Traitement d'appoint chez les patients âgés atteints de parodontite par l'administration d'un supplément riche en oleuropéine de la feuille d'olivier (OLIVAGING)

Pour calculer la taille de l'échantillon, l'outil GRANMO (https://www.imim.es/ofertadeserveis/software-public/granmo/) a été utilisé, en considérant un risque alpha de 0,05, un contraste bilatéral, un risque bêta de 0,20, un écart type des différences de 2,5, une différence minimale de 1 mm de réduction de la profondeur de sondage à détecter entre le début et la fin de l'étude, et une proportion prévue de perte de suivi de 20 %.

Traitements Tous les patients recevront un examen buccal complet au départ et 4 mois après le traitement. Le traitement initial sera effectué chez tous les patients et consistera en un détartrage de la bouche complète et un surfaçage radiculaire à la main et avec des instruments à ultrasons si nécessaire. Ce traitement sera complété par des consignes d'hygiène bucco-dentaire. Toutes les procédures thérapeutiques initiales seront effectuées par le même parodontiste.

Après le traitement parodontal, les volontaires inscrits seront assignés au hasard à l'un des deux groupes par un deuxième parodontiste. Le groupe témoin recevra des gélules de gélatine dure contenant un placebo (uniquement les excipients), tandis que le groupe expérimental recevra les mêmes gélules de gélatine dure mais contenant 200 mg d'un extrait de feuille d'olivier. La randomisation se fera à l'aide de tableaux de nombres aléatoires (par tirage au sort), qui seront effectués au moment de l'inscription du premier sujet, et le sujet suivant sera attribué à l'autre groupe en fonction de l'affectation du premier sujet. Le placebo et les gélules seront distribués par la même personne, et les sujets recevront des instructions verbales et écrites sur son utilisation. Au fur et à mesure que les volontaires seront inscrits, ils se verront attribuer des numéros d'étude séquentiels et recevront leurs capsules, suffisantes pour un mois. Les sujets viendront à la Faculté toutes les 4 semaines au cours de l'essai pour reconstituer leurs capsules. La prise de capsules durera au total 4 mois. Les médicaments restants seront vérifiés pour leur conformité. Les capsules seront préparées au CIDAF (Centro de Investigación Sobre Alimentos Funcionales) du Parc Technologique de Santé de Grenade. L'extrait d'olive sera obtenu auprès de la société Natac (Madrid, España).

Collecte et analyses d'échantillons Toutes les collectes de données et les déterminations seront effectuées au départ et après 4 mois.

A) Examens buccaux Les mesures cliniques parodontales incluront la présence ou l'absence de plaque dentaire supragingivale et de saignement gingival au sondage (BOP), ainsi que la profondeur de sondage parodontal (PPD) et la récession de la marge gingivale (GM). Les paramètres seront mesurés sur six sites (mésiobuccal, buccal, distobuccal, distolingual, lingual et mésiolingual) sur chaque dent au moyen d'une sonde parodontale calibrée (Hu-Friedy®, Chicago, IL, USA), de 15 mm de longueur et de 0,35 mm de diamètre. Le niveau d'attachement clinique (CAL) sera calculé en ajoutant la récession au TED. Le nombre de dents restantes sera également enregistré. L'indice de plaque d'O'Leary, l'indice de saignement de Van der Velden seront également calculés. Les patients avec un site BOP < 10 %, une PPD ≤ 3 mm, un érythème et une absence d'œdème seront considérés comme des sujets en bonne santé parodontale.

B) Collecte de données sociodémographiques

1. Données sociodémographiques de base : elles comprendront l'âge, le sexe, les années d'études.
2. Situation financière : les participants seront invités à déclarer leur revenu moyen au cours des trois années précédentes à l'aide d'une échelle en quatre points (faible, insuffisant pour couvrir les dépenses quotidiennes = 1, moyen, s'efforçant de couvrir les dépenses quotidiennes = 2, bon, suffisant pour couvrir dépenses quotidiennes = 3, très bien, très suffisant pour couvrir les dépenses quotidiennes = 4).
3. Statut tabagique : les fumeurs actuels seront définis comme fumeurs au moment de l'entretien. Les anciens fumeurs seront définis comme ceux qui avaient déjà fumé, mais ne l'avaient pas fait depuis un an ou plus. Les participants restants seront définis comme des fumeurs occasionnels ou non actuels.
4. Niveau d'activité physique : il sera évalué en minutes d'équivalent métabolique (MET) par semaine, à l'aide du questionnaire international sur l'activité physique (IPAQ) autodéclaré. Ceux qui ont déclaré au moins 3 MET-minutes par semaine seront classés comme physiquement actifs (activité minimalement active - ou "activité physique améliorant la santé (HEPA) active"). Tous les autres seront définis comme physiquement inactifs. De plus, la fréquence hebdomadaire de l'activité physique sera enregistrée.
5. Symptômes de dépression du mois dernier : ils seront évalués à l'aide d'une échelle de dépression gériatrique (GDS) abrégée validée et autodéclarée (gamme de 0 à 20). Un score GDS entre 0 et 4 sera utilisé pour indiquer l'absence de dépression, tandis que les scores de 5-10 et N 10 indiqueront respectivement une dépression légère et sévère.
6. Utilisation des soins : la présence de cabinets médicaux privés, de centres de santé publics ou privés ou d'hôpitaux dans la zone de résidence, ainsi que le nombre annuel de visites pour un contrôle régulier de l'état de santé, seront enregistrés.
7. Participation sociale de l'adulte : la fréquence hebdomadaire de ses activités sociales avec sa famille, ses amis ainsi que sa fréquence annuelle d'excursions seront enregistrées à cette fin.

C) Caractéristiques anthropométriques et tension artérielle

1. Le poids, la taille et le tour de taille seront mesurés. L'IMC et le rapport taille-hanche seront calculés. Le surpoids sera défini comme un IMC compris entre 25,0 et 29,9 kg/m2, tandis que l'obésité sera définie comme un IMC > 29,9 kg/m2.
2. Tension artérielle : les patients dont la tension artérielle est > 140/90 mmHg ou qui prennent des médicaments antihypertenseurs seront classés comme hypertendus.

D) Évaluation des habitudes alimentaires L'évaluation des habitudes alimentaires sera basée sur un questionnaire semi-quantitatif de fréquence alimentaire (FFQ). Le FFQ sera utilisé pour évaluer le niveau d'adhésion au régime méditerranéen, le MedDietScore (fourchette théorique 0-55) a été utilisé.

E) Prélèvement et analyse de sang Des échantillons de sang (16 ml) seront prélevés par ponction veineuse de l'avant-bras après 12 h de jeûne nocturne, sans stase en position assise. Des échantillons de sang total seront utilisés pour les évaluations hématologiques. La majeure partie du sang sera prélevée dans des tubes contenant de l'EDTA (1 mg/ml) et le plasma sera isolé par centrifugation à 1000 xg, pendant 10 min et divisé en aliquotes de 250 μl pour analyse immédiate ou pour stockage à -80 °C . Le sang sera également utilisé pour obtenir des cellules mononucléaires sanguines isolées (BMC) pour d'autres analyses supplémentaires. Les aliquotes contenant les deux, plasma ou BMC, seront conservées à -80 °C jusqu'aux analyses.

Les analyses de sang seront les suivantes :

1. Évaluations biochimiques : taux de lipides sanguins à jeun (y compris cholestérol à lipoprotéines de haute densité (HDL), cholestérol à lipoprotéines de basse densité (LDL), cholestérol LDL direct, cholestérol à très basse densité (VLDL) et triglycérides (TG), glucose plasmatique , les taux de protéine C réactive hautement sensible, de LPa, de cortisol, de fibrinogène et d'homocystéine seront déterminés dans le plasma à l'aide d'un analyseur automatique. Les patients présentant une glycémie à jeun> 126 mg / dL, utilisant des médicaments antidiabétiques ou ayant déjà reçu un diagnostic de diabète seront déterminés comme diabète sucré de type 2 conformément aux critères de diagnostic de l'American Diabetes Association. L'hypercholestérolémie sera définie comme un taux de cholestérol sérique total > 200 mg/dL ou l'utilisation d'agents hypolipidémiants, conformément aux directives du National Cholesterol Education Program Adult Treatment Panel III.
2. Etude hématologique : hémogramme et profil globulaire dans des échantillons de sang total.
3. Marqueurs pro-inflammatoires circulants : les niveaux circulants de plusieurs cytokines inflammatoires, dont IL-1β et IL-18, seront analysés par un kit multiplex commercial (Cytokine Panel 1B 25plex, Thermo Fisher Scientific). De plus, les niveaux de protéines de la caspase-1 active et l'expression des gènes de Nlrp3 (CIAS1) et de la caspase-1 seront déterminés dans des PBMC isolés par Western-Blotting et RT-PCR, respectivement, pour évaluer l'activité de l'inflammasome.
4. Marqueurs d'autophagie : MAP-LC3, ATG12, p62, TFEB, Beclin-1 et les niveaux de cathepsines B et D seront déterminés par Western-Blotting dans des isolats de protéines PBMC isolées. Les expressions des gènes Beclin-1, y Maplc3 seront déterminées par RT-PCR dans des PBMC isolés en utilisant la bêta-actine comme gène domestique.
5. Marqueurs de stress oxydatif et capacité antioxydante : les dommages aux lipides seront analysés par le dosage dans les urines des isoprostanes 15-F2, les dommages aux protéines par le dosage des protéines carbonyles dans le plasma68 et les dommages à l'ADN par le dosage dans les urines de la 8-hydroxyguanosine (8OHdG) . De plus, la détermination de l'état redox in situ sera effectuée chez les sujets à la clinique en utilisant une goutte de sang d'un doigt. Elle sera réalisée grâce au système Redoxsys (Aytu BioScience, Inc., Englewood, USA), qui mesure également la capacité antioxydante de l'échantillon. Il s'agit d'un nouveau système qui mesure avec une fiabilité auparavant non disponible la charge redox totale dans des échantillons biologiques ainsi que la capacité antioxydante de ceux-ci.
6. Etude métabolomique : pour réaliser ces analyses, les métabolites des différents échantillons sont préalablement extraits. Puis les molécules présentes dans l'extrait méthanolique sont séparées par chromatographie. L'éluat est suivi dans un système ESI-Q-TOF-MS/MS par électrospray98. L'analyse des résultats sera réalisée en collaboration avec le Dr Reinald Pamplona, ​​de l'Université de Lleida, avec qui nous collaborons sur cette question depuis des années et avec qui nous partageons une ligne de recherche et de publications sur la métabolomique.

F) Étude du microbiote parodontal. Des échantillons de plaque sous-gingivale seront prélevés sur les trois sites avec les PPD les plus élevés en mettant sur la poche parodontale la pointe d'un papier filtre pendant 30 s après avoir isolé la zone.

Des échantillons de plaque sous-gingivale recueillis dans des papiers secs seront analysés par PCR pour évaluer la présence de péridontopathogènes connus : Phorphyromonas gingivalis, Tannerella forsythia, Treponema denticola, Aggregatibacter actinomycetemcomitans, Prevotella intermedia, Fusobacterium nucleatum. Les études sur le microbiote seront réalisées à l'aide de techniques de séquençage de masse de l'ADNr 16S. Le séquençage et l'analyse bioinformatique seront effectués par l'Integrated Microbiome Resource, de l'Université de Dalhousie, au Canada.

G) Déterminations dans l'urine.

L'urine à jeun sera recueillie et les déterminations suivantes seront effectuées :

1. Marqueurs des dommages oxydatifs : la 8-hydroxy-2-désoxyguanosine et les F2-isoprostanes totaux seront dosés dans les urines par un dosage immunoenzymatique compétitif. Les résultats seront normalisés à la créatinine urinaire.
2. Concentration des métabolites de l'oleuropéine : ils seront quantifiés par LC-ESI-MS/MS comme dans les études précédentes.

H) Calcul de l'indice de vieillissement réussi L'indice de vieillissement réussi (SAI), avec des scores potentiels allant de 0 à 10, sera utilisé pour évaluer le vieillissement des participants à l'étude. L'indice complet englobe l'éducation, la situation financière, l'activité physique, l'IMC, le score GDS, la participation à des activités sociales avec des amis, avec la famille, les excursions annuelles, le score des facteurs de risque de MCV et le niveau d'adhésion au régime méditerranéen pour développer l'indice. Une variable cumulative (gamme de 0 à 4) indiquant le fardeau global des facteurs de risque de maladies cardiovasculaires classiques (c.-à-d. obésité et antécédents d'hypertension, de diabète et d'hypercholestérolémie) sera développée (les participants n'ayant aucun des facteurs de risque susmentionnés recevront un score de 0, ayant un score factoriel 1, etc.).

I) Critères de succès de l'intervention Pour évaluer le succès de l'intervention avec l'oleuropéine, la réduction de 1 mm ou plus de la profondeur de sondage (PD) sera prise comme variable principale. De plus, et comme critères secondaires de succès, une réduction de 1 mm ou plus du niveau d'attache sera prise, ainsi qu'une réduction de plus de 20% du saignement gingival au sondage.

J) Analyse statistique Une analyse descriptive des principales variables étudiées sera effectuée. Pour les variables quantitatives normales, la moyenne et l'écart-type seront calculés, ou la médiane et les centiles en cas de non-normalité. Les variables qualitatives seront exprimées en utilisant des fréquences absolues et relatives. La normalité des variables sera vérifiée avec le test de Kolmogorov-Smirnov afin de déterminer la nécessité d'effectuer des transformations (logarithmiques et autres) avant de réaliser les études de comparaison. Pour étudier l'effet du traitement sur les différentes variables d'un même groupe, le test t de Student pour échantillons apparentés sera utilisé. Pour effectuer des analyses comparatives au même moment expérimental entre les deux groupes expérimentaux, le test t de Student pour échantillons indépendants sera utilisé.