Trapianto di microbiota fecale definito per la diarrea da Clostridium Difficile

Questo studio inizialmente arruolerà 12 soggetti. Sulla base dell'esperienza relativamente ampia con FMT riportata fino ad oggi, prevediamo una risposta rapida e sostenuta determinata dalla cessazione della febbre, leucocitosi e diarrea e una perdita del disagio addominale in > 8 (80%) dei soggetti. Se tale risposta non viene osservata in >3 dei primi 6 pazienti trattati, rivaluteremo la composizione della miscela FMT e/o valuteremo se debba essere somministrato più di un inoculo. Se viene raggiunto il tasso di successo dell'80% o superiore, il follow-up clinico e gli studi sul microbioma continueranno per un totale di 12 mesi. Durante quel periodo, vorremmo pianificare di ottenere nuove approvazioni per testare altri metodi di consegna dell'inoculo (ad esempio, tramite tubo NG o somministrazione orale in una soluzione tamponata). Contrariamente all'uso di feci grezze di composizione sconosciuta e variabile, l'inoculo è definito e coltivato in condizioni anerobiche con terreni definiti. Prima della somministrazione della terapia l'inoculo sarà esaminato con ceppo di grammo e quindi coltivato per assicurarsi che contenga gli organismi utilizzati. Si ritiene che la possibilità di un contaminante sia molto improbabile e che la contaminazione con un agente patogeno sconosciuto sia praticamente impossibile. Come ulteriore misura di sicurezza, l'inoculo viene immesso nel tratto gastrointestinale destinato al cibo e ad altri materiali non sterili.

Prevediamo una risposta pronta e sostenuta, come determinato dalla cessazione della febbre, leucocitosi e diarrea e una perdita del disagio addominale in > 8 (80%) dei soggetti. Se tale risposta non viene osservata in >3 dei primi 6 pazienti trattati, rivaluteremo la composizione della miscela FMT e/o valuteremo se debba essere somministrato più di un inoculo. Se viene raggiunto il tasso di successo dell'80%, il follow-up clinico e gli studi sul microbioma continueranno per un totale di 12 mesi.

Criterio di inclusione:

Solo i pazienti VA saranno eleggibili per lo studio se hanno avuto una diagnosi confermata di CDI che è stata trattata per 10-14 giorni con le dosi raccomandate di metronidazolo o vancomicina e non ha risposto, o ha risposto e ha avuto una ricaduta entro 4 settimane dalla la fine del trattamento. La diagnosi sarà considerata confermata dalla presenza di diarrea (>3 feci non formate in un periodo di 24 ore per 2 giorni consecutivi) e disturbi addominali. La presenza di febbre, leucocitosi e albumina sierica < 3 gm/dL sarà registrata ma non sarà necessaria per la diagnosi. I pazienti saranno inclusi dopo aver dato il consenso informato e firmato il modulo di consenso appropriato che è stato approvato dal Baylor IRB.

Procedura: i pazienti con comprovata CDI ricorrente presso il MEDVAMC saranno invitati a partecipare. Le cartelle cliniche di tutti i pazienti VA inseriti verranno contrassegnati come arruolati in uno studio di ricerca. Presumiamo che i ceppi descritti da Tvede e Rask-Madsen fossero isolati clinici poiché non vi è alcuna registrazione di questi ceppi in pubblicazioni successive e non sono disponibili da nessuno dei repository pubblici di ceppi come ATCC, DSMZ o CCUG. Al posto di questi ceppi specifici, utilizzeremo i seguenti ceppi di tipo completamente sequenziato, originariamente isolati da feci umane e acquistati da ATCC: Bacteroides ovatus ATCC 8483, Bacteroides vulgatus ATCC 8482 e Bacteroides thetaiotaomicron ATCC 29148. Le colture primarie saranno coltivate secondo le procedure GLP (SOP allegato) su agar sangue anaerobico pre-ridotto ANABA (Remel, Lenexa, KS), quindi colture in brodo di ciascun ceppo saranno coltivate anaerobicamente a 37°C per 48 ore in terreno pre-ridotto mezzo di carne tritata che sarà fatta in casa. I batteri saranno raccolti mediante centrifugazione a 1.600 x g per 10 minuti e risospesi in 5 mL di soluzione salina sterile pre-ridotta allo 0,9%, utilizzando gli standard Macfarlane per stimare le concentrazioni batteriche per raggiungere una concentrazione finale di 10 alla potenza da 8 a 9 cfu/mL. Le aliquote (0,1 mL) saranno prelevate per la diluizione seriale e la piastratura e l'incubazione anaerobica a 37°C su piastre ANABA pre-ridotte per determinare le effettive concentrazioni batteriche. Due mL di ciascuna delle tre sospensioni saline saranno combinati con 194 mL di soluzione salina sterile pre-ridotta allo 0,9% per formare il cocktail di infusione. La sospensione batterica da 200 ml verrà quindi somministrata nell'intestino tenue utilizzando un gastroduodenoscopio ultrasottile Olympus. La via dell'intestino tenue viene scelta per evitare gli effetti potenzialmente deleteri dell'acido gastrico sulla sopravvivenza dell'inoculo e per prevenire o ridurre il reflusso del volume somministrato nello stomaco. I soggetti saranno quindi seguiti per un massimo di 12 mesi.

Procedura di trapianto: i pazienti saranno pretrattati con 4 giorni di vancomicina orale (125 mg ogni 6 ore) per ridurre il carico di C. difficile, con la dose finale somministrata alle 18:00 la sera prima della procedura (circa 14-16 ore prima FTM). La sera prima dell'FMT e di nuovo la mattina della procedura, i pazienti riceveranno 20 mg di omeprazolo per via orale. La mattina della procedura, un gastroscopio "super sottile" di 5,5 mm di diametro verrà passato per bocca nell'intestino tenue del paziente con un tentativo di posizionare la punta in corrispondenza o oltre il legamento di Treitz. Duecento ml della sospensione batterica verranno instillati nell'intestino tenue tramite un catetere introdotto attraverso il canale bioptico dell'endoscopio e il lavaggio con 25 ml di soluzione salina sterile pre-ridotta allo 0,9%. Dopo la rimozione dell'endoscopio, dopo il recupero, i pazienti potranno riprendere una normale dieta e attività fisica.

I soggetti saranno visti quotidianamente quando sono in ospedale (e contattati quotidianamente per telefono dopo essere stati dimessi) per 14 giorni. I soggetti verranno poi contattati a 30 giorni e mensilmente per 3 mesi, poi ogni 3 mesi per un anno. I sintomi verranno registrati ad ogni contatto utilizzando un questionario standard. Gli esami di laboratorio comprendenti emocromo con differenziale, pannello metabolico basico e albumina saranno ottenuti a 3 giorni, a 10 giorni ea 30 più o meno 7 giorni.

I risultati dell'esito clinico saranno combinati con la valutazione dell'effetto della terapia sul microbioma fecale. Il campione di feci verrà raccolto regolarmente fino a 1 anno o fino a provata ricaduta. Campioni di feci e tamponi rettali saranno ottenuti giornalmente durante il periodo iniziale dello studio fino alla dimissione dall'ospedale o 14 giorni e poi campioni di feci a 30 giorni ea intervalli di 3 mesi per un anno. Dopo la dimissione dall'ospedale, i campioni verranno inviati al laboratorio utilizzando impacchi freddi di Federal Express. Questo dovrebbe permetterci di esaminare in dettaglio l'effetto della terapia sul C. difficile così come sul destino dei batteri somministrati (per i quali l'intero genoma è stato sequenziato e pubblicato). per i dettagli vedere gli allegati).