Transplante de Microbiota Fecal Definido para Diarréia por Clostridium Difficile

Este estudo inicialmente envolverá 12 indivíduos. Com base na experiência relativamente grande com FMT relatada até o momento, prevemos uma resposta imediata e sustentada conforme determinado pela cessação da febre, leucocitose e diarreia e perda do desconforto abdominal em >8 (80%) dos indivíduos. Se tal resposta não for observada em >3 dos primeiros 6 pacientes tratados, reavaliaremos a composição da mistura FMT e/ou consideraremos se mais de um inóculo deve ser administrado. Se a taxa de sucesso de 80% ou mais for alcançada, o acompanhamento clínico e os estudos do microbioma continuarão por um total de 12 meses. Durante esse período, planejamos obter novas aprovações para testar outros métodos de administração de inóculo (por exemplo, via sonda NG ou administração oral em solução tamponada). Em contraste com o uso de fezes cruas de composição desconhecida e variável, o inóculo é definido e cultivado em condições anaeróbicas com meio definido. Pré-administração da terapia o inóculo será examinado por cepas de Gram e então será cultivado para garantir que contém os organismos que foram utilizados. A chance de um contaminante é considerada muito improvável e a contaminação com um patógeno desconhecido é essencialmente impossível. Como medida de segurança adicional, o inóculo é administrado no trato gastrointestinal, que é projetado para alimentos e outros materiais não estéreis.

Prevemos uma resposta imediata e sustentada, determinada pela cessação da febre, leucocitose e diarreia e perda do desconforto abdominal em >8 (80%) dos indivíduos. Se tal resposta não for observada em >3 dos primeiros 6 pacientes tratados, reavaliaremos a composição da mistura FMT e/ou consideraremos se mais de um inóculo deve ser administrado. Se a taxa de sucesso de 80% for alcançada, o acompanhamento clínico e os estudos do microbioma continuarão por um total de 12 meses.

Critério de inclusão:

Somente pacientes com AV serão elegíveis para o estudo se tiverem um diagnóstico confirmado de CDI que foi tratado por 10-14 dias com as doses recomendadas de metronidazol ou vancomicina e não respondeu ou respondeu e recaiu dentro de 4 semanas de o fim do tratamento. O diagnóstico será considerado confirmado pela presença de diarreia (>3 evacuações não formadas em um período de 24 horas por 2 dias sucessivos) e desconforto abdominal. A presença de febre, leucocitose e albumina sérica <3 gm/dL serão registradas, mas não serão necessárias para o diagnóstico. Os pacientes serão incluídos após terem dado consentimento informado e assinado o formulário de consentimento apropriado que foi aprovado pelo Baylor IRB.

Procedimento: Pacientes com CDI recorrente comprovada no MEDVAMC serão convidados a participar. Os registros de saúde de todos os pacientes com VA inseridos serão sinalizados como inscritos em um estudo de pesquisa. Presumimos que as cepas descritas por Tvede e Rask-Madsen eram isolados clínicos, pois não há registro dessas cepas em publicações posteriores e elas não estão disponíveis em nenhum dos repositórios públicos de cepas, como ATCC, DSMZ ou CCUG. No lugar dessas cepas específicas, usaremos as seguintes cepas do tipo totalmente sequenciadas, originalmente isoladas de fezes humanas e adquiridas da ATCC: Bacteroides ovatus ATCC 8483, Bacteroides vulgatus ATCC 8482 e Bacteroides thetaiotaomicron ATCC 29148. As culturas primárias serão cultivadas de acordo com os procedimentos de GLP (SOP anexado) em ágar de sangue anaeróbico pré-reduzido ANABA (Remel, Lenexa, KS), então as culturas de caldo de cada cepa serão cultivadas anaerobicamente a 37°C por 48 horas em pré-reduzido meio de carne picada que será feita em casa. As bactérias serão coletadas por centrifugação a 1.600 x g por 10 minutos e ressuspensas em 5 mL de solução salina 0,9% pré-reduzida estéril, usando padrões de Macfarlane para estimar as concentrações bacterianas para atingir uma concentração final de 10 à potência de 8 a 9 cfu/mL. Alíquotas (0,1 mL) serão removidas para diluição em série e plaqueamento e incubação anaeróbica a 37°C em placas ANABA pré-reduzidas para determinar as concentrações bacterianas reais. Dois mL de cada uma das três suspensões de soro fisiológico serão combinados com 194 mL de soro fisiológico 0,9% pré-reduzido estéril para formar o coquetel de infusão. A suspensão bacteriana de 200 mL será então administrada no intestino delgado usando um gastroduodenoscópio ultrafino da Olympus. A via do intestino delgado é escolhida para evitar os efeitos potencialmente deletérios do ácido gástrico na sobrevivência do inóculo e para prevenir ou reduzir o refluxo do volume administrado no estômago. Os indivíduos serão seguidos por até 12 meses.

Procedimento de transplante: Os pacientes serão pré-tratados com 4 dias de vancomicina oral (125 mg a cada 6 horas) para reduzir a carga de C. difficile, com a dose final sendo administrada às 18h na noite anterior ao procedimento (aproximadamente 14-16 horas antes FMT). Na noite anterior ao FMT e novamente na manhã do procedimento, os pacientes receberão 20 mg de omeprazol por via oral. Na manhã do procedimento, um gastroscópio "superfino" de 5,5 mm de diâmetro será passado por boca no intestino delgado do paciente com uma tentativa de colocar a ponta no ligamento de Treitz ou além dele. Duzentos mL da suspensão bacteriana serão instilados no intestino delgado por meio de um cateter introduzido pelo canal de biópsia do endoscópio e lavado com 25 mL de soro fisiológico 0,9% pré-reduzido estéril. Após a remoção do endoscópio, após a recuperação, os pacientes poderão retomar uma dieta normal e atividades físicas.

Os indivíduos serão vistos diariamente quando estiverem no hospital (e contatados diariamente por telefone após receberem alta) por 14 dias. Os indivíduos serão contatados em 30 dias e mensalmente por 3 meses, depois a cada 3 meses por um ano. Os sintomas serão registrados em cada contato usando um questionário padrão. Exames laboratoriais incluindo hemograma com diferencial, painel metabólico básico e albumina serão obtidos em 3 dias, em 10 dias e em 30 mais ou menos 7 dias.

Os resultados do desfecho clínico serão combinados com a avaliação do efeito da terapia no microbioma fecal. A amostra de fezes será coletada regularmente até 1 ano ou até a recidiva comprovada. Amostras de fezes e swabs retais serão obtidas diariamente durante o período inicial do estudo até a alta hospitalar ou 14 dias e então amostras de fezes em 30 dias e em intervalos de 3 meses por um ano. Após a alta hospitalar, as amostras serão enviadas ao laboratório por meio de compressas frias da Federal Express. Isso deve nos permitir examinar em detalhes o efeito da terapia no C. difficile, bem como no destino da bactéria administrada (para a qual todo o genoma foi sequenciado e publicado). para detalhes ver anexos).