Определенная трансплантация фекальной микробиоты при диарее Clostridium difficile

В этом исследовании первоначально будут участвовать 12 субъектов. Основываясь на относительно большом опыте FMT, о котором сообщалось на сегодняшний день, мы ожидаем быстрого и устойчивого ответа, определяемого прекращением лихорадки, лейкоцитоза и диареи, а также исчезновением дискомфорта в животе у> 8 (80%) субъектов. Если такой ответ не наблюдается более чем у 3 из первых 6 пролеченных пациентов, мы пересмотрим состав смеси ТФМ и/или рассмотрим, следует ли вводить более одного инокулята. Если будет достигнут 80% или более успешных результатов, клиническое наблюдение и исследования микробиома будут продолжаться в общей сложности в течение 12 месяцев. В течение этого времени мы планируем получить новые разрешения для тестирования других методов доставки инокулята (например, через назогастральный зонд или пероральное введение в буферном растворе). В отличие от использования сырого стула неизвестного и переменного состава, инокулят определяется и выращивается в анаэробных условиях на определенной среде. Перед введением терапии инокулят исследуют на штамм граммов, а затем культивируют, чтобы убедиться, что он содержит использованные оргамизмы. Вероятность заражения считается очень маловероятной, а заражение неизвестным патогеном практически невозможно. В качестве дополнительной меры безопасности инокулят вводят в желудочно-кишечный тракт, предназначенный для пищевых продуктов и других нестерильных материалов.

Мы ожидаем быстрого и устойчивого ответа, определяемого по прекращению лихорадки, лейкоцитоза и диареи, а также исчезновению дискомфорта в животе у > 8 (80%) субъектов. Если такой ответ не наблюдается более чем у 3 из первых 6 пролеченных пациентов, мы пересмотрим состав смеси ТФМ и/или рассмотрим, следует ли вводить более одного инокулята. При достижении 80% успеха клиническое наблюдение и исследования микробиома будут продолжаться в общей сложности в течение 12 месяцев.

Критерии включения:

Только пациенты с ВА будут иметь право на участие в исследовании, если у них был подтвержден диагноз ИКД, которые лечились в течение 10-14 дней рекомендуемыми дозами метронидазола или ванкомицина и либо не ответили, либо ответили и рецидивировали в течение 4 недель после начала лечения. окончание лечения. Диагноз будет считаться подтвержденным при наличии диареи (> 3 случаев неоформленного стула в течение 24 часов в течение 2 дней подряд) и дискомфорта в животе. Наличие лихорадки, лейкоцитоза и сывороточного альбумина <3 г/дл будет зарегистрировано, но не обязательно для постановки диагноза. Пациенты будут включены после того, как они дадут информированное согласие и подпишут соответствующую форму согласия, которая была одобрена IRB Baylor.

Процедура. Пациентам с подтвержденным рецидивом ИКД в MEDVAMC будет предложено принять участие. В медицинских картах всех введенных пациентов с ВА будет пометка о том, что они включены в исследовательское исследование. Мы предполагаем, что штаммы, описанные Tvede и Rask-Madsen, были клиническими изолятами, поскольку в более поздних публикациях нет записей об этих штаммах, и они недоступны ни в одном из общедоступных репозиториев штаммов, таких как ATCC, DSMZ или CCUG. Вместо этих специфических штаммов мы будем использовать следующие полностью секвенированные типовые штаммы, первоначально выделенные из фекалий человека и приобретенные в ATCC: Bacteroides ovatus ATCC 8483, Bacteroides vulgatus ATCC 8482 и Bacteroides thetaiotaomicron ATCC 29148. Первичные культуры будут выращивать в соответствии с процедурами GLP (СОП прилагается) на предварительно восстановленном анаэробном кровяном агаре ANABA (Remel, Lenexa, KS), затем бульонные культуры каждого штамма будут анаэробно культивироваться при 37°C в течение 48 часов в предварительно восстановленном рубленая мясная среда, которая будет сделана в доме. Бактерии собирают центрифугированием при 1600 x g в течение 10 минут и ресуспендируют в 5 мл стерильного предварительно разбавленного 0,9% физиологического раствора с использованием стандартов Макфарлейна для оценки бактериальных концентраций до целевой конечной концентрации 10 в степени от 8 до 9 КОЕ/мл. Аликвоты (0,1 мл) будут взяты для серийного разбавления и посева и анаэробной инкубации при 37°C на предварительно восстановленных чашках ANABA для определения фактических концентраций бактерий. Два мл каждой из трех солевых суспензий будут объединены со 194 мл стерильного предварительно разбавленного 0,9% физиологического раствора для формирования инфузионного коктейля. Затем 200 мл бактериальной суспензии вводят в тонкую кишку с помощью ультратонкого гастродуоденоскопа Olympus. Путь через тонкую кишку выбирают, чтобы избежать потенциально вредного воздействия желудочной кислоты на выживаемость инокулята и предотвратить или уменьшить рефлюкс объема, введенного в желудок. Затем за субъектами будут наблюдать до 12 месяцев.

Процедура трансплантации: пациенты будут предварительно получать 4 дня перорального ванкомицина (125 мг каждые 6 часов) для снижения нагрузки C. difficile, при этом окончательная доза будет вводиться в 18:00 вечером перед процедурой (примерно за 14-16 часов до трансплантации). ФМТ). Вечером перед ТФМ и утром перед процедурой пациенты получают 20 мг омепразола перорально. Утром перед процедурой «сверхтонкий» гастроскоп диаметром 5,5 мм вводится через рот в тонкую кишку пациента с попыткой поместить наконечник на связку Трейтца или за нее. Двести мл бактериальной суспензии вводят в тонкую кишку через катетер, введенный через биопсийный канал эндоскопа, и промывают 25 мл стерильного предварительно разбавленного 0,9% физиологического раствора. После удаления эндоскопа после выздоровления пациентам будет разрешено вернуться к обычному питанию и физическим нагрузкам.

Субъектов будут видеть ежедневно в больнице (и с ними будут ежедневно связываться по телефону после выписки) в течение 14 дней. Затем с субъектами будут связываться через 30 дней и ежемесячно в течение 3 месяцев, затем каждые 3 месяца в течение одного года. Симптомы будут регистрироваться при каждом контакте с использованием стандартной анкеты. Лабораторные исследования, включая общий анализ крови с дифференциалом, базовую метаболическую панель и альбумин, будут получены через 3 дня, через 10 дней и через 30 плюс-минус 7 дней.

Результаты клинического исхода будут объединены с оценкой влияния терапии на фекальный микробиом. Образец стула будет собираться регулярно до 1 года или до доказанного рецидива. Образцы стула и ректальные мазки будут собираться ежедневно в течение начального периода исследования до выписки из больницы или через 14 дней, а затем образцы стула через 30 дней и с интервалами в 3 месяца в течение одного года. После выписки из больницы образцы будут отправлены в лабораторию с помощью охлаждающих пакетов компанией Federal Express. Это должно позволить нам детально изучить влияние терапии на C. difficile, а также на судьбу введенных бактерий (полный геном которых был секвенирован и опубликован). подробности см. в приложениях).