Definierte fäkale Mikrobiota-Transplantation für Clostridium Difficile-Durchfall

Diese Studie wird zunächst 12 Probanden einschreiben. Basierend auf den bisher berichteten relativ umfangreichen Erfahrungen mit FMT erwarten wir eine schnelle und anhaltende Reaktion, die durch das Aufhören von Fieber, Leukozytose und Durchfall und einen Rückgang der Bauchbeschwerden bei > 8 (80 %) der Probanden festgestellt wird. Wenn eine solche Reaktion nicht bei > 3 der ersten 6 behandelten Patienten beobachtet wird, werden wir die Zusammensetzung der FMT-Mischung neu bewerten und/oder prüfen, ob mehr als ein Inokulum verabreicht werden sollte. Wenn die Erfolgsquote von 80 % oder mehr erreicht wird, werden die klinische Nachsorge und die Studien des Mikrobioms für insgesamt 12 Monate fortgesetzt. Während dieser Zeit planen wir, neue Zulassungen zu erhalten, um andere Methoden der Inokulumverabreichung zu testen (z. B. über NG-Röhrchen oder orale Verabreichung in einer gepufferten Lösung). Im Gegensatz zur Verwendung von rohem Stuhl unbekannter und variabler Zusammensetzung wird das Inokulum definiert und unter anaeroben Bedingungen mit definierten Medien gezüchtet. Vor der Verabreichung der Therapie wird das Inokulum auf Gram-Stamm untersucht und dann kultiviert, um sicherzustellen, dass es die verwendeten Organismen enthält. Die Möglichkeit einer Kontaminierung wird als sehr unwahrscheinlich und eine Kontamination mit einem unbekannten Pathogen im Wesentlichen als unmöglich angesehen. Als zusätzliche Sicherheitsmaßnahme wird das Inokulum in den Magen-Darm-Trakt gegeben, der für Lebensmittel und andere unsterile Materialien bestimmt ist.

Wir erwarten eine schnelle und anhaltende Reaktion, die durch das Aufhören von Fieber, Leukozytose und Durchfall und das Verschwinden von Bauchbeschwerden bei > 8 (80 %) der Probanden festgestellt wird. Wenn eine solche Reaktion nicht bei > 3 der ersten 6 behandelten Patienten beobachtet wird, werden wir die Zusammensetzung der FMT-Mischung neu bewerten und/oder prüfen, ob mehr als ein Inokulum verabreicht werden sollte. Wenn die Erfolgsquote von 80 % erreicht wird, werden die klinische Nachsorge und Studien des Mikrobioms für insgesamt 12 Monate fortgesetzt.

Einschlusskriterien:

Nur VA-Patienten kommen für die Studie infrage, wenn sie eine bestätigte CDI-Diagnose hatten, die 10-14 Tage lang mit den empfohlenen Dosen von Metronidazol oder Vancomycin behandelt wurden und entweder nicht angesprochen haben oder innerhalb von 4 Wochen angesprochen und einen Rückfall erlitten haben das Ende der Behandlung. Die Diagnose gilt als bestätigt durch das Vorhandensein von Durchfall (> 3 ungeformte Stühle in einem Zeitraum von 24 Stunden an 2 aufeinanderfolgenden Tagen) und Bauchbeschwerden. Das Vorhandensein von Fieber, Leukozytose und einem Serumalbumin < 3 g/dl wird aufgezeichnet, ist aber für die Diagnose nicht erforderlich. Die Patienten werden eingeschlossen, nachdem sie ihre Einverständniserklärung abgegeben und das entsprechende Einverständnisformular unterzeichnet haben, das vom Baylor IRB genehmigt wurde.

Verfahren: Patienten mit nachgewiesener rezidivierender CDI am MEDVAMC werden zur Teilnahme aufgefordert. Die Krankenakten aller eingegebenen VA-Patienten werden gekennzeichnet, dass sie in eine Forschungsstudie eingeschrieben sind. Wir gehen davon aus, dass es sich bei den von Tvede und Rask-Madsen beschriebenen Stämmen um klinische Isolate handelte, da es in späteren Veröffentlichungen keine Aufzeichnungen über diese Stämme gibt und sie in keinem der öffentlichen Stammarchive wie ATCC, DSMZ oder CCUG erhältlich sind. Anstelle dieser spezifischen Stämme werden wir die folgenden vollständig sequenzierten Stämme verwenden, die ursprünglich aus menschlichen Fäkalien isoliert und von ATCC erworben wurden: Bacteroides ovatus ATCC 8483, Bacteroides vulgatus ATCC 8482 und Bacteroides thetaiotaomicron ATCC 29148. Primärkulturen werden gemäß GLP-Verfahren (SOP im Anhang) auf vorreduziertem anaerobem Blutagar ANABA (Remel, Lenexa, KS) gezüchtet, dann werden Bouillonkulturen jedes Stamms 48 Stunden lang bei 37 °C in vorreduziertem Zustand anaerob kultiviert gehacktes Fleischmedium, das im Haus hergestellt wird. Die Bakterien werden durch Zentrifugation bei 1.600 x g für 10 Minuten gesammelt und in 5 ml steriler vorreduzierter 0,9 %iger Kochsalzlösung resuspendiert, wobei Macfarlane-Standards verwendet werden, um die Bakterienkonzentrationen abzuschätzen und eine Endkonzentration von 10 hoch 8 bis 9 cfu/ml anzustreben. Aliquots (0,1 ml) werden zur seriellen Verdünnung und Ausplattierung und anaeroben Inkubation bei 37 °C auf vorreduzierten ANABA-Platten entnommen, um die tatsächlichen Bakterienkonzentrationen zu bestimmen. Zwei ml jeder der drei Kochsalzsuspensionen werden mit 194 ml steriler vorreduzierter 0,9 %iger Kochsalzlösung kombiniert, um den Infusionscocktail zu bilden. Die 200-ml-Bakteriensuspension wird dann mit einem ultraflachen Gastro-Duodenoskop von Olympus in den Dünndarm verabreicht. Der Weg über den Dünndarm wird gewählt, um die potenziell schädlichen Wirkungen der Magensäure auf das Überleben des Inokulums zu vermeiden und den Rückfluss des in den Magen verabreichten Volumens zu verhindern oder zu reduzieren. Die Probanden werden dann bis zu 12 Monate lang weiterverfolgt.

Transplantationsverfahren: Die Patienten werden mit 4 Tagen oralem Vancomycin (125 mg alle 6 Stunden) vorbehandelt, um die C. difficile-Belastung zu reduzieren, wobei die letzte Dosis um 18:00 Uhr am Abend vor dem Eingriff (etwa 14-16 Stunden vor dem Eingriff) verabreicht wird FMT). Am Abend vor der FMT und erneut am Morgen des Eingriffs erhalten die Patienten 20 mg Omeprazol zum Einnehmen. Am Morgen des Eingriffs wird ein "superschlankes" Gastroskop mit einem Durchmesser von 5,5 mm per Mund in den Dünndarm des Patienten eingeführt, wobei versucht wird, die Spitze am oder hinter dem Treitz-Band zu platzieren. 200 ml der Bakteriensuspension werden über einen Katheter, der durch den Biopsiekanal des Endoskops eingeführt wird, in den Dünndarm instilliert und mit 25 ml steriler vorreduzierter 0,9 %iger Kochsalzlösung gespült. Nach Entfernung des Endoskops und Genesung dürfen die Patienten ihre normale Ernährung und körperliche Aktivitäten wieder aufnehmen.

Die Probanden werden 14 Tage lang täglich im Krankenhaus gesehen (und nach ihrer Entlassung täglich telefonisch kontaktiert). Die Probanden werden dann nach 30 Tagen und monatlich für 3 Monate kontaktiert, dann alle 3 Monate für ein Jahr. Die Symptome werden bei jedem Kontakt mit einem Standardfragebogen erfasst. Laboruntersuchungen einschließlich CBC mit Differenzial-, Basisstoffwechsel-Panel und Albumin werden nach 3 Tagen, nach 10 Tagen und nach 30 plus oder minus 7 Tagen durchgeführt.

Die Ergebnisse des klinischen Ergebnisses werden mit der Bewertung der Wirkung der Therapie auf das fäkale Mikrobiom kombiniert. Bis zu 1 Jahr oder bis zum nachgewiesenen Rückfall werden regelmäßig Stuhlproben entnommen. Stuhlproben und Rektalabstriche werden täglich während des anfänglichen Studienzeitraums bis zur Entlassung aus dem Krankenhaus oder 14 Tage und dann Stuhlproben nach 30 Tagen und in 3-Monats-Intervallen für ein Jahr erhalten. Nach der Entlassung aus dem Krankenhaus werden die Proben mit Kühlakkus per Federal Express ins Labor geschickt. Dies sollte es uns ermöglichen, die Wirkung der Therapie auf C. difficile sowie auf das Schicksal der verabreichten Bakterien (für die das gesamte Genom sequenziert und veröffentlicht wurde) im Detail zu untersuchen. Details siehe Anhänge).