Влияние экстракта Allium Sativum и Moringa Oleifera на зубную эмаль

Это экспериментальное исследование на животных будет проводиться в Доме животных Университета медицинских наук в Лахоре (UHS) и Университете COMSATS в Лахоре. Для этого исследования будут взяты пятьдесят четыре здоровых самца белых новозеландских кроликов (от 9 до 10 недель). Кролики будут случайным образом разделены на 6 групп. Размер выборки составит 9 кроликов в каждой группе. Экспериментальным животным будут присвоены номера от 1, 2, 3, 4 до 54 с помощью генератора случайных чисел, и они будут случайным образом разделены на шесть групп (n = 9) и будут распределены как группы A, B, C, D, E и F. Здоровые самцы белых новозеландских кроликов весом 1000-1200 г (возраст 9-10 недель) будут отобраны в Университете ветеринарии и зоотехники, Лахор. Животные будут переведены в приют UHS. Животные будут содержаться в экспериментально-исследовательской лаборатории при контролируемой комнатной температуре (22-24°C) и влажности (45-65%) при 12/12-часовом цикле естественного света и темноты в течение 2 недель для акклиматизации в новой среде. Всех подопытных животных будут кормить овощами, фруктами и дистиллированной водой вволю. По истечении 12 недель всех животных забивают под глубокой анестезией. Гидрохлорид кетамина 45 мг/кг массы тела и ксилазин 5 мг/кг массы тела в/м будут вводиться для поддержания глубокой анестезии. После этого в вену ушной раковины вводили 20 мг ксилазина для умерщвления кроликов, пока они находились под наркозом (35).

Забор крови: Центральная ушная артерия (36) или латеральная подкожная вена будут выбраны для сбора 4 мл крови в день 0, через 8 недель и в конце 12 недель. Образец будет собран в пробирку для разделения сыворотки для таких исследований, как количество свинца в крови, щелочная фосфатаза, уровень кальция и фосфата.

Техника взятия образцов тканей:

Для исследования берут участок размером 4х5 мм2 со средней трети вестибулярной поверхности коронки. Резка будет производиться алмазным диском и высокоскоростной турбиной с орошением водой во избежание перегрева образца. Правые резцы нижней челюсти всех кроликов будут выбраны для СЭМ и АСМ. Левые нижнечелюстные резцы всех кроликов будут отобраны для SEM-EDX и анализа RMS. Все образцы будут маркированы и храниться в стерилизованном контейнере с 12% формалином в течение 72 часов.

Лабораторная обработка:

1. Сканирующая электронная микроскопия: для анализа СЭМ будет выбран правый резец нижней челюсти. Строение и морфологические особенности эмали будут видны по ее изображениям. Образец будет промыт дистиллированной водой и высушен горячим воздухом на низкой скорости. Шестнадцать образцов могут быть зафиксированы на пробоотборном штыре одновременно. Образцы будут закреплены на стержне двойной медной лентой. Открытый стержень также будет покрыт медной лентой, и только часть образца останется непокрытой.

   Золотое покрытие будет выполнено в машине для нанесения покрытий методом напыления, чтобы сделать поверхность проводником для мелких деталей изображений. Образец будет помещен в камеру распылительной машины, а крышка будет закрыта. Внутри камеры будет создаваться вакуум и заполняться аргоном. Потенциал 40 вольт будет дан. При этом внутри камеры будет образовываться плазма, и электроны газообразного аргона ударятся о золотую пластину. Крошечные частицы золота начнут распыляться на образце. Как только золотое покрытие будет сделано, процедура будет обратной. Камера наполнится воздухом и крышка откроется. Теперь образец будет обработан в NOVA NANOSEM 450 для получения ультраструктурных деталей.

2. Энергодисперсионная спектроскопия: EDX будет использоваться для изучения элементного состава минерального содержимого. Детектор OXFORD X-ACT, PENTA FET будет присоединен к NOVA NANOSEM 450. Тот же образец, который использовался для SEM, также будет использоваться для анализа SEM-EDX. Это даст детали на поверхности толщиной до 2 мкм.

3. Атомно-силовой микроскоп: АСМ (SPM-9500J3, Shimadzu Corp, Япония) будет использоваться для оценки морфологических особенностей поверхности эмали. Он обеспечивает трехмерную топографию поверхности без какой-либо подготовки образца. Эта микроскопия предназначена для сканирования образца зондом. Образец будет прикреплен на заглушке, которая будет закреплена и откорректирована вручную. Юстировка лазера будет выполнена после определения частоты зонда. Наконец, сканирование и обработка изображений будут выполняться с помощью системной обработки WinSPM. Для одного репрезентативного образца будут сделаны микрофотографии в шести различных областях (область сканирования 2,0 × 2,0 мкм) с использованием АСМ (SPM-9500J3, Shimadzu Corp, Япония) и программного обеспечения АСМ (SPM-Offline, Shimadzu Corp, Япония).

   АСМ создает 3D-изображения поверхности, сканируя кантилевер микронного размера по поверхности, который обычно изготавливается из кремния или нитрида кремния, с наконечником, радиус кривизны которого составляет ~ 10 нм. Кантилевер отклоняется силами между наконечником и поверхностью, которые составляют ~ nN и включают в себя вклад электростатических сил, сил сольватации, вандер-ваальсовых взаимодействий и химической связи. Это отклонение кантилевера измеряется лазерным пятном, отражающимся от верхней поверхности кантилевера в матрицу фотодиодов, которые обеспечивают изображение на компьютере.

4. Спектроскопия комбинационного рассеяния: это метод неразрушающего химического анализа, который предоставляет подробную информацию о химической структуре, кристалличности и молекулярных взаимодействиях. RMS даст нам подробную информацию обо всей толщине эмали о молекулярном составе и его взаимодействии с образцом. Для этого анализа не требуется специальной подготовки пробы, и пробу можно использовать и для других исследований. Для этого исследования будет использоваться рамановский микроскоп InVia производства RENISHAW UK. Интенсивность лазера 488 нм будет использоваться в течение 10 секунд. Среднеквадратичное значение будет измеряться в 6 разных точках, и в исследовании будет использоваться среднее значение.