Effekter af Allium Sativum og Moringa Oleifera-ekstrakt på tandemalje

Denne dyreforsøg vil blive udført i animal House, University of Health Sciences, Lahore (UHS) og COMSATS University, Lahore. Til denne undersøgelse vil 54 sunde, hvide NewZeeland-hankaniner (9 til 10 uger) blive taget til undersøgelsen. Kaniner vil blive opdelt tilfældigt i 6 grupper. Prøvestørrelsen vil være 9 kaniner i hver gruppe. Forsøgsdyr vil blive tildelt nummer 1,2,3,4, indtil 54 ved hjælp af tilfældige talgeneratoren og tilfældigt opdelt i seks grupper (n=9) og vil blive tildelt som gruppe A, B, C, D, E og F. Sunde, hvide New Zeeland-hankaniner, der vejer 1000-1200 gram (Alder 9-10 uger), vil blive udvalgt fra University of Veterinary and Animal Sciences, Lahore. Dyrene vil blive flyttet til UHS' dyrehus. Dyr vil blive holdt i eksperimentelt forskningslaboratorium ved kontrolleret stuetemperatur (22-24°C) og fugtighed (45-65 %) under 12/12 timers naturlig lys- og mørkecyklus i 2 uger for at akklimatisere sig i nye omgivelser. Alle forsøgsdyr vil blive fodret med grøntsager, frugter og destilleret vand ad libitum. I slutningen af ​​12 uger vil alle dyrene blive aflivet under dyb anæstesi. Ketaminhydrochlorid 45 mg/kg lgv og xylazin 5 mg/kg lgv I/M vil blive givet for at opretholde dyb anæstesi. Bagefter blev 20 mg xylazin injiceret i pinna-venen for at aflive kaninerne, mens de var bedøvet.(35).

Blodprøvetagning: Den centrale aurikulære arterie(36) eller den laterale saphenøse vene vil blive udvalgt til at opsamle 4 ml blod på dag 0, efter 8 uger og ved slutningen af ​​12 uger. Prøven vil blive opsamlet i serumsepareringsrør til undersøgelser som blyantal i blod, alkalisk fosfatase, calcium og fosfatniveau.

Vævsprøvetagningsteknik:

En del på 4x5 mm2 fra den midterste tredjedel af kronens læbeoverflade vil blive taget til undersøgelser. Skæringen vil blive udført med diamantskive og højhastighedsturbine med vanding af vand for at ægge over opvarmning af prøven. Højre mandibular fortænder på alle kaninerne vil blive udvalgt til SEM og AFM. De venstre mandibular fortænder på alle kaninerne vil blive udvalgt SEM-EDX og RMS-analyse. Alle prøver vil blive mærket og opbevaret i steriliseret beholder med 12% formalin i 72 timer.

Laboratoriebehandling:

1. Scanningselektronmikroskopi: Højre mandibular incisiv vil blive udvalgt til SEM-analyse. Emaljens struktur og morfologiske træk vil ses af dens billeder. Prøven vaskes med destilleret vand og tørres med varmluftblæser ved lav hastighed. Seksten prøver kan fikseres på et prøvestik ad gangen. Prøver vil blive fastgjort på stik med dobbelt kobbertape. Det blottede stik vil også være dækket af kobbertape, og kun prøvedelen efterlades utildækket.

   Guldbelægning vil blive udført i sputter coater maskine for at gøre overfladen leder for fine detaljer af billeder. Prøvestikket placeres i sputtermaskinens kammer, og låget lukkes. Inde i kammeret vil der blive skabt vakuum, og argongas vil blive fyldt. Der gives et potentiale på 40 volt. Ved dette vil plasma dannes inde i kammeret, og elektronerne af argongas vil ramme guldpladen. De små guldpartikler vil begynde at sprøjte på prøvestik. Når guldbelægningen er udført, vil proceduren blive omvendt. Kammeret vil blive fyldt med luft, og låget åbnes. Nu vil prøven blive behandlet i NOVA NANOSEM 450 for ultrastrukturelle detaljer.

2. Energidispersiv spektroskopi: EDX vil blive brugt til at studere grundstofsammensætning af mineralindhold. En detektor af OXFORD X-ACT, PENTA FET vil blive fastgjort med NOVA NANOSEM 450. Den samme prøve, der bruges til SEM, vil også blive brugt til SEM-EDX-analyse. Dette vil give detaljer på overfladen op til 2 mikron tykkelse.

3. Atomic Force Microscope: AFM (SPM-9500J3, Shimadzu Corp, Japan) vil blive brugt til vurdering af morfologiske træk ved emaljeoverfladen. Det giver den tredimensionelle overfladetopografi uden prøveforberedelse. Denne mikroskopi er designet til at scanne prøven med en sonde. Prøve vil blive fastgjort på stub, som vil blive fikset og manuelt justeret. Laserjustering vil blive udført efter bestemmelse af probefrekvens. Endelig vil scanning og billedbehandling ske med WinSPM systembehandling. For en repræsentativ prøve tages mikrofotografier på seks forskellige områder (2,0 × 2,0 μm scanningsområde) ved hjælp af AFM (SPM-9500J3, Shimadzu Corp, Japan) og AFM-software (SPM-Offline, Shimadzu Corp, Japan).

   AFM skaber 3D-billeder af en overflade ved at scanne en mikron-størrelse cantilever hen over overfladen, som typisk er lavet af silicium eller siliciumnitrid, med en spids, hvis krumningsradius er ~10nm. Cantileveren afbøjes af kræfterne mellem spidsen og overfladen, som er ~nN og inkluderer bidrag fra elektrostatiske kræfter, solvatiseringskræfter, Vander Waals-interaktioner og kemisk binding. Denne afbøjning af cantilever måles af en laserplet, der reflekterer fra toppen af ​​cantileveren ind i en række fotodioder, som giver billeder på computeren.

4. Raman-spektroskopi: Det er en ikke-destruktiv kemisk analyseteknik, som giver detaljerede oplysninger om kemisk struktur, krystallinitet og molekylære interaktioner. RMS vil give os detaljerne om hele emaljetykkelsen om den molekylære sammensætning og dens interaktion af prøven. Der kræves ingen speciel prøveforberedelse til denne analyse, og prøven kan også bruges til andre undersøgelser. InVia Raman Microscope af RENISHAW UK vil blive brugt til denne undersøgelse. Laserintensiteten 488nm vil blive brugt i 10 sekunder. RMS vil blive udført på 6 forskellige steder, og den gennemsnitlige aflæsning vil blive brugt i undersøgelsen.