アリウム サティバムとモリンガ オレイフェラ エキスの歯のエナメル質への影響

この動物実験研究は、ラホールの健康科学大学 (UHS) の動物小屋と、ラホールの COMSATS 大学で実施されます。 この研究では、54 匹の健康なオスの白いニュージーランド産ウサギ (9 ～ 10 週間) が研究に使用されます。 ウサギは無作為に6つのグループに分けられます。 サンプルサイズは各グループ9匹です。 実験動物には、乱数発生器を使用して 1、2、3、4 から 54 までの番号が割り当てられ、ランダムに 6 つのグループ (n=9) に分けられ、グループ A、B、C、D、E、およびF. 体重 1000 ～ 1200 グラム (9 ～ 10 週齢) の健康なオスの白いニュージーランド ウサギを、ラホールの獣医動物科学大学から選択します。 動物はUHSのアニマルハウスに移されます。 動物は、制御された室温（22〜24°C）および湿度（45〜65％）の実験研究所で、12/12時間の自然明暗サイクルの下で2週間、新しい環境に順応するために保管されます。 すべての実験動物には、野菜、果物、蒸留水を自由に与えます。 12 週間の終わりに、すべての動物を深い麻酔下で屠殺します。 塩酸ケタミン 45 mg/kg 体重およびキシラジン 5 mg/kg 体重 I/M を投与して、深い麻酔を維持します。 その後、キシラジン 20 mg を耳介静脈に注射して、ウサギを麻酔しながら屠殺した(35)。

採血: 中央耳介動脈 (36) または外側伏在静脈を選択して、0 日目、8 週間後、および 12 週間の終わりに 4 ml の血液を採取します。 サンプルは、血中鉛数、アルカリホスファターゼ、カルシウムおよびリン酸レベルなどの調査のために、血清分離チューブに収集されます。

組織サンプリング技術:

クラウン唇面の中央​​ 3 分の 1 から 4x5 mm2 の部分を調査のために採取します。 切断は、サンプルの過熱を避けるために水を灌漑しながらダイヤモンドディスクと高速タービンによって行われます。 すべてのウサギの右下顎切歯が SEM および AFM 用に選択されます。 すべてのウサギの左下顎切歯は、SEM-EDX および RMS 分析によって選択されます。 すべてのサンプルにラベルを付け、12% ホルマリンを含む滅菌容器に 72 時間保管します。

実験室処理:

1. 走査型電子顕微鏡検査: 右下顎切歯が SEM 分析用に選択されます。 エナメル質の構造と形態学的特徴は、その画像で見ることができます。 サンプルを蒸留水で洗浄し、低速の熱風で乾燥させます。 1 回のサンプル刺しで 16 個のサンプルを固定できます。 サンプルは二重の銅テープで突き刺して固定されます。 露出した刺し傷も銅テープで覆い、サンプル部分だけを覆いません。

   金コーティングはスパッターコーター機で行い、画像の細部の表面導体を作ります。 サンプル刺しは、スパッタ マシン チャンバーに配置され、蓋が閉じられます。 チャンバー内を真空にし、アルゴンガスを充填します。 40 ボルトの電位が与えられます。 これによりチャンバー内にプラズマが形成され、アルゴンガスの電子が金プレートに衝突します。 サンプルを刺すと、小さな金の粒子が飛び散り始めます。 金メッキが終わったら逆の手順になります。 チャンバーは空気で満たされ、蓋が開かれます。 サンプルは、超微細構造の詳細のために NOVA NANOSEM 450 で処理されます。

2. エネルギー分散分光法: EDX は、ミネラル成分の元素組成を研究するために使用されます。 NOVA NANOSEM 450にOXFORD X-ACT、PENTA FETの検出器を取り付けます。 SEM に使用される同じサンプルは、SEM-EDX 分析にも使用されます。 これにより、厚さ 2 ミクロンまでの表面の詳細が得られます。

3. 原子間力顕微鏡: AFM (SPM-9500J3、島津製作所、日本) は、エナメル質表面の形態学的特徴の評価に使用されます。 サンプル前処理なしで 3 次元表面トポグラフィーを提供します。 この顕微鏡は、プローブでサンプルをスキャンするように設計されています。 サンプルはスタブに取り付けられ、固定され、手動で調整されます。 レーザー調整は、プローブ周波数を決定した後に行われます。 最後にWinSPMのシステム処理でスキャンと画像処理を行います。 1つの代表的なサンプルについて、AFM（SPM-9500J3、島津製作所、日本）およびAFMソフトウェア（SPM-Offline、島津製作所、日本）を使用して、6つの異なる領域（2.0×2.0μmスキャン領域）で顕微鏡写真を撮影します。

   AFM は、曲率半径が約 10 nm の先端で、通常はシリコンまたは窒化シリコンでできているミクロン サイズのカンチレバーを表面全体でスキャンすることにより、表面の 3D 画像を作成します。 カンチレバーは、チップと表面の間の力によってたわみます。この力は ~nN であり、静電力、溶媒和力、ヴァンダー ワールス相互作用、および化学結合からの寄与が含まれます。 カンチレバーのこのたわみは、カンチレバーの上面からフォトダイオードのアレイに反射するレーザー スポットによって測定され、コンピューター上に画像を提供します。

4. ラマン分光法: 化学構造、結晶化度、分子相互作用に関する詳細な情報を提供する非破壊化学分析技術です。 RMS は、分子組成とサンプルの相互作用に関するエナメル質の全体の厚さの詳細を提供します。 この分析には特別なサンプル調製は必要なく、サンプルは他の調査にも使用できます。 この研究には、RENISHAW UK の InVia Raman Microscope が使用されます。 レーザー強度 488nm を 10 秒間使用します。 RMS は 6 つの異なるスポットで行われ、平均値が研究に使用されます。