Optimalisatie van het isolatieprotocol voor extracellulaire blaasjes (EV's) van menselijke folliculaire vloeistof

Achtergrond: Extracellulaire blaasjes (EV's) zijn membraangebonden blaasjes gevonden in alle biologische vloeistoffen, die verschillende regulerende moleculen bevatten, waaronder microRNA's (miRNA's). Er is gesuggereerd dat de EV's in menselijke folliculaire vloeistof (de vloeistof rond de eicel in de eierstok) een cruciale rol spelen bij de ontwikkeling van de eicellen door deze miRNA's. Er zijn echter verschillende methoden voor het isoleren van deze EV's van folliculaire vloeistof. Voordat verder onderzoek kan worden uitgevoerd naar de pathofysiologie en potentiële diagnostische en therapeutische toepassingen van deze EV's en hun inhoud, moet de optimale isolatietechniek worden bepaald voor toekomstige studies.

Elke methode heeft zijn voor- en nadelen, en de zuiverheid en efficiëntie kunnen variëren tussen soorten en verschillende biologische vloeistoffen. Er zijn slechts een beperkt aantal studies waarin de verschillende technieken voor toepassing in menselijke folliculaire vloeistof worden vergeleken.

Doel: deze studie zal de drie meest gebruikte technieken vergelijken voor het isoleren van EV's: op maat gebaseerd, op sedimentatie gebaseerd (differentiële ultracentrifugatie) en op drijfvermogen gebaseerde isolatietechnieken.

Methodologie:

In deze prospectieve studie zal folliculaire vloeistof worden verzameld van vier patiënten die transvaginale eicelophaal ondergaan na de stimulatie van de ovariële universitair ziekenhuis. Patiënten ouder dan 40 jaar of met endometriose, adenomyose of PCOS (polycysteus ovariumsyndroom) zullen niet in deze studie worden opgenomen. Tijdens de haalprocedure van de eicel zal folliculaire vloeistof worden verzameld van 2-4 eicellen per patiënt. Aangezien folliculaire vloeistof niet wordt gebruikt bij de behandeling van de patiënt (restmateriaal), heeft dit geen invloed op de behandeling.

Na het verzamelen worden de drie isolatietechnieken op elk monster toegepast. De technieken zullen worden vergeleken in termen van zuiverheid (afwezigheid van verontreiniging) en efficiëntie (EV -concentratie) met behulp van transmissie -elektronenmicroscopie, nanodeeltjesvolganalyse en Western -blotting.