University of Health Sciences, Lahore (UHS) og COMSATS University, Lahore. For denne studien vil femtifire sunne, hvite NewZeeland-hankaniner (9 til 10 uker) bli tatt for studien. Kaniner deles tilfeldig inn i 6 grupper. Prøvestørrelse vil være 9 kaniner i hver gruppe. Forsøksdyr vil bli tildelt nummer 1,2,3,4, til 54 ved hjelp av tilfeldig tallgenerator og tilfeldig delt inn i seks grupper (n=9) og vil bli tildelt som gruppe A, B, C, D, E og F. Friske, hvite hannkaniner fra New Zeeland som veier 1000-1200 gram (Alder 9-10 uker) vil bli valgt fra University of Veterinary and Animal Sciences, Lahore. Dyrene vil bli flyttet til dyrehuset til UHS. Dyrene vil bli holdt i eksperimentelt forskningslaboratorium ved kontrollert romtemperatur (22-24°C) og fuktighet (45-65 %) under 12/12 timer naturlig lys og mørke syklus i 2 uker for å akklimatisere seg i nye omgivelser. Alle forsøksdyr vil bli fôret med grønnsaker, frukt og destillert vann ad libitum. Etter 12 uker vil alle dyrene bli ofret under dyp narkose. Ketaminhydroklorid 45 mg/kg kroppsvekt og xylazin 5 mg/kg kroppsvekt I/M vil bli gitt for å opprettholde dyp anestesi. Etterpå ble 20 mg xylazin injisert i pinnavenen for å ofre kaninene mens de ble bedøvet.(35).
Blodprøvetaking: Central Auricular Artery(36) eller lateral saphenous vene vil bli valgt for å samle 4 ml blod på dag 0, etter 8 uker og ved slutten av 12 uker. Prøven vil bli samlet i serumseparerende rør for undersøkelser som blyantall i blod, alkalisk fosfatase, kalsium og fosfatnivå.
Teknikk for vevsprøvetaking:
En del på 4x5 mm2 fra midtre tredjedel av kronens labiale overflate vil bli tatt for undersøkelser. Kuttingen vil bli utført med diamantskive og høyhastighetsturbin med vanning av vann for å ovoide overoppvarming av prøven. Høyre underkjeve fortenner på alle kaninene vil bli valgt for SEM og AFM. De venstre underkjevens fortenner til alle kaninene vil bli valgt SEM-EDX og RMS-analyse. Alle prøver vil bli merket og lagret i sterilisert beholder med 12 % formalin i 72 timer.
Laboratoriebehandling:
Skanneelektronmikroskopi: Høyre underkjevefortann vil bli valgt for SEM-analyse. Strukturen og morfologiske trekk ved emaljen vil bli sett av bildene. Prøven vaskes med destillert vann og tørkes med varmluftsvifte ved lav hastighet. Seksten prøver kan festes på et prøvestikk om gangen. Prøver vil bli festet på stikk med dobbel kobbertape. Det eksponerte stikket vil også bli dekket av kobbertape og bare prøvedelen vil bli stående utildekket.
Gullbelegg vil bli gjort i sputter coater maskin for å gjøre overflaten leder for fine detaljer av bilder. Prøvestikket plasseres i sputtermaskinens kammer og lokket lukkes. Inne i kammeret vil det skapes vakuum og argongass fylles. Potensial på 40 volt vil bli gitt. Ved dette vil plasma dannes inne i kammeret og elektronene av argongass vil treffe gullplate. De små gullpartiklene vil begynne å sprute på prøvestikket. Når gullbelegget er gjort, vil prosedyren bli reversert. Kammeret vil bli fylt med luft og lokket åpnes. Nå skal prøven behandles i NOVA NANOSEM 450 for ultrastrukturelle detaljer.
- Energidispersiv spektroskopi: EDX vil bli brukt til å studere elementær sammensetning av mineralinnhold. En detektor av OXFORD X-ACT, PENTA FET vil festes med NOVA NANOSEM 450. Den samme prøven som brukes for SEM vil også bli brukt til SEM-EDX-analyse. Dette vil gi detaljer på overflaten opp til 2 mikron tykkelse.
Atomic Force Microscope: AFM (SPM-9500J3, Shimadzu Corp, Japan) vil bli brukt for vurdering av morfologiske trekk ved emaljeoverflaten. Det gir den tredimensjonale overflatetopografien uten prøveforberedelse. Denne mikroskopien er designet for å skanne prøven med en sonde. Prøve vil festes på stubben, som vil bli fikset og manuelt justert. Laserjustering vil bli gjort etter å ha bestemt probefrekvensen. Til slutt vil skanning og bildebehandling gjøres med WinSPM-systembehandling. For ett representativt utvalg vil mikrofotografier på seks forskjellige områder (2,0×2,0 μm skanneområde) bli tatt ved bruk av AFM (SPM-9500J3, Shimadzu Corp, Japan) og AFM-programvare (SPM-Offline, Shimadzu Corp, Japan).
AFM lager 3D-bilder av en overflate ved å skanne en utkrager i mikronstørrelse over overflaten, som vanligvis er laget av silisium eller silisiumnitrid, med en spiss hvis krumningsradius er ~10nm. Utkragingen avbøyes av kreftene mellom spissen og overflaten, som er ~nN og inkluderer bidrag fra elektrostatiske krefter, solvasjonskrefter, Vander Waals-interaksjoner og kjemisk binding. Denne avbøyningen av utkragingen måles av en laserflekk som reflekteres fra den øvre overflaten av utkragingen inn i en rekke fotodioder, som gir bilder på datamaskinen.
- Raman-spektroskopi: Det er en ikke-destruktiv kjemisk analyseteknikk som gir detaljert informasjon om kjemisk struktur, krystallinitet og molekylære interaksjoner. RMS vil gi oss detaljene om hele emaljetykkelsen om den molekylære sammensetningen og dens interaksjon av prøven. Ingen spesiell prøveforberedelse vil være nødvendig for denne analysen, og prøven kan også brukes til andre undersøkelser. InVia Raman Microscope av RENISHAW UK vil bli brukt til denne studien. Laserintensiteten 488nm vil bli brukt i 10 sekunder. RMS vil bli gjort på 6 forskjellige steder og gjennomsnittsavlesningen vil bli brukt i studien.
Studietype
Registrering (Forventet)
Fase
- Ikke aktuelt
Kontakter og plasseringer
Studiesteder
-
-
Sindh
-
Karachi, Sindh, Pakistan, 75340
- Baqai Medical University
-
-
Deltakelseskriterier
Kvalifikasjonskriterier
Alder som er kvalifisert for studier
Tar imot friske frivillige
Kjønn som er kvalifisert for studier
Beskrivelse
Inklusjonskriterier:
- Friske kaniner
- Kaniner Alder 9-10 uker
- Vekt 1000-1200 g vil bli valgt
Ekskluderingskriterier:
- Syk kanin
- Alder: Mer enn 10 uker og mindre enn 9 uker
- Vekt mer enn 1200 g og mindre enn 1000 g
Studieplan
Hvordan er studiet utformet?
Designdetaljer
- Primært formål: Forebygging
- Tildeling: Randomisert
- Intervensjonsmodell: Faktoriell oppgave
- Masking: Dobbelt
Våpen og intervensjoner
Deltakergruppe / Arm |
Intervensjon / Behandling |
|---|---|
|
Annen: Gruppe A
Kontroll; Placebo 1ml NaCl 0,9% daglig i 12 uker
|
1 ml NaCl 0,9 % daglig i 12 uker
|
|
Aktiv komparator: Gruppe B
Pb Gruppe; Blyacetat 19,5 mg/kg kroppsvekt daglig i 12 uker
|
Den orale LD50 av blyacetat er 390 mg/kg kroppsvekt.
Forsøksgruppen B, C og D vil motta en enkeltdose på 19,5 mg/kg kroppsvekt (1/120 av LD50),31 daglig oppløst i destillert vann og gitt ved oral sondeernæring i 12 uker.
Blyacetat Pb(CH3COO)2x3H2O, vil bli kjøpt fra Sigma-Aldrich Chemie (Tyskland).
|
|
Eksperimentell: Gruppe C
Pb + Allium sativum ekstrakt; Blyacetat 19,5 mg/kg kroppsvekt etterfulgt av Allium sativum(AS) ekstrakt 500 mg/kg kroppsvekt daglig i 12 uker
|
Den orale LD50 av blyacetat er 390 mg/kg kroppsvekt.
Forsøksgruppen B, C og D vil motta en enkeltdose på 19,5 mg/kg kroppsvekt (1/120 av LD50),31 daglig oppløst i destillert vann og gitt ved oral sondeernæring i 12 uker.
Blyacetat Pb(CH3COO)2x3H2O, vil bli kjøpt fra Sigma-Aldrich Chemie (Tyskland).
Friske Allium sativum-pærer vil bli valgt ut for studier.
Feddene vil bli skrellet, vasket med destillert vann og tørket under skur.
Deretter skal den kuttes i små biter.
1000g hakket hvitløk vil bli knust med morter og passell.
Hvitløkspastaen blandes med 5000 ml 70 % etanol (70 % etanol og 30 % destillert vann) i 72 timer ved romtemperatur.
Hvil prosedyren er den samme som nevnt i moringaekstrakt.
En dose på 500 mg per kg(34) kroppsvekt hvitløksekstrakt vil bli gitt daglig i 1 ml destillert vann.
|
|
Annen: Gruppe D
CPb + Moringa oleifera-ekstrakt; Blyacetat 19,5 mg/kg kroppsvekt etterfulgt av Moringa oleifera-ekstrakt 400 mg/kg kroppsvekt daglig i 12 uker
|
Den orale LD50 av blyacetat er 390 mg/kg kroppsvekt.
Forsøksgruppen B, C og D vil motta en enkeltdose på 19,5 mg/kg kroppsvekt (1/120 av LD50),31 daglig oppløst i destillert vann og gitt ved oral sondeernæring i 12 uker.
Blyacetat Pb(CH3COO)2x3H2O, vil bli kjøpt fra Sigma-Aldrich Chemie (Tyskland).
Metoden beskrevet av Hanaa Elgamily(32) med mindre modifikasjoner.
Friske blader vaskes og tørkes i tørrvarmeovn.
All forberedelse vil bli gjort i farmakologisk avdeling, Helsevitenskapelig universitet i sterilt miljø.
Tørkede blader vil bli knust for å lage fint pulver.
1000 g pulver av MO vil bli sokket i 5000 ml 70 % etanol (70 % etanol og 30 % destillert vann) i 72 timer ved romtemperatur.
Deretter vil blandingen bli magnetisk omrørt i 24 timer og lagret ved 4oC i 48 timer for å tillate ekstraksjon av aktive ingredienser.
Deretter vil blandingen filtreres to ganger ved å bruke Whatman No 1 filterpapir.
Ekstraktet vil bli konsentrert med roterende vakuumfordamper ved 40 oC for å fordampe løsningsmidlet.
Ekstraktet vil fryses, tørkes og lagres ved -70 oC for bruk.
Dose av MO-ekstrakt vil være 400 mg per kg.(33) kroppsvekt gitt daglig i 1 ml destillert vann ved oral sondeernæring i 12 uker.
|
|
Aktiv komparator: Gruppe E
Allium sativum ekstrakt; Allium sativum ekstrakt 500mg/kg kroppsvekt daglig i 12 uker
|
Friske Allium sativum-pærer vil bli valgt ut for studier.
Feddene vil bli skrellet, vasket med destillert vann og tørket under skur.
Deretter skal den kuttes i små biter.
1000g hakket hvitløk vil bli knust med morter og passell.
Hvitløkspastaen blandes med 5000 ml 70 % etanol (70 % etanol og 30 % destillert vann) i 72 timer ved romtemperatur.
Hvil prosedyren er den samme som nevnt i moringaekstrakt.
En dose på 500 mg per kg(34) kroppsvekt hvitløksekstrakt vil bli gitt daglig i 1 ml destillert vann.
|
|
Eksperimentell: Gruppe F
Moringa oleifera ekstrakt; Moringa oleifera-ekstrakt 400mg/kg kroppsvekt daglig i 12 uker
|
Metoden beskrevet av Hanaa Elgamily(32) med mindre modifikasjoner.
Friske blader vaskes og tørkes i tørrvarmeovn.
All forberedelse vil bli gjort i farmakologisk avdeling, Helsevitenskapelig universitet i sterilt miljø.
Tørkede blader vil bli knust for å lage fint pulver.
1000 g pulver av MO vil bli sokket i 5000 ml 70 % etanol (70 % etanol og 30 % destillert vann) i 72 timer ved romtemperatur.
Deretter vil blandingen bli magnetisk omrørt i 24 timer og lagret ved 4oC i 48 timer for å tillate ekstraksjon av aktive ingredienser.
Deretter vil blandingen filtreres to ganger ved å bruke Whatman No 1 filterpapir.
Ekstraktet vil bli konsentrert med roterende vakuumfordamper ved 40 oC for å fordampe løsningsmidlet.
Ekstraktet vil fryses, tørkes og lagres ved -70 oC for bruk.
Dose av MO-ekstrakt vil være 400 mg per kg.(33) kroppsvekt gitt daglig i 1 ml destillert vann ved oral sondeernæring i 12 uker.
|
Hva måler studien?
Primære resultatmål
Resultatmål |
Tiltaksbeskrivelse |
Tidsramme |
|---|---|---|
|
Histologiske utfall
Tidsramme: på slutten av studiet
|
I denne undersøkelsen Odontoblastisk sone, cellekjerner Vakuolisering av odontoblaster, akutt betennelse, kronisk betennelse, apatittdannelse, kollagen tverrbinding vil bli bestemt informere om normal eller unormal.
|
på slutten av studiet
|
Sekundære resultatmål
Resultatmål |
Tiltaksbeskrivelse |
Tidsramme |
|---|---|---|
|
Mineralkonsentrasjon
Tidsramme: på slutten av studiet
|
Mineralkonsentrasjon som Ca/P etc. forhold vil bli vurdert ved SEM & EDX analyse
|
på slutten av studiet
|
Samarbeidspartnere og etterforskere
Sponsor
Samarbeidspartnere
Etterforskere
- Hovedetterforsker: Rashid Javaid, Ph.D scholar, Baqai Medical University
Publikasjoner og nyttige lenker
Generelle publikasjoner
- Du Toit N, Kempson SA, Dixon PM. Donkey dental anatomy. Part 2: Histological and scanning electron microscopic examinations. Vet J. 2008 Jun;176(3):345-53. doi: 10.1016/j.tvjl.2008.03.004. Epub 2008 Apr 18.
- Six N, Lasfargues JJ, Goldberg M. Differential repair responses in the coronal and radicular areas of the exposed rat molar pulp induced by recombinant human bone morphogenetic protein 7 (osteogenic protein 1). Arch Oral Biol. 2002 Mar;47(3):177-87. doi: 10.1016/s0003-9969(01)00100-5.
- Yu C, Abbott PV. An overview of the dental pulp: its functions and responses to injury. Aust Dent J. 2007 Mar;52(1 Suppl):S4-16. doi: 10.1111/j.1834-7819.2007.tb00525.x.
Studierekorddatoer
Studer hoveddatoer
Studiestart (Faktiske)
Primær fullføring (Forventet)
Studiet fullført (Forventet)
Datoer for studieregistrering
Først innsendt
Først innsendt som oppfylte QC-kriteriene
Først lagt ut (Anslag)
Oppdateringer av studieposter
Sist oppdatering lagt ut (Anslag)
Siste oppdatering sendt inn som oppfylte QC-kriteriene
Sist bekreftet
Mer informasjon
Begreper knyttet til denne studien
Ytterligere relevante MeSH-vilkår
Andre studie-ID-numre
- Trial2022001
Plan for individuelle deltakerdata (IPD)
Planlegger du å dele individuelle deltakerdata (IPD)?
IPD-planbeskrivelse
Legemiddel- og utstyrsinformasjon, studiedokumenter
Studerer et amerikansk FDA-regulert medikamentprodukt
Studerer et amerikansk FDA-regulert enhetsprodukt
Denne informasjonen ble hentet direkte fra nettstedet clinicaltrials.gov uten noen endringer. Hvis du har noen forespørsler om å endre, fjerne eller oppdatere studiedetaljene dine, vennligst kontakt register@clinicaltrials.gov. Så snart en endring er implementert på clinicaltrials.gov, vil denne også bli oppdatert automatisk på nettstedet vårt. .