Identificando Preditores de Resposta ao Mepolizumabe na RSCcPN (ISS-RESMEPO)

Justificativa do estudo:

Os pesquisadores propõem um ambicioso programa de pesquisa para investigar o mecanismo de ação subjacente das respostas prolongadas ao tratamento com mepolizumabe em pacientes com CRSwNP observados no estudo SYNAPSE. Além disso, os investigadores procuram estabelecer a ligação entre a doença viral e a eosinofilia, com base no conceito de interferência viral na resposta imunológica inspirado nas descobertas da pandemia de COVID-19.

Design de estudo:

Neste estudo de coorte prospectivo monocêntrico, dois investigadores experientes avaliarão os efeitos modificadores da doença do mepolizumabe na RSCcPN. Este estudo visa identificar em um cenário de ''mundo real'' os mecanismos subjacentes à resposta prolongada ao mepolizumabe e identificar biomarcadores preditivos de resposta prolongada. Trinta e seis pacientes com RSCcPN que não respondem ao tratamento clínico e cirúrgico serão tratados com mepolizumabe por doze meses de forma não cega e não randomizada (open-label).

A resposta será avaliada com parâmetros clínicos usuais, incluindo endoscopia nasossinusal. O mecanismo de resposta será explorado em profundidade antes e 6 meses após o início do tratamento com uma abordagem multiômica. O efeito a longo prazo será avaliado apenas por avaliação clínica.

1. Determinar o mecanismo de ação do mepolizumabe na RSCcPN com multiômica. Os investigadores explorarão os mecanismos críticos que contribuem para os padrões de transcrição em tecidos doentes em uma perspectiva específica do tipo de célula e explorarão se a infecção viral contribui para a SRC. O perfil simultâneo da expressão gênica e da cromatina aberta da mesma célula será usado para capturar modificações epigenéticas em grupos de células identificadas por RNA-seq combinado com um ensaio para cromatina acessível por transposase (Chromium Single-Cell Multiome ATAC + Gene expression, 10X Genomics) .

2. Confirme a melhora da regeneração e reparo epitelial após o tratamento com mepolizumabe por meio da avaliação funcional in vitro da capacidade epitelial de regeneração.

   Usando modelos in vitro de cicatrização de feridas, os pesquisadores avaliarão a proliferação e migração celular de PEC da biópsia de pólipos nasais dos pacientes antes e 6 meses após o início do tratamento. Cada ponto de tempo será avaliado em triplicata em petri (3 poços/paciente) juntamente com culturas em lâminas de câmara Lab-Tek para ensaios de imunofluorescência. A avaliação funcional da capacidade de reparo tecidual será avaliada pela velocidade de reparo após lesão padronizada. A imunofluorescência avaliará os marcadores do epitélio (tubulina, caderina, vimentina etc.) e função epitelial (tight junction, zonula occludens, integrinas etc.) e pela presença de marcadores de proliferação (Ki-67) no local da ferida.

3. Identifique marcas epigenéticas de resposta associadas que podem servir como potenciais biomarcadores da população respondedora.

   Conforme descrito acima, a modulação epigenética do genoma será avaliada no nível de célula única no perfil multiômico. A fim de restringir o perfil epigenético a modificações epigenéticas que podem ter uso como biomarcadores, o perfil de metilação do DNA será realizado pelo DNA MethylationEPIC Beadchip para identificar biomarcadores putativos de resposta ao tratamento e identificar mecanismos regulatórios relacionados à metilação.

4. Caracterizar o impacto do mepolizumabe nos vírus, definindo uma biblioteca de vírus presentes na RSCcPN e comparando seus níveis pré e pós-tratamento com mepolizumabe.

   Os investigadores realizarão perfis baseados em sequenciamento usando tecnologias de sequenciamento profundo (sequenciamento de RNA de alto rendimento Illumina) para revelar patógenos virais candidatos usando um biobanco pré-COVID existente de tecido CRSwNP em nossa instituição para definir o tipo de vírus presente no CRSwNP. Da mesma forma, os vírus serão avaliados na população em tratamento com mepolizumabe para avaliar se o tratamento influencia a carga viral e vírus específicos.

5. Identificar marcas epigenéticas associadas à presença de diferentes vírus que podem servir como marcadores de infecção viral prévia.

Os investigadores investigarão a associação específica entre vírus e marcas epigenéticas com a análise integrativa dos dados resultantes usando métodos de epigenômica e transcriptômica.

Haverá um acompanhamento dos pacientes ao longo de 12 meses.