Adjuvant behandling hos eldre pasienter med periodontitt gjennom administrering av et tilskudd rikt på oleuropein fra olivenbladet (OLIVAGING)

For å beregne prøvestørrelsen, kan du bruke GRANMO-verktøyet (https://www.imim.es/ofertadeserveis/software-public/granmo/) har blitt brukt, tatt i betraktning en alfarisiko på 0,05, en bilateral kontrast, en betarisiko på 0,20, et standardavvik for forskjeller på 2,5, en minimumsforskjell på 1 mm reduksjon i sonderingsdybde som skal oppdages mellom baseline og slutten av studien, og en anslått andel tap på 20 % sporing.

Behandlinger Alle pasienter vil motta en fullstendig muntlig undersøkelse ved baseline og etter 4 måneder etter behandlingen. Initial terapi vil bli utført hos alle pasienter og vil bestå av helmunnskalering og rotplanlegging for hånd og med ultralydinstrumentering etter behov. Denne behandlingen vil bli fullført med munnhygieneinstruksjoner. Alle innledende terapiprosedyrer vil bli utført av samme periodontist.

Etter periodontal behandling vil påmeldte frivillige bli tilfeldig tildelt en av to grupper av en annen periodontist. Kontrollgruppen vil motta harde gelatinkapsler som inneholder placebo (bare hjelpestoffene), mens forsøksgruppen vil motta de samme harde gelatinkapslene, men som inneholder 200 mg av et olivenbladekstrakt. Randomiseringen vil skje ved bruk av tilfeldige talldiagrammer (ved myntkast), som vil bli utført ved første fags påmelding, og neste fag vil bli tildelt den andre gruppen basert på det første fagets oppgave. Både placebo og kapsler vil bli dispensert av samme person, og forsøkspersonene vil få muntlige og skriftlige instruksjoner om bruken. Etter hvert som frivillige vil bli registrert, vil de bli tildelt sekvensielle studienumre og forsynt med kapslene sine, tilstrekkelig for én måned. Fakultetet vil komme til fakultetet hver 4. uke i løpet av forsøket for å fylle på kapslene. Kapselinntaket vil vare i totalt 4 måneder. Gjenværende medisiner vil bli kontrollert for samsvar. Kapsler vil bli tilberedt ved CIDAF (Centro de Investigación Sobre Alimentos Funcionales) ved den teknologiske helseparken i Granada. Olivenekstraktet vil bli hentet fra Natac-selskapet (Madrid, España).

Prøveinnsamling og analyser All datainnsamling og -bestemmelser vil bli utført ved baseline og etter 4 måneder.

A) Muntlige undersøkelser Periodontale kliniske målinger vil inkludere tilstedeværelse eller fravær av supragingival dental plakk og gingival blødning ved sondering (BOP), samt periodontal sonderingsdybde (PPD) og resesjon av gingivalmargin (GM). Parametre vil bli målt på seks steder (mesiobukkal, bukkal, distobukkal, distolingual, lingual og mesiolingual) på hver tann ved hjelp av en kalibrert periodontal sonde (Hu-Friedy®, Chicago, IL, USA), 15 mm i lengde og 0,35 mm mm i diameter. Klinisk tilknytningsnivå (CAL) vil bli beregnet ved å legge til lavkonjunktur til PDD. Antall gjenværende tenner vil også bli registrert. O´Learys plakkindeks, Van der Veldens blødningsindeks vil også bli beregnet. Pasienter med BOP-sted <10 %, PPD ≤3 mm, erytem og fravær av ødem vil betraktes som periodontalfriske personer.

B) Sosiodemografisk datainnsamling

1. Grunnleggende sosiodemografiske data: disse vil inkludere alder, kjønn, utdanningsår.
2. Økonomisk status: deltakerne vil bli bedt om å rapportere gjennomsnittlig inntekt i løpet av de foregående tre årene ved å bruke en firepunktsskala (lav, utilstrekkelig til å dekke daglige utgifter = 1, middels, prøver hardt å dekke daglige utgifter = 2, god, tilstrekkelig til å dekke daglige utgifter = 3, veldig bra, veldig tilstrekkelig til å dekke daglige utgifter = 4).
3. Røykestatus: nåværende røykere vil bli definert som røykere på tidspunktet for intervjuet. Tidligere røykere vil bli definert som de som tidligere har røykt, men ikke har gjort det på ett år eller mer. De resterende deltakerne vil bli definert som tilfeldige eller ikke-pågående røykere.
4. Fysisk aktivitetsnivå: det vil bli evaluert i metabolske ekvivalenter (MET)-minutter per uke, ved å bruke det selvrapporterte International Physical Activity Questionnaire (IPAQ). De som rapporterte minst 3 MET-minutter per uke vil bli klassifisert som fysisk aktive (minimalt aktive - eller "helsefremmende fysisk aktivitet (HEPA) aktiv"). Alle andre vil bli definert som fysisk inaktive. Videre vil ukentlig frekvens av fysisk aktivitet bli registrert.
5. Forrige måneds depresjonssymptomer: de vil bli vurdert ved hjelp av en validert forkortet, selvrapportert geriatrisk depresjonsskala (GDS) (område 0-20). En GDS-skåre mellom 0 og 4 vil bli brukt for å indikere ingen depresjon, mens skårer på 5-10 og N 10 vil indikere henholdsvis mild og alvorlig depresjon.
6. Helsebruk: Tilstedeværelsen av private legekontorer, offentlige eller private helsesentre eller sykehus i bostedsområdet, samt årlig antall besøk for regelmessig kontroll av helsetilstanden, vil bli registrert.
7. Voksnes sosiale deltakelse: Den ukentlige frekvensen av deres sosiale aktiviteter med familien, deres venner, samt deres årlige frekvens av utflukter vil bli registrert for dette formålet.

C) Antropometriske egenskaper og blodtrykk

1. Vekt, høyde og midjeomkrets vil bli målt. BMI og midje-til-hofte-forhold vil bli beregnet. Overvekt vil bli definert som BMI mellom 25,0 og 29,9 kg/m2, mens fedme vil defineres som BMI >29,9 kg/m2.
2. Blodtrykk: Pasienter med blodtrykksnivåer >140/90 mmHg eller som bruker antihypertensive medisiner vil bli klassifisert som hypertensive.

D) Kostholdsvanevurdering Evalueringen av kostvaner vil være basert på et semikvantitativt spørreskjema for mat-frekvens (FFQ). FFQ vil bli brukt til å evaluere graden av overholdelse av middelhavsdietten, MedDietScore (teoretisk område 0-55) ble brukt.

E) Blodprøvetaking og analyse Blodprøver (16 mL) vil bli tatt ved underarmsvenepunktur etter 12 timers faste over natten, uten stase i sittende stilling. Fullblodsprøver vil bli brukt til hematologiske evalueringer. Mesteparten av blodet vil bli trukket inn i EDTA-holdige rør (1 mg/ml) og plasma vil bli isolert ved sentrifugering ved 1000 xg, i 10 minutter og delt opp i alikvoter på 250 μl for umiddelbar analyse eller for lagring ved -80 °C . Blod vil også bli brukt for å oppnå isolerte mononukleære blodceller (BMC) for andre tilleggsanalyser. Alikvoter som inneholder begge, plasma eller BMC, vil bli bevart ved -80ºC frem til analyser.

Blodanalyser vil være som følger:

1. Biokjemi-evalueringer: fastende blodlipidnivåer (inkludert lipoprotein-kolesterol med høy tetthet (HDL), lipoprotein-kolesterol med lav tetthet (LDL), direkte LDL-kolesterol, svært lav tetthet-kolesterol (VLDL) og triglyserider (TG), plasmaglukose , høysensitivt C-reaktivt protein, LPa, kortisol, fibrinogen og homocysteinnivåer vil bli bestemt i plasma ved hjelp av en automatisk analysator. Pasienter som viser fastende blodsukker > 126 mg/dL, bruker antidiabetiske medisiner eller med en tidligere diagnose av diabetes vil bli bestemt som type 2 diabetes mellitus i henhold til American Diabetes Associations diagnostiske kriterier. Hyperkolesterolemi vil bli definert som totale serumkolesterolnivåer >200 mg/dL eller bruk av lipidsenkende midler, i henhold til retningslinjer fra National Cholesterol Education Program Adult Treatment Panel III.
2. Hematologisk studie: hemogram og blodcelleprofil i fullblodsprøver.
3. Sirkulerende pro-inflammatoriske markører: sirkulerende nivåer av flere inflammatoriske cytokiner inkludert IL-1β og IL-18 vil bli analysert med et kommersielt multiplekssett (Cytokine Panel 1B 25plex, Thermo Fisher Scientific). I tillegg vil proteinnivåer av aktiv caspase-1 og genuttrykk av Nlrp3 (CIAS1) og caspase-1 bli bestemt i isolerte PBMC-er ved henholdsvis Western-Blotting og RT-PCR for å evaluere inflammasomaktivitet.
4. Autofagi-markører: MAP-LC3, ATG12, p62, TFEB, Beclin-1 og B og D katepsinnivåer vil bli bestemt ved Western-Blotting i isolerte PBMC-proteinisolater. Beclin-1, y Maplc3 genuttrykk vil bli bestemt ved RT-PCR i isolerte PBMCer ved bruk av beta-aktin som husholdergen.
5. Oksidative stressmarkører og antioksidantkapasitet: skade på lipider vil bli analysert gjennom bestemmelse i urin av 15-F2 isoprostaner, skade på proteiner ved bestemmelse av karbonylproteiner i plasma68 og skade på DNA gjennom bestemmelse i urin av 8-hydroksyguanosin (8OHdG) . I tillegg vil bestemmelse av in situ redokstilstand bli utført hos forsøkspersonene ved klinikken ved bruk av en bloddråpe fra en finger. Det vil bli utført gjennom Redoxsys-systemet (Aytu BioScience, Inc., Englewood, USA), som også måler antioksidantkapasiteten til prøven. Dette er et nytt system som måler med en pålitelighet før ikke tilgjengelig den totale redoksladningen i biologiske prøver så vel som antioksidantkapasiteten til dem.
6. Metabolomisk studie: for å utføre denne analysen, blir metabolittene til de forskjellige prøvene ekstrahert først. Deretter separeres molekylene som er tilstede i det metanoliske ekstraktet ved kromatografi. Eluatet overvåkes i et ESI-Q-TOF-MS / MS-system med elektrospray98. Analysen av resultatene vil bli utført i samarbeid med Dr. Reinald Pamplona, ​​fra University of Lleida, som vi har samarbeidet med om denne problemstillingen i årevis og som vi deler en forskningslinje og publikasjoner om metabolomikk med.

F) Studie av periodontal mikrobiota. Subgingivale plakkprøver vil bli samlet inn fra de tre stedene med høyest PPD ved å sette spissen av et filterpapir på den periodontale lommen i løpet av 30 s etter isolering av sonen.

Subgingivale plakkprøver samlet inn i tørre papirer vil bli analysert ved PCR for å evaluere tilstedeværelsen av kjente peridontopatogener: Phorphyromonas gingivalis, Tannerella forsythia, Treponema denticola, Aggregatibacter actinomycetemcomitans, Prevotella intermedia, Fusobacterium nucleatum. Mikrobiotastudiene vil bli utført ved bruk av 16S rDNA massesekvenseringsteknikker. Sekvensering og bioinformatisk analyse vil bli utført av Integrated Microbiome Resource, fra University of Dalhousie, i Canada.

G) Bestemmelser i urin.

Fastende urin vil bli samlet og følgende bestemmelser vil bli utført:

1. Oksidative skademarkører: 8-hydroksy-2-deoksyguanosin og totalt F2-isoprostaner vil bli målt i urin ved en konkurrerende enzymimmunanalyse. Resultatene vil bli normalisert til urinkreatinin.
2. Oleuropein-metabolitterkonsentrasjon: de vil bli kvantifisert ved LC-ESI-MS/MS som i tidligere studier.

H) Vellykket aldringsindeksberegning Vellykket aldringsindeks (SAI), med potensielle skårer fra 0 til 10, vil bli brukt for å evaluere aldring for studiedeltakere. Den fullstendige indeksen omfatter utdanning, økonomisk status, fysisk aktivitet, BMI, GDS-score, deltakelse i sosiale aktiviteter med venner, med familie, årlige utflukter, CVD-risikofaktorer og overholdelsesnivå for middelhavskost for å utvikle indeksen. En kumulativ variabel (område 0-4) som indikerer den totale belastningen av risikofaktorer for klassisk kardiovaskulær sykdom (dvs. fedme og historie med hypertensjon, diabetes og hyperkolesterolemi) vil bli utviklet (deltakere som ikke har noen av de nevnte risikofaktorene vil få poengsum 0, etter å ha én faktor score 1 osv.).

I) Suksesskriterier for intervensjon For å vurdere suksessen til intervensjonen med oleuropein, vil reduksjonen på 1 mm eller mer i sonderingsdybden (PD) bli tatt som hovedvariabel. I tillegg, og som sekundære suksesskriterier, vil det tas en reduksjon på 1 mm eller mer i festenivået, samt en reduksjon på mer enn 20 % i gingivalblødning ved sondering.

J) Statistisk analyse Det vil bli gjennomført en beskrivende analyse av hovedvariablene som er studert. For normale kvantitative variabler vil gjennomsnitt og standardavvik beregnes, eller median og persentil ved ikke-normalitet. Kvalitative variabler vil bli uttrykt ved bruk av absolutte og relative frekvenser. Normaliteten til variablene vil bli kontrollert med Kolmogorov-Smirnov-testen for å bestemme behovet for å utføre transformasjoner (logaritmiske og andre) før sammenligningsstudiene utføres. For å studere effekten av behandling på de ulike variablene i samme gruppe, vil Studentens t-test for relaterte prøver benyttes. For å gjennomføre komparative analyser på samme eksperimentelle tidspunkt mellom begge forsøksgruppene, vil Studentens t-test for uavhengige prøver benyttes.