Definert fekal mikrobiota-transplantasjon for Clostridium Difficile-diaré

Denne studien vil i utgangspunktet omfatte 12 fag. Basert på den relativt store erfaringen med FMT rapportert til dags dato, forventer vi en umiddelbar og vedvarende respons som bestemt av opphør av feber, leukocytose og diaré og tap av ubehag i magen hos >8 (80 %) av forsøkspersonene. Dersom en slik respons ikke observeres hos >3 av de første 6 behandlede pasientene, vil vi revurdere sammensetningen av FMT-blandingen og/eller vurdere om mer enn ett inokulum bør gis. Hvis suksessraten på 80 % eller mer oppnås, vil klinisk oppfølging og studier av mikrobiomet fortsette i totalt 12 måneder. I løpet av den tiden planlegger vi å få nye godkjenninger for å teste andre metoder for inokulumtilførsel (f.eks. via NG-rør eller oral administrering i en bufret løsning). I motsetning til bruken av rå avføring med ukjent og variabel sammensetning, er inokulumet definert og dyrket under anerobiske forhold med definerte medier. Før administrasjon av terapi vil inokulumet bli undersøkt med gram-stamme og deretter dyrkes for å sikre at det inneholder orgamismene som ble brukt. Sjansen for en forurensning antas å være svært usannsynlig, og kontaminering med et ukjent patogen er i hovedsak umulig. Som et ekstra sikkerhetstiltak gis inokulumet inn i mage-tarmkanalen som er designet for mat og andre ikke-sterile materialer.

Vi forventer en rask og vedvarende respons, bestemt av opphør av feber, leukocytose og diaré og tap av ubehag i magen hos >8 (80 %) av forsøkspersonene. Dersom en slik respons ikke observeres hos >3 av de første 6 behandlede pasientene, vil vi revurdere sammensetningen av FMT-blandingen og/eller vurdere om mer enn ett inokulum bør gis. Hvis suksessraten på 80 % oppnås, vil klinisk oppfølging og studier av mikrobiomet fortsette i totalt 12 måneder.

Inklusjonskriterier:

Bare VA-pasienter vil være kvalifisert for studien hvis de har hatt en bekreftet diagnose av CDI som har blitt behandlet i 10-14 dager med anbefalte doser metronidazol eller vancomycin og enten ikke har respondert, eller har respondert og fått tilbakefall innen 4 uker etter slutten av behandlingen. Diagnosen vil bli ansett som bekreftet av tilstedeværelsen av diaré (>3 uformet avføring i en 24-timers periode i 2 påfølgende dager) og ubehag i magen. Tilstedeværelsen av feber, leukocytose og et serumalbumin <3 gm/dL vil bli registrert, men vil ikke være nødvendig for diagnosen. Pasienter vil bli inkludert etter at de har gitt informert samtykke og signert det aktuelle samtykkeskjemaet som er godkjent av Baylor IRB.

Prosedyre: Pasienter med påvist tilbakevendende CDI ved MEDVAMC vil bli bedt om å delta. Helsejournalene til alle VA-pasienter som er lagt inn vil bli flagget at de er registrert i en forskningsstudie. Vi antar at stammene beskrevet av Tvede og Rask-Madsen var kliniske isolater da det ikke er noen oversikt over disse stammene i senere publikasjoner, og de er ikke tilgjengelige fra noen av de offentlige stammelagrene som ATCC, DSMZ eller CCUG. I stedet for disse spesifikke stammene vil vi bruke følgende fullstendig sekvenserte type stammer, opprinnelig isolert fra menneskelig avføring, og kjøpt fra ATCC: Bacteroides ovatus ATCC 8483, Bacteroides vulgatus ATCC 8482 og Bacteroides thetaiotaomicron ATCC 29148. Primærkulturer vil bli dyrket i henhold til GLP-prosedyrer (SOP vedlagt) på forhåndsredusert anaerob blodagar ANABA (Remel, Lenexa, KS), deretter vil buljongkulturer av hver stamme bli dyrket anaerobt ved 37°C i 48 timer i pre-redusert hakket kjøtt medium som skal lages i huset. Bakterier vil bli samlet ved sentrifugering ved 1600 x g i 10 minutter og resuspendert i 5 mL sterilt forhåndsredusert 0,9 % saltvann, ved å bruke Macfarlane-standarder for å estimere bakteriekonsentrasjoner for å målrette en sluttkonsentrasjon på 10 til styrken 8 til 9 cfu/mL. Alikvoter (0,1 ml) vil bli fjernet for seriefortynning og plettering og anaerob inkubering ved 37 °C på forhåndsreduserte ANABA-plater for å bestemme faktiske bakteriekonsentrasjoner. To mL av hver av de tre saltvannssuspensjonene vil bli kombinert med 194 mL sterilt forhåndsredusert 0,9 % saltvann for å danne infusjonscocktailen. Den 200 ml bakterielle suspensjonen vil deretter bli administrert i tynntarmen ved hjelp av et Olympus ultratynn gastro-duodenoskop. Tynntarmsruten er valgt for å unngå de potensielt skadelige effektene av magesyre på inokulumets overlevelse og for å forhindre eller redusere refluks av volumet administrert inn i magen. Forsøkspersonene vil deretter bli fulgt i opptil 12 måneder.

Transplantasjonsprosedyre: Pasientene vil bli forbehandlet med 4 dager med oral vancomycin (125 mg q 6 timer) for å redusere C. difficile-belastningen, med den siste dosen gitt kl. 18.00 kvelden før prosedyren (ca. 14-16 timer før prosedyren). FMT). Kvelden før FMT og igjen om morgenen av prosedyren, vil pasientene få 20 mg omeprazol gjennom munnen. På morgenen for prosedyren vil et "super-slankt" gastroskop med en diameter på 5,5 mm føres per munn inn i pasientens tynntarm med et forsøk på å plassere spissen ved eller utenfor ligamentet til Treitz. To hundre ml av bakteriesuspensjonen vil bli instillert i tynntarmen via et kateter som føres gjennom biopsikanalen til endoskopet og skylles med 25 ml sterilt forhåndsredusert 0,9 % saltvann. Etter fjerning av endoskopet, etter restitusjon, vil pasienter få lov til å gjenoppta et normalt kosthold og fysiske aktiviteter.

Forsøkspersonene vil bli sett daglig når de er på sykehus (og kontaktet daglig på telefon etter utskrivning) i 14 dager. Forsøkspersonene vil deretter bli kontaktet etter 30 dager og månedlig i 3 måneder, deretter hver 3. måned i ett år. Symptomer vil bli registrert ved hver kontakt ved hjelp av et standard spørreskjema. Laboratorieundersøkelser inkludert CBC med differensialt, grunnleggende metabolsk panel og albumin vil bli oppnådd etter 3 dager, ved 10 dager og ved 30 pluss eller minus 7 dager.

Resultatene av klinisk utfall vil bli kombinert med evaluering av effekten av terapien på det fekale mikrobiomet. Avføringsprøve vil bli tatt regelmessig i opptil 1 år eller inntil påvist tilbakefall. Avføringsprøver og rektale vattpinner vil bli tatt daglig i løpet av den første studieperioden frem til utskrivning fra sykehus eller 14 dager, og deretter avføringsprøver med 30 dager og med 3 måneders mellomrom i ett år. Etter utskrivning fra sykehus vil prøver bli sendt til laboratoriet ved hjelp av kaldpakker av Federal Express. Dette bør tillate oss å undersøke i detalj effekten av terapien på C. difficile så vel som på skjebnen til de administrerte bakteriene (som hele genomet er sekvensert og publisert for). for detaljer se vedlegg).