Identificatie van voorspellers van respons op mepolizumab bij CRSwNP (ISS-RESMEPO)

Bestudeer de grondgedachte:

De onderzoekers stellen een ambitieus onderzoeksprogramma voor om het onderliggende werkingsmechanisme te onderzoeken van de verlengde respons op behandeling met mepolizumab bij patiënten met CRSwNP zoals waargenomen in de SYNAPSE-studie. Bovendien proberen de onderzoekers het verband tussen virale ziekte en eosinofilie vast te stellen, gebaseerd op een concept van virale interferentie met immunologische respons, geïnspireerd door bevindingen van de COVID-19-pandemie.

Studie ontwerp:

In deze monocentrische prospectieve cohortstudie zullen twee doorgewinterde onderzoekers de ziektemodificerende effecten van mepolizumab op CRSwNP beoordelen. Deze studie heeft tot doel om in een ''real-world'' setting de mechanismen te identificeren die ten grondslag liggen aan de langdurige respons op mepolizumab en om biomarkers te identificeren die een langdurige respons voorspellen. Zesendertig patiënten met CRSwNP die niet reageren op medische en chirurgische behandeling zullen worden behandeld met twaalf maanden mepolizumab op een ongeblindeerde en niet-gerandomiseerde manier (open-label).

De respons zal worden beoordeeld aan de hand van de gebruikelijke klinische parameters, waaronder sinonasale endoscopie. Het responsmechanisme zal grondig worden onderzocht vóór en 6 maanden na het begin van de behandeling met een multiomische benadering. Het effect op lange termijn zal alleen klinisch worden beoordeeld.

1. Bepaal het werkingsmechanisme van mepolizumab in CRSwNP met multiomics. De onderzoekers zullen de kritische mechanismen onderzoeken die bijdragen aan transcriptiepatronen in ziek weefsel in een celtypespecifiek perspectief en onderzoeken of virale infectie bijdraagt ​​aan CRS. Gelijktijdige profilering van genexpressie en open chromatine van dezelfde cel zal worden gebruikt om epigenetische modificaties in geïdentificeerde celclusters vast te leggen door RNA-seq gecombineerd met een assay voor transposase-toegankelijk chromatine (Chromium Single-Cell Multiome ATAC + genexpressie, 10X Genomics) .

2. Bevestig verbeterde epitheliale regeneratie en herstel na behandeling met mepolizumab via in vitro functionele beoordeling van epitheelcapaciteit voor regeneratie.

   Met behulp van in vitro modellen voor wondgenezing zullen de onderzoekers de proliferatie en celmigratie van PEC evalueren uit de neuspoliepbiopsie van patiënten vóór en 6 maanden na het begin van de behandeling. Elk tijdstip zal in drievoud worden beoordeeld op petrischaal (3 putjes/patiënt) samen met kweken op Lab-Tek kamerglaasjes voor immunofluorescentietesten. Functionele beoordeling van de capaciteit van weefselherstel zal worden beoordeeld aan de hand van de snelheid van herstel na gestandaardiseerd letsel. Immunofluorescentie beoordeelt de markers van het epitheel (tubuline, cadherine, vimentine etc.) en epitheelfunctie (tight junction, zonula occludens, integrines etc.) en door de aanwezigheid van proliferatiemarkers (Ki-67) op de plaats van de wond.

3. Identificeer geassocieerde epigenetische responskenmerken die kunnen dienen als potentiële biomarkers van de responderpopulatie.

   Zoals hierboven beschreven, zal epigenetische modulatie van het genoom worden beoordeeld op eencellig niveau in multiomische profilering. Om epigenetische profilering te beperken tot epigenetische modificaties die kunnen worden gebruikt als biomarkers, zal DNA-methylatieprofilering worden uitgevoerd door DNA MethylationEPIC Beadchip om vermeende biomarkers van respons op behandeling te identificeren en methylatie-gerelateerde regulatiemechanismen te identificeren.

4. Karakteriseer de impact van mepolizumab op virussen door een bibliotheek van virussen te definiëren die aanwezig zijn in CRSwNP en hun niveaus voor en na de behandeling te vergelijken met mepolizumab.

   De onderzoekers zullen op sequentie gebaseerde profilering uitvoeren met behulp van deep sequencing-technologieën (Illumina high-throughput RNA-sequencing) om kandidaat-virale pathogenen te onthullen met behulp van een bestaande pre-COVID-biobank van CRSwNP-weefsel in onze instelling om het type virussen in CRSwNP te bepalen. Evenzo zullen virussen worden beoordeeld in de populatie die een behandeling met mepolizumab ondergaat om te beoordelen of de behandeling de virale belasting en specifieke virussen beïnvloedt.

5. Identificeer epigenetische kenmerken geassocieerd met de aanwezigheid van verschillende virussen die kunnen dienen als markers van eerdere virale infectie.

De onderzoekers zullen de specifieke associatie tussen virussen en epigenetische kenmerken onderzoeken met de integratieve analyse van de resulterende gegevens met behulp van epigenomics- en transcriptomics-methoden.

Er zal een follow-up van patiënten gedurende 12 maanden zijn.