Effekter av Allium Sativum och Moringa Oleifera-extrakt på tandemaljen

Denna djurexperimentella studie kommer att utföras i djurhuset, University of Health Sciences, Lahore (UHS) och COMSATS University, Lahore. För denna studie kommer femtiofyra friska vita NewZeeland-hankaniner (9 till 10 veckor) att tas för studien. Kaniner kommer att delas in slumpmässigt i 6 grupper. Provstorleken kommer att vara 9 kaniner i varje grupp. Försöksdjur kommer att tilldelas nummer 1,2,3,4, till 54 med hjälp av slumptalsgeneratorn och de slumpmässigt indelade i sex grupper (n=9) och kommer att tilldelas som grupp A, B, C, D, E och F. Friska, vita Nya Zeeland-hankaniner som väger 1000-1200 gram (ålder 9-10 veckor) kommer att väljas från University of Veterinary and Animal Sciences, Lahore. Djuren kommer att flyttas till UHS djurhus. Djuren kommer att hållas i experimentellt forskningslaboratorium vid kontrollerad rumstemperatur (22-24°C) och luftfuktighet (45-65 %) under 12/12 timmars naturligt ljus och mörkercykel i 2 veckor för att acklimatisera sig i en ny miljö. Alla försöksdjur kommer att utfodras med grönsaker, frukt och destillerat vatten ad libitum. I slutet av 12 veckor kommer alla djuren att offras under djup narkos. Ketaminhydroklorid 45 mg/kg kroppsvikt och xylazin 5 mg/kg kroppsvikt I/M kommer att ges för att upprätthålla djup anestesi. Efteråt injicerades 20 mg xylazin i pinnavenen för att offra kaninerna medan de sövdes.(35).

Blodprovtagning: Centrala öronartären(36) eller laterala saphenösa venen kommer att väljas för att samla in 4 ml blod på dag 0, efter 8 veckor och i slutet av 12 veckor. Provet kommer att samlas in i serumseparerande rör för undersökningar som blyantal i blod, alkaliskt fosfatas, kalcium- och fosfatnivå.

Vävnadsprovtagningsteknik:

En del av 4x5 mm2 från den mellersta tredjedelen av kronans blygdläppsyta kommer att tas för undersökningar. Skärningen kommer att göras med diamantskiva och höghastighetsturbin med bevattning av vatten för att ovoid överhettning av provet. Höger underkäksframtänder på alla kaniner kommer att väljas för SEM och AFM. De vänstra underkäksframtänderna på alla kaniner kommer att väljas SEM-EDX och RMS-analys. Alla prover kommer att märkas och förvaras i steriliserad behållare med 12 % formalin i 72 timmar.

Laboratoriebearbetning:

1. Skannaelektronmikroskopi: Höger underkäks incisiv kommer att väljas för SEM-analys. Emaljens struktur och morfologiska egenskaper kommer att ses av dess bilder. Provet kommer att tvättas med destillerat vatten och torkas med varmluftsfläkt vid låg hastighet. Sexton prover kan fixeras på ett stickprov åt gången. Prover kommer att fästas på stick med dubbel koppartejp. Det exponerade sticket kommer också att täckas av koppartejp och endast provdelen kommer att lämnas utan täckning.

   Guldbeläggning kommer att göras i sputter coater maskin för att göra ytledaren för fina detaljer i bilder. Provstickan placeras i sputtermaskinens kammare och locket stängs. Inuti kammaren kommer vakuum att skapas och argongas kommer att fyllas. Potential på 40 volt kommer att ges. Genom detta kommer plasma att bildas inuti kammaren och elektronerna av argongas kommer att träffa guldplåten. De små guldpartiklarna börjar sputtera på provstickningen. När guldbeläggningen har gjorts kommer proceduren att omvändas. Kammaren kommer att fyllas med luft och locket öppnas. Nu kommer provet att bearbetas i NOVA NANOSEM 450 för ultrastrukturella detaljer.

2. Energidispersiv spektroskopi: EDX kommer att användas för att studera elementär sammansättning av mineralinnehåll. En detektor av OXFORD X-ACT, PENTA FET kommer att fästas med NOVA NANOSEM 450. Samma prov som används för SEM kommer också att användas för SEM-EDX-analys. Detta ger detaljer på ytan upp till 2 mikron tjocklek.

3. Atomic Force Microscope: AFM (SPM-9500J3, Shimadzu Corp, Japan) kommer att användas för bedömning av morfologiska egenskaper hos emaljytan. Det ger den tredimensionella yttopografin utan någon provberedning. Denna mikroskopi är utformad för att skanna provet med en sond. Prov kommer att fästas på stubben, som kommer att fixas och justeras manuellt. Laserjustering kommer att göras efter att ha bestämt sondfrekvensen. Slutligen kommer skanning och bildbehandling att göras med WinSPM-systembehandling. För ett representativt prov kommer mikrobilder på sex olika områden (2,0 × 2,0 μm skanningsområde) att tas med AFM (SPM-9500J3, Shimadzu Corp, Japan) och AFM-programvara (SPM-Offline, Shimadzu Corp, Japan).

   AFM skapar 3D-bilder av en yta genom att skanna en konsol i mikronstorlek över ytan, som vanligtvis är gjord av kisel eller kiselnitrid, med en spets vars krökningsradie är ~10nm. Fribäraren avböjs av krafterna mellan spetsen och ytan, som är ~nN och inkluderar bidrag från elektrostatiska krafter, solvatiseringskrafter, Vander Waals-interaktioner och kemisk bindning. Denna avböjning av konsolen mäts av en laserfläck som reflekteras från konsolens övre yta in i en uppsättning fotodioder, som ger bilder på datorn.

4. Ramanspektroskopi: Det är en oförstörande kemisk analysteknik som ger detaljerad information om kemisk struktur, kristallinitet och molekylära interaktioner. RMS kommer att ge oss detaljer om hela emaljens tjocklek om den molekylära sammansättningen och dess interaktion mellan provet. Ingen speciell provberedning kommer att behövas för denna analys och provet kan även användas för andra undersökningar. InVia Raman Microscope av RENISHAW UK kommer att användas för denna studie. Laserintensiteten 488nm kommer att användas i 10 sekunder. RMS kommer att göras på 6 olika ställen och den genomsnittliga läsningen kommer att användas i studien.