Zdefiniowana transplantacja mikroflory kałowej w przypadku biegunki wywołanej przez Clostridium Difficile

To badanie obejmie początkowo 12 osób. W oparciu o relatywnie duże doświadczenie z FMT zgłoszone do tej pory, przewidujemy szybką i trwałą odpowiedź, określoną przez ustanie gorączki, leukocytozy i biegunki oraz utratę dyskomfortu w jamie brzusznej u >8 (80%) pacjentów. Jeśli takiej odpowiedzi nie zaobserwowano u >3 z pierwszych 6 leczonych pacjentów, ponownie ocenimy skład mieszaniny FMT i/lub rozważymy, czy należy podać więcej niż jedno inokulum. Jeśli zostanie osiągnięty wskaźnik sukcesu wynoszący 80% lub więcej, obserwacja kliniczna i badania mikrobiomu będą kontynuowane łącznie przez 12 miesięcy. W tym czasie planujemy pozyskanie nowych zgód na przetestowanie innych metod dostarczania inokulum (np. przez rurkę NG lub podawanie doustne w roztworze buforowym). W przeciwieństwie do stosowania surowego kału o nieznanym i zmiennym składzie, inokulum jest definiowane i hodowane w warunkach beztlenowych na określonych pożywkach. Przed podaniem terapii inokulum zostanie zbadane za pomocą szczepu Grama, a następnie będzie hodowane w celu upewnienia się, że zawiera użyte organizmy. Uważa się, że prawdopodobieństwo zanieczyszczenia jest bardzo mało prawdopodobne, a zanieczyszczenie nieznanym patogenem jest zasadniczo niemożliwe. Jako dodatkowy środek bezpieczeństwa inokulum podaje się do przewodu pokarmowego przeznaczonego do kontaktu z żywnością i innymi niesterylnymi materiałami.

Oczekujemy szybkiej i trwałej odpowiedzi, określonej przez ustanie gorączki, leukocytozy i biegunki oraz utratę dyskomfortu w jamie brzusznej u >8 (80%) pacjentów. Jeśli takiej odpowiedzi nie zaobserwowano u >3 z pierwszych 6 leczonych pacjentów, ponownie ocenimy skład mieszaniny FMT i/lub rozważymy, czy należy podać więcej niż jedno inokulum. Jeśli zostanie osiągnięty 80% wskaźnik sukcesu, obserwacja kliniczna i badania mikrobiomu będą kontynuowane łącznie przez 12 miesięcy.

Kryteria przyjęcia:

Tylko pacjenci z VA będą kwalifikować się do badania, jeśli mają potwierdzone rozpoznanie CDI, leczonych przez 10-14 dni zalecanymi dawkami metronidazolu lub wankomycyny i albo nie zareagowali na leczenie, albo zareagowali i nawrócili w ciągu 4 tygodni od koniec leczenia. Rozpoznanie zostanie uznane za potwierdzone przez obecność biegunki (>3 nieformowane stolce w ciągu 24 godzin przez 2 kolejne dni) i dyskomfort w jamie brzusznej. Obecność gorączki, leukocytozy i stężenia albumin w surowicy <3 gm/dL zostanie odnotowana, ale nie będzie to konieczne do postawienia diagnozy. Pacjenci zostaną włączeni po wyrażeniu przez nich świadomej zgody i podpisaniu odpowiedniego formularza zgody zatwierdzonego przez Baylor IRB.

Procedura: Pacjenci z potwierdzonym nawracającym CDI w MEDVAMC zostaną poproszeni o udział. Dokumentacja zdrowotna wszystkich wprowadzonych pacjentów z VA zostanie oznaczona, że ​​są oni włączeni do badania badawczego. Przypuszczamy, że szczepy opisane przez Tvede i Rask-Madsen były izolatami klinicznymi, ponieważ nie ma wzmianki o tych szczepach w późniejszych publikacjach i nie są one dostępne w żadnym z publicznych repozytoriów szczepów, takich jak ATCC, DSMZ lub CCUG. Zamiast tych specyficznych szczepów użyjemy następujących w pełni zsekwencjonowanych szczepów, pierwotnie wyizolowanych z ludzkich odchodów i zakupionych w ATCC: Bacteroides ovatus ATCC 8483, Bacteroides vulgatus ATCC 8482 i Bacteroides thetaiotaomicron ATCC 29148. Hodowle pierwotne będą rosły zgodnie z procedurami GLP (SOP w załączeniu) na wstępnie zredukowanym beztlenowym agarze z krwią ANABA (Remel, Lenexa, KS), następnie hodowle bulionowe każdego szczepu będą hodowane beztlenowo w temperaturze 37°C przez 48 godzin w średnio siekane mięso, które będzie robione w domu. Bakterie zostaną zebrane przez wirowanie przy 1600 x g przez 10 minut i ponownie zawieszone w 5 ml sterylnej, wstępnie zredukowanej 0,9% soli fizjologicznej, stosując standardy Macfarlane'a do oszacowania stężeń bakterii, tak aby uzyskać końcowe stężenie 10 do potęgi 8 do 9 cfu/ml. Porcje (0,1 ml) zostaną pobrane w celu seryjnego rozcieńczenia i wysiania oraz inkubacji beztlenowej w temperaturze 37°C na wstępnie zredukowanych płytkach ANABA w celu określenia rzeczywistych stężeń bakterii. Dwa ml każdej z trzech zawiesin soli fizjologicznej zostaną połączone z 194 ml sterylnej, wstępnie zredukowanej soli fizjologicznej o stężeniu 0,9% w celu utworzenia koktajlu infuzyjnego. Następnie 200 ml zawiesiny bakteryjnej zostanie podane do jelita cienkiego za pomocą ultracienkiego gastro-duodenoskopu firmy Olympus. Drogę jelitową wybiera się w celu uniknięcia potencjalnie szkodliwego wpływu kwasu żołądkowego na przeżywalność inokulum oraz w celu zapobieżenia lub zmniejszenia refluksu objętości podanej do żołądka. Osoby badane będą następnie obserwowane przez okres do 12 miesięcy.

Procedura przeszczepu: Pacjenci będą wstępnie leczeni doustną wankomycyną przez 4 dni (125 mg co 6 godzin) w celu zmniejszenia obciążenia C. difficile, przy czym ostateczna dawka zostanie podana o godzinie 18:00 wieczorem przed zabiegiem (około 14-16 godzin przed zabiegiem). FMT). Wieczorem przed FMT i ponownie rano w dniu zabiegu pacjenci otrzymają doustnie 20 mg omeprazolu. Rano w dniu zabiegu „super cienki” gastroskop o średnicy 5,5 mm zostanie wprowadzony przez usta do jelita cienkiego pacjenta z próbą umieszczenia końcówki na więzadle Treitza lub poza nim. Dwieście ml zawiesiny bakteryjnej zostanie wkroplone do jelita cienkiego przez cewnik wprowadzony przez kanał biopsyjny endoskopu i przepłukane 25 ml sterylnej wstępnie zredukowanej 0,9% soli fizjologicznej. Po usunięciu endoskopu, po wyzdrowieniu, pacjenci będą mogli wrócić do normalnej diety i aktywności fizycznej.

Pacjenci będą widziani codziennie podczas pobytu w szpitalu (i codziennie będą kontaktowani telefonicznie po wypisaniu) przez 14 dni. Pacjenci będą następnie kontaktować się po 30 dniach i co miesiąc przez 3 miesiące, a następnie co 3 miesiące przez jeden rok. Objawy będą rejestrowane przy każdym kontakcie za pomocą standardowego kwestionariusza. Badania laboratoryjne obejmujące morfologię krwi z różnicowaniem, podstawowy panel metaboliczny i albuminy zostaną wykonane w 3 dniu, w 10 dniu iw wieku 30 plus minus 7 dni.

Wyniki kliniczne zostaną połączone z oceną wpływu terapii na mikrobiom kałowy. Próbka kału będzie pobierana regularnie przez okres do 1 roku lub do udowodnionego nawrotu choroby. Próbki kału i wymazy z odbytu będą pobierane codziennie w początkowym okresie badania do wypisu ze szpitala lub 14 dni, a następnie próbki kału po 30 dniach iw odstępach 3-miesięcznych przez jeden rok. Po wypisaniu ze szpitala próbki zostaną wysłane do laboratorium za pomocą zimnych okładów przez Federal Express. Powinno to pozwolić na szczegółowe zbadanie wpływu terapii na C. difficile, a także na losy podawanych bakterii (dla których cały genom został zsekwencjonowany i opublikowany). szczegóły w załącznikach).