Az Allium Sativum és a Moringa Oleifera kivonat hatása a fogzománcra

Ezt az állatkísérleti vizsgálatot a Lahore-i Egészségtudományi Egyetem állatházában (UHS) és a Lahore-i COMSATS Egyetemen végzik. Ehhez a vizsgálathoz ötvennégy egészséges hím, fehér új-zélandi nyulat (9-10 hetes) veszünk a vizsgálatba. A nyulakat véletlenszerűen 6 csoportra osztjuk. A minta mérete minden csoportban 9 nyúl lesz. A kísérleti állatokat a véletlenszám-generátor segítségével 1, 2, 3, 4-es számokkal rendeljük hozzá, és véletlenszerűen hat csoportra osztjuk (n=9), és A, B, C, D, E és F. Az 1000-1200 gramm tömegű (9-10 hetes korú) egészséges hím, fehér új-zélandi nyulakat a Lahore-i Állatorvos- és Állattudományi Egyetemről választanak ki. Az állatokat az UHS állatházába helyezik át. Az állatokat kísérleti kutatólaboratóriumban, szabályozott szobahőmérsékleten (22-24°C) és páratartalom mellett (45-65%) 12/12 órás természetes fény-sötét ciklus mellett tartják 2 hétig, hogy akklimatizálódjanak az új környezetben. Minden kísérleti állatot ad libitum etetnek zöldségekkel, gyümölcsökkel és desztillált vízzel. A 12 hét végén az összes állatot mély érzéstelenítésben le kell ölni. A mély érzéstelenítés fenntartása érdekében 45 mg/ttkg ketamin-hidrokloridot és 5 mg/ttkg xilazint kell beadni. Ezt követően 20 mg xilazint fecskendeztek be a fülvénába, hogy a nyulakat elpusztítsák, miközben érzéstelenítették őket (35).

Vérmintavétel: A centrális fülartériát (36) vagy a laterális saphena vénát választják ki, hogy 4 ml vért gyűjtsenek a 0. napon, 8 hét után és 12 hét végén. A mintát egy szérumelválasztó csőbe gyűjtik olyan vizsgálatokhoz, mint a vér ólomszáma, az alkalikus foszfatáz, a kalcium és a foszfát szint.

Szövetmintavételi technika:

A korona ajakfelszínének középső harmadából egy 4x5 mm2-es részt veszünk vizsgálatra. A vágást gyémánt tárcsával és nagy sebességű turbinával végzik, vízzel öntözve, hogy a minta tojásdadú legyen. Az összes nyúl jobb alsó állkapcsát kiválasztjuk a SEM-hez és az AFM-hez. Az összes nyúl bal alsó állkapocs metszőfogait SEM-EDX és RMS analízissel választjuk ki. Minden mintát felcímkéznek, és 12% formalint tartalmazó sterilizált edényben tárolják 72 órán keresztül.

Laboratóriumi feldolgozás:

1. Pásztázó elektronmikroszkópia: A jobb alsó állkapocs metszőfogát kiválasztja a SEM elemzéshez. A zománc szerkezete és morfológiai jellemzői a képeken láthatóak lesznek. A mintát desztillált vízzel mossuk, és lassú sebességű forró levegős fúvóval szárítjuk. Egyszerre tizenhat minta rögzíthető egy mintaszúrásra. A mintákat dupla rézszalaggal rögzítik a szúrásra. A szabaddá tett szúrást szintén rézszalag fedi le, és csak a mintarész marad fedetlenül.

   Az aranybevonatot porlasztó bevonógépben végzik el, hogy felületi vezetőt készítsenek a képek finom részleteihez. A mintaszúrást a porlasztógép kamrájába kell helyezni, és a fedelet le kell zárni. A kamrában vákuum jön létre, és argongázt töltenek be. 40 voltos potenciál kerül megadásra. Ezáltal plazma képződik a kamrában, és az argongáz elektronjai aranylemezre csapódnak. Az apró aranyrészecskék porlasztásnak indulnak a minta szúrásakor. Az arany bevonat elvégzése után az eljárás fordított lesz. A kamra megtelik levegővel, és kinyitják a fedelet. Most a mintát NOVA NANOSEM 450-ben dolgozzák fel az ultrastrukturális részletek érdekében.

2. Energiadiszperzív spektroszkópia: Az EDX-et az ásványi anyagok elemi összetételének tanulmányozására fogják használni. A NOVA NANOSEM 450-hez egy OXFORD X-ACT, PENTA FET detektort csatlakoztatunk. A SEM-hez használt mintát a SEM-EDX elemzéshez is használják. Ez akár 2 mikron vastagságú részleteket ad a felületről.

3. Atomerő-mikroszkóp: Az AFM (SPM-9500J3, Shimadzu Corp, Japán) a zománcfelület morfológiai jellemzőinek értékelésére szolgál. Minta előkészítés nélkül biztosítja a háromdimenziós felületi topográfiát. Ez a mikroszkóp a minta szondával történő szkennelésére szolgál. A minta a csonkra lesz rögzítve, amely rögzítésre és manuális beállításra kerül. A lézeres beállítás a szonda frekvenciájának meghatározása után történik. Végül a szkennelés és a képfeldolgozás WinSPM rendszerfeldolgozással történik. Egy reprezentatív mintánál hat különböző területen (2,0 × 2,0 μm szkennelési terület) készülnek mikrofelvételek AFM (SPM-9500J3, Shimadzu Corp, Japán) és AFM szoftver (SPM-Offline, Shimadzu Corp, Japán) segítségével.

   Az AFM úgy hoz létre 3D képeket a felületről, hogy egy mikron méretű konzolt pásztáz a felületen, amely általában szilíciumból vagy szilícium-nitridből készül, körülbelül 10 nm görbületi sugarú hegyével. A konzolt a csúcs és a felület közötti erők eltérítik, amelyek ~nN méretűek, és tartalmazzák az elektrosztatikus erők, a szolvatációs erők, a Vander Waals kölcsönhatások és a kémiai kötések hozzájárulását. A konzolnak ezt az elhajlását egy lézerfolt méri, amely a konzol felső felületéről egy fotodiódasorra ver vissza, amely képeket biztosít a számítógépen.

4. Raman spektroszkópia: Ez egy roncsolásmentes kémiai elemzési technika, amely részletes információkat ad a kémiai szerkezetről, a kristályosságról és a molekuláris kölcsönhatásokról. Az RMS megadja a részleteket a zománc teljes vastagságáról, a molekulaösszetételről és a minta kölcsönhatásáról. Ehhez az elemzéshez nincs szükség speciális minta-előkészítésre, és a minta más vizsgálatokhoz is felhasználható. Ehhez a tanulmányhoz a RENISHAW UK InVia Raman mikroszkópját használjuk. A 488 nm-es lézerintenzitást 10 másodpercig használják. Az RMS-t 6 különböző ponton végzik el, és az átlagos leolvasást fogják használni a vizsgálat során.