Effecten van Allium Sativum en Moringa Oleifera-extract op tandglazuur
Beschermende effecten van Allium Sativum en Moringa Oleifera-extract bij het verlichten van door lood veroorzaakte defecten aan het tandglazuur van konijnen
Het primaire doel is om de effecten van lood op het tandglazuur van konijnen te observeren door te meten;
- Structurele en morfologische verandering door SEM, AFM
- Elementaire compositie door SEM-EDX
- Moleculaire samenstelling en hydroxyapatietkristalveranderingen door Raman-spectroscopie
- Bloedparameters door serumanalyse Secundaire doelstellingen omvatten
- Vergelijking van de beschermende effecten van Allium sativum en Moringa oleifera op tandglazuurdefecten als gevolg van lood
- Vaststellen van de gunstige effecten van AS- en MO-extract bij remineralisatie van tandglazuur.
Studie Overzicht
Toestand
Conditie
Gedetailleerde beschrijving
Deze dierexperimentele studie zal worden uitgevoerd in Animal House, University of Health Sciences, Lahore (UHS) en COMSATS University, Lahore. Voor dit onderzoek worden vierenvijftig gezonde mannelijke, witte NieuwZeelandse konijnen (9 tot 10 weken) meegenomen voor het onderzoek. Konijnen worden willekeurig verdeeld in 6 groepen. De steekproefomvang is 9 konijnen in elke groep. Proefdieren krijgen nummer 1,2,3,4 tot 54 toegewezen met behulp van de random number generator en worden willekeurig verdeeld in zes groepen (n=9) en worden ingedeeld in groep A, B, C, D, E en F. Gezonde mannelijke, witte Nieuw-Zeelandse konijnen met een gewicht van 1000-1200 gram (leeftijd 9-10 weken) zullen worden geselecteerd van de University of Veterinary and Animal Sciences, Lahore. De dieren worden verplaatst naar dierenverblijf van UHS. De dieren zullen gedurende 2 weken in een experimenteel onderzoekslaboratorium worden gehouden bij gecontroleerde kamertemperatuur (22-24°C) en vochtigheid (45-65%) onder een natuurlijke licht- en donkercyclus van 12/12 uur om te acclimatiseren in een nieuwe omgeving. Alle proefdieren zullen ad libitum worden gevoerd met groenten, fruit en gedestilleerd water. Na 12 weken worden alle dieren onder diepe verdoving opgeofferd. Ketaminehydrochloride 45 mg/kg lichaamsgewicht en xylazine 5 mg/kg lichaamsgewicht I/M zullen worden gegeven om diepe anesthesie te behouden. Daarna werd 20 mg xylazine geïnjecteerd in de oorschelpader om de konijnen te offeren terwijl ze verdoofd waren.(35).
Bloedafname: De centrale auriculaire slagader (36) of laterale vena saphena wordt geselecteerd om 4 ml bloed te verzamelen op dag 0, na 8 weken en aan het einde van 12 weken. Het monster wordt verzameld in een serumscheidingsbuis voor onderzoeken zoals bloedloodtelling, alkalische fosfatase, calcium- en fosfaatgehalte.
Weefselbemonsteringstechniek:
Er wordt een gedeelte van 4x5 mm2 van het middelste derde deel van het labiale oppervlak van de kroon genomen voor onderzoek. Het snijden wordt gedaan door een diamantschijf en een hogesnelheidsturbine met irrigatie van water om oververhitting van het monster te voorkomen. Rechter onderkaak snijtanden van alle konijnen zullen worden geselecteerd voor SEM en AFM. De linker onderkaak snijtanden van alle konijnen zullen worden geselecteerd SEM-EDX en RMS-analyse. Alle monsters worden geëtiketteerd en gedurende 72 uur bewaard in een gesteriliseerde container met 12% formaline.
Laboratoriumverwerking:
Scan-elektronenmicroscopie: rechter onderkaaksnijtand wordt geselecteerd voor SEM-analyse. De structuur en morfologische kenmerken van glazuur zullen worden gezien door de afbeeldingen. Het monster wordt gewassen met gedestilleerd water en gedroogd door een heteluchtblazer op lage snelheid. Zestien monsters kunnen per keer op een monstersteek worden gefixeerd. Monsters worden vastgezet met dubbele kopertape. De blootgestelde steek wordt ook bedekt met kopertape en alleen het monstergedeelte blijft onbedekt.
Goudcoating zal worden gedaan in een sputtercoatermachine om de oppervlaktegeleider te maken voor fijne details van afbeeldingen. De monstersteek wordt in de kamer van de sputtermachine geplaatst en het deksel wordt gesloten. In de kamer wordt een vacuüm gecreëerd en wordt argongas gevuld. Er wordt een potentiaal van 40 volt gegeven. Hierdoor wordt plasma in de kamer gevormd en zullen de elektronen van argongas op de gouden plaat slaan. De kleine gouddeeltjes beginnen te sputteren op de steekmonster. Zodra de goudcoating is voltooid, wordt de procedure omgekeerd. De kamer wordt gevuld met lucht en het deksel wordt geopend. Nu wordt het monster verwerkt in NOVA NANOSEM 450 voor ultrastructurele details.
- Energiedispersieve spectroscopie: EDX zal worden gebruikt om de elementaire samenstelling van minerale inhoud te bestuderen. Een detector van OXFORD X-ACT, PENTA FET wordt bevestigd met NOVA NANOSEM 450. Hetzelfde monster dat voor SEM wordt gebruikt, wordt ook gebruikt voor SEM-EDX-analyse. Dit geeft details op het oppervlak tot een dikte van 2 micron.
Atomic Force Microscope: AFM (SPM-9500J3, Shimadzu Corp, Japan) zal worden gebruikt voor de beoordeling van morfologische kenmerken van het glazuuroppervlak. Het biedt de driedimensionale oppervlaktetopografie zonder enige monstervoorbereiding. Deze microscopie is ontworpen om het monster met een sonde te scannen. Het monster wordt op een stomp bevestigd, die wordt vastgezet en handmatig wordt aangepast. Laserafstelling vindt plaats na het bepalen van de sondefrequentie. Ten slotte worden het scannen en de beeldverwerking uitgevoerd met WinSPM-systeemverwerking. Voor één representatief monster worden microfoto's gemaakt op zes verschillende gebieden (2,0 x 2,0 μm scangebied) met behulp van AFM (SPM-9500J3, Shimadzu Corp, Japan) en AFM-software (SPM-Offline, Shimadzu Corp, Japan).
AFM maakt 3D-beelden van een oppervlak door een cantilever van micronformaat over het oppervlak te scannen, dat meestal is gemaakt van silicium of siliciumnitride, met een punt waarvan de kromtestraal ~ 10 nm is. De cantilever wordt afgebogen door de krachten tussen de punt en het oppervlak, die ~ nN zijn en bijdragen van elektrostatische krachten, oplossende krachten, Vander Waals-interacties en chemische binding omvatten. Deze afbuiging van de cantilever wordt gemeten door een laservlek die vanaf het bovenoppervlak van de cantilever reflecteert in een reeks fotodiodes, die beelden op de computer levert.
- Raman-spectroscopie: het is een niet-destructieve chemische analysetechniek die gedetailleerde informatie geeft over de chemische structuur, kristalliniteit en moleculaire interacties. De RMS geeft ons de details van de gehele dikte van het glazuur over de moleculaire samenstelling en de interactie van het monster. Voor deze analyse is geen speciale monstervoorbereiding nodig en het monster kan ook voor andere onderzoeken worden gebruikt. InVia Raman Microscope van RENISHAW UK zal voor dit onderzoek worden gebruikt. De laserintensiteit 488nm wordt gedurende 10 seconden gebruikt. De RMS wordt op 6 verschillende plekken gedaan en de gemiddelde meetwaarde wordt gebruikt in de studie.
Studietype
Inschrijving (Verwacht)
Fase
- Niet toepasbaar
Contacten en locaties
Studie Locaties
-
-
Sindh
-
Karachi, Sindh, Pakistan, 75340
- Baqai Medical University
-
-
Deelname Criteria
Geschiktheidscriteria
Leeftijden die in aanmerking komen voor studie
Accepteert gezonde vrijwilligers
Geslachten die in aanmerking komen voor studie
Beschrijving
Inclusiecriteria:
- Gezonde konijnen
- Konijnen Leeftijd 9-10 weken
- Er wordt een gewicht van 1000-1200 g geselecteerd
Uitsluitingscriteria:
- Ziek konijn
- Leeftijd: Meer dan 10 weken en minder dan 9 weken
- Gewicht meer dan 1200 g en minder dan 1000 g
Studie plan
Hoe is de studie opgezet?
Ontwerpdetails
- Primair doel: Preventie
- Toewijzing: Gerandomiseerd
- Interventioneel model: Faculteitstoewijzing
- Masker: Dubbele
Wapens en interventies
Deelnemersgroep / Arm |
Interventie / Behandeling |
|---|---|
|
Ander: Groep A
Controle; Placebo 1 ml NaCl 0,9% per dag gedurende 12 weken
|
1 ml NaCl 0,9% per dag gedurende 12 weken
|
|
Actieve vergelijker: Groep B
Pb-groep; Loodacetaat 19,5 mg/kg lichaamsgewicht dagelijks gedurende 12 weken
|
De orale LD50 van loodacetaat is 390 mg/kg lichaamsgewicht.
De experimentele groep B, C en D krijgen gedurende 12 weken een enkele dosis van 19,5 mg/kg lichaamsgewicht (1/120ste van LD50),31 dagelijks opgelost in gedestilleerd water en toegediend via een orale sondevoeding.
Loodacetaat Pb(CH3COO)2x3H2O, wordt gekocht bij Sigma-Aldrich Chemie (Duitsland).
|
|
Experimenteel: Groep C
Pb + Allium sativum-extract; Loodacetaat 19,5 mg/kg lichaamsgewicht gevolgd door Allium sativum(AS)-extract 500 mg/kg lichaamsgewicht dagelijks gedurende 12 weken
|
De orale LD50 van loodacetaat is 390 mg/kg lichaamsgewicht.
De experimentele groep B, C en D krijgen gedurende 12 weken een enkele dosis van 19,5 mg/kg lichaamsgewicht (1/120ste van LD50),31 dagelijks opgelost in gedestilleerd water en toegediend via een orale sondevoeding.
Loodacetaat Pb(CH3COO)2x3H2O, wordt gekocht bij Sigma-Aldrich Chemie (Duitsland).
Voor onderzoek worden verse Allium sativum-bollen geselecteerd.
De teentjes worden gepeld, gewassen met gedestilleerd water en onder schuur gedroogd.
Daarna wordt het in kleine stukjes gesneden.
1000 g gehakte knoflook wordt geplet met vijzel en passel.
De knoflookpasta wordt gemengd met 5000 ml 70% ethanol (70% ethanol en 30% gedestilleerd water) gedurende 72 uur bij kamertemperatuur.
Rust de procedure is hetzelfde als vermeld in moringa-extract.
Dosering van 500 mg knoflookextract per kg(34) lichaamsgewicht wordt dagelijks gegeven in 1 ml gedestilleerd water.
|
|
Ander: Groep D
CPb + Moringa oleifera-extract; Loodacetaat 19,5 mg/kg lichaamsgewicht gevolgd door Moringa oleifera-extract 400 mg/kg lichaamsgewicht dagelijks gedurende 12 weken
|
De orale LD50 van loodacetaat is 390 mg/kg lichaamsgewicht.
De experimentele groep B, C en D krijgen gedurende 12 weken een enkele dosis van 19,5 mg/kg lichaamsgewicht (1/120ste van LD50),31 dagelijks opgelost in gedestilleerd water en toegediend via een orale sondevoeding.
Loodacetaat Pb(CH3COO)2x3H2O, wordt gekocht bij Sigma-Aldrich Chemie (Duitsland).
De methode beschreven door Hanaa Elgamily(32) met kleine aanpassingen.
Verse bladeren worden gewassen en gedroogd in een oven met droge hitte.
Alle voorbereidingen vinden plaats op de farmacologische afdeling van de Universiteit voor Gezondheidswetenschappen in een steriele omgeving.
Gedroogde bladeren worden geplet om fijn poeder te maken.
1000 g MO-poeder wordt gedurende 72 uur bij kamertemperatuur in 5000 ml 70% ethanol (70% ethanol en 30% gedestilleerd water) geweekt.
Vervolgens wordt het mengsel 24 uur magnetisch geroerd en 48 uur bij 4oC bewaard om extractie van actieve ingrediënten mogelijk te maken.
Vervolgens wordt het mengsel twee keer gefilterd met behulp van Whatman No 1 filtreerpapier.
Het extract wordt geconcentreerd met behulp van een roterende vacuümverdamper bij 40 oC om het oplosmiddel te verdampen.
Het extract wordt ingevroren, gedroogd en bewaard bij -70 oC voor gebruik.
De dosis MO-extract is 400 mg per kg lichaamsgewicht (33) dagelijks toegediend in 1 ml gedestilleerd water via een orale sondevoeding gedurende 12 weken.
|
|
Actieve vergelijker: Groep E
Allium sativum-extract; Allium sativum-extract 500 mg/kg lichaamsgewicht dagelijks gedurende 12 weken
|
Voor onderzoek worden verse Allium sativum-bollen geselecteerd.
De teentjes worden gepeld, gewassen met gedestilleerd water en onder schuur gedroogd.
Daarna wordt het in kleine stukjes gesneden.
1000 g gehakte knoflook wordt geplet met vijzel en passel.
De knoflookpasta wordt gemengd met 5000 ml 70% ethanol (70% ethanol en 30% gedestilleerd water) gedurende 72 uur bij kamertemperatuur.
Rust de procedure is hetzelfde als vermeld in moringa-extract.
Dosering van 500 mg knoflookextract per kg(34) lichaamsgewicht wordt dagelijks gegeven in 1 ml gedestilleerd water.
|
|
Experimenteel: Groep F
Moringa oleifera-extract; Moringa oleifera extract 400mg/kg b.w dagelijks gedurende 12 weken
|
De methode beschreven door Hanaa Elgamily(32) met kleine aanpassingen.
Verse bladeren worden gewassen en gedroogd in een oven met droge hitte.
Alle voorbereidingen vinden plaats op de farmacologische afdeling van de Universiteit voor Gezondheidswetenschappen in een steriele omgeving.
Gedroogde bladeren worden geplet om fijn poeder te maken.
1000 g MO-poeder wordt gedurende 72 uur bij kamertemperatuur in 5000 ml 70% ethanol (70% ethanol en 30% gedestilleerd water) geweekt.
Vervolgens wordt het mengsel 24 uur magnetisch geroerd en 48 uur bij 4oC bewaard om extractie van actieve ingrediënten mogelijk te maken.
Vervolgens wordt het mengsel twee keer gefilterd met behulp van Whatman No 1 filtreerpapier.
Het extract wordt geconcentreerd met behulp van een roterende vacuümverdamper bij 40 oC om het oplosmiddel te verdampen.
Het extract wordt ingevroren, gedroogd en bewaard bij -70 oC voor gebruik.
De dosis MO-extract is 400 mg per kg lichaamsgewicht (33) dagelijks toegediend in 1 ml gedestilleerd water via een orale sondevoeding gedurende 12 weken.
|
Wat meet het onderzoek?
Primaire uitkomstmaten
Uitkomstmaat |
Maatregel Beschrijving |
Tijdsspanne |
|---|---|---|
|
Histologische resultaten
Tijdsspanne: aan het eind van de studie
|
In dit onderzoek worden odontoblastische zone, celkernvacuolisatie van odontoblasten, acute ontsteking, chronische ontsteking, apatietvorming, collageenverknoping bepaald op basis van normaal of abnormaal.
|
aan het eind van de studie
|
Secundaire uitkomstmaten
Uitkomstmaat |
Maatregel Beschrijving |
Tijdsspanne |
|---|---|---|
|
Minerale concentratie
Tijdsspanne: aan het eind van de studie
|
Minerale concentratie zoals Ca/P etc. ratio zal worden beoordeeld door middel van SEM & EDX analyse
|
aan het eind van de studie
|
Medewerkers en onderzoekers
Sponsor
Medewerkers
Onderzoekers
- Hoofdonderzoeker: Rashid Javaid, Ph.D scholar, Baqai Medical University
Publicaties en nuttige links
Algemene publicaties
- Du Toit N, Kempson SA, Dixon PM. Donkey dental anatomy. Part 2: Histological and scanning electron microscopic examinations. Vet J. 2008 Jun;176(3):345-53. doi: 10.1016/j.tvjl.2008.03.004. Epub 2008 Apr 18.
- Six N, Lasfargues JJ, Goldberg M. Differential repair responses in the coronal and radicular areas of the exposed rat molar pulp induced by recombinant human bone morphogenetic protein 7 (osteogenic protein 1). Arch Oral Biol. 2002 Mar;47(3):177-87. doi: 10.1016/s0003-9969(01)00100-5.
- Yu C, Abbott PV. An overview of the dental pulp: its functions and responses to injury. Aust Dent J. 2007 Mar;52(1 Suppl):S4-16. doi: 10.1111/j.1834-7819.2007.tb00525.x.
Studie record data
Bestudeer belangrijke data
Studie start (Werkelijk)
Primaire voltooiing (Verwacht)
Studie voltooiing (Verwacht)
Studieregistratiedata
Eerst ingediend
Eerst ingediend dat voldeed aan de QC-criteria
Eerst geplaatst (Schatting)
Updates van studierecords
Laatste update geplaatst (Schatting)
Laatste update ingediend die voldeed aan QC-criteria
Laatst geverifieerd
Meer informatie
Termen gerelateerd aan deze studie
Aanvullende relevante MeSH-voorwaarden
Andere studie-ID-nummers
- Trial2022001
Plan Individuele Deelnemersgegevens (IPD)
Bent u van plan om gegevens van individuele deelnemers (IPD) te delen?
Beschrijving IPD-plan
Informatie over medicijnen en apparaten, studiedocumenten
Bestudeert een door de Amerikaanse FDA gereguleerd geneesmiddel
Bestudeert een door de Amerikaanse FDA gereguleerd apparaatproduct
Deze informatie is zonder wijzigingen rechtstreeks van de website clinicaltrials.gov gehaald. Als u verzoeken heeft om uw onderzoeksgegevens te wijzigen, te verwijderen of bij te werken, neem dan contact op met register@clinicaltrials.gov. Zodra er een wijziging wordt doorgevoerd op clinicaltrials.gov, wordt deze ook automatisch bijgewerkt op onze website .