Adjuvansbehandling hos äldre patienter med parodontit genom administrering av ett tillskott rikt på oleuropein från olivbladet (OLIVAGING)

För att beräkna urvalsstorleken använder du GRANMO-verktyget (https://www.imim.es/ofertadeserveis/software-public/granmo/) har använts, med hänsyn till en alfa-risk på 0,05, en bilateral kontrast, en beta-risk på 0,20, en standardavvikelse för skillnader på 2,5, en minsta skillnad på 1 mm minskning av sonderingsdjupet som ska detekteras mellan baslinjen och slutet av studien, och en förutspådd andel av förlusten på 20 % spårning.

Behandlingar Alla patienter kommer att få en fullständig muntlig undersökning vid baslinjen och efter 4 månader efter behandlingen. Initial terapi kommer att utföras på alla patienter och kommer att bestå av skalning i hela munnen och rotplanering för hand och med ultraljudsinstrument vid behov. Denna behandling kommer att avslutas med munhygieninstruktioner. Alla initiala terapiprocedurer kommer att utföras av samma parodontolog.

Efter parodontal behandling kommer inskrivna frivilliga att slumpmässigt tilldelas en av två grupper av en andra parodontolog. Kontrollgruppen kommer att få hårda gelatinkapslar som innehåller placebo (endast hjälpämnena), medan experimentgruppen kommer att få samma hårda gelatinkapslar men som innehåller 200 mg av ett olivbladsextrakt. Randomiseringen kommer att göras med hjälp av slumptalsdiagram (genom myntkastning), som kommer att utföras vid tidpunkten för det första ämnets registrering, och nästa ämne kommer att tilldelas den andra gruppen baserat på det första ämnets uppgift. Både placebo och kapslar kommer att dispenseras av samma person, och försökspersonerna kommer att ges muntliga och skriftliga instruktioner om användningen. När volontärer kommer att registreras kommer de att tilldelas sekventiella studienummer och förses med sina kapslar, tillräckligt för en månad. Försökspersonerna kommer till fakulteten var 4:e vecka under försökets gång för att fylla på sina kapslar. Kapslarnas intag kommer att pågå i totalt 4 månader. Återstående mediciner kommer att kontrolleras för överensstämmelse. Kapslar kommer att förberedas vid CIDAF (Centro de Investigación Sobre Alimentos Funcionales) vid den tekniska hälsoparken i Granada. Olivextraktet kommer att erhållas från Natac Company (Madrid, España).

Provinsamling och analyser All datainsamling och bestämningar kommer att utföras vid baslinjen och efter 4 månader.

A) Orala undersökningar Parodontala kliniska mätningar kommer att inkludera närvaro eller frånvaro av supragingivalt tandplack och gingival blödning vid sondering (BOP), såväl som parodontalt sonderingsdjup (PPD) och recession av tandköttsmarginalen (GM). Parametrar kommer att mätas på sex platser (mesiobuckal, buckal, distobuckal, disstolingual, lingual och mesiolingual) på varje tand med hjälp av en kalibrerad periodontal sond (Hu-Friedy®, Chicago, IL, USA), 15 mm lång och 0,35 mm mm i diameter. Klinisk anknytningsnivå (CAL) kommer att beräknas genom att lägga till lågkonjunktur till PDD. Antalet kvarvarande tänder kommer också att registreras. O´Learys plackindex, Van der Veldens blödningsindex kommer också att beräknas. Patienter med BOP-ställe <10 %, PPD ≤3 mm, erytem och frånvaro av ödem kommer att betraktas som parodontalfriska.

B) Sociodemografisk datainsamling

1. Grundläggande sociodemografiska data: dessa kommer att inkludera ålder, kön, utbildningsår.
2. Ekonomisk status: deltagare kommer att uppmanas att rapportera sin medelinkomst under de tre föregående åren med hjälp av en fyragradig skala (låg, otillräcklig för att täcka dagliga utgifter = 1, medelhög, anstränger sig hårt för att täcka dagliga utgifter = 2, bra, tillräcklig för att täcka dagliga utgifter = 3, mycket bra, mycket tillräckliga för att täcka dagliga utgifter = 4).
3. Rökstatus: nuvarande rökare kommer att definieras som rökare vid tidpunkten för intervjun. Tidigare rökare kommer att definieras som de som tidigare har rökt men inte gjort det på ett år eller mer. De återstående deltagarna kommer att definieras som tillfälliga eller icke-pågående rökare.
4. Fysisk aktivitetsnivå: den kommer att utvärderas i metaboliska ekvivalenter (MET)-minuter per vecka, med hjälp av det självrapporterade International Physical Activity Questionnaire (IPAQ). De som rapporterade minst 3 MET-minuter per vecka kommer att klassas som fysiskt aktiva (minimalt aktiva - eller "hälsohöjande fysisk aktivitet (HEPA) aktiva"). Alla andra kommer att definieras som fysiskt inaktiva. Dessutom kommer veckofrekvensen av fysisk aktivitet att registreras.
5. Förra månadens depressionssymtom: de kommer att bedömas med en validerad förkortad, självrapporterad Geriatric Depression Scale (GDS) (intervall 0-20). En GDS-poäng mellan 0 och 4 kommer att användas för att indikera ingen depression, medan poäng på 5-10 och N 10 kommer att indikera mild respektive svår depression.
6. Sjukvårdsanvändning: förekomsten av privata läkarmottagningar, offentliga eller privata vårdcentraler eller sjukhus i bostadsområdet, liksom det årliga antalet besök för regelbunden kontroll av hälsotillståndet, kommer att registreras.
7. Vuxnas sociala deltagande: veckofrekvensen av deras sociala aktiviteter med familjen, deras vänner samt deras årliga frekvens av utflykter kommer att registreras för detta ändamål.

C) Antropometriska egenskaper och blodtryck

1. Vikt, höjd och midjemått kommer att mätas. BMI och midja-till-höft-förhållande kommer att beräknas. Övervikt kommer att definieras som BMI mellan 25,0 och 29,9 kg/m2, medan fetma kommer att definieras som BMI >29,9 kg/m2.
2. Blodtryck: patienter med blodtrycksnivåer >140/90 mmHg eller som använder antihypertensiva läkemedel kommer att klassificeras som hypertensiva.

D) Bedömning av kostvanor Utvärderingen av kostvanor kommer att baseras på ett semikvantitativt frågeformulär för matfrekvens (FFQ). FFQ kommer att användas för att utvärdera graden av efterlevnad av medelhavsdieten, MedDietScore (teoretiskt intervall 0-55) användes.

E) Blodprovtagning och analys Blodprover (16 mL) kommer att tas med underarmsvenpunktur efter 12 timmars fasta över natten, utan stas i sittande ställning. Helblodsprover kommer att användas för hematologiska utvärderingar. Största delen av blodet kommer att dras in i EDTA-innehållande rör (1 mg/ml) och plasma kommer att isoleras genom centrifugering vid 1000 xg, under 10 minuter och delas upp i alikvoter om 250 μl för omedelbar analys eller för förvaring vid -80 °C . Blod kommer också att användas för att erhålla isolerade mononukleära blodceller (BMC) för andra ytterligare analyser. Alikvoter som innehåller båda, plasma eller BMC, kommer att bevaras vid -80ºC fram till analyser.

Blodanalyser kommer att vara som följer:

1. Biokemiska utvärderingar: fastande blodlipidnivåer (inklusive high-density lipoprotein-kolesterol (HDL), low-density lipoprotein-kolesterol (LDL), direkt LDL-kolesterol, mycket låg densitet-kolesterol (VLDL) och triglycerider (TG), plasmaglukos , högkänsligt C-reaktivt protein, LPa, kortisol, fibrinogen och homocysteinnivåer kommer att bestämmas i plasma med hjälp av en automatisk analysator. Patienter som visar fasteblodsocker > 126 mg/dL, använder antidiabetisk medicin eller med en tidigare diagnos av diabetes kommer att bestämmas som typ 2-diabetes mellitus i enlighet med American Diabetes Associations diagnostiska kriterier. Hyperkolesterolemi kommer att definieras som totala serumkolesterolnivåer >200 mg/dL eller användning av lipidsänkande medel, enligt National Cholesterol Education Program Adult Treatment Panel III riktlinjer.
2. Hematologisk studie: hemogram och blodcellsprofil i helblodsprover.
3. Cirkulerande pro-inflammatoriska markörer: cirkulerande nivåer av flera inflammatoriska cytokiner inklusive IL-1β och IL-18 kommer att analyseras med ett kommersiellt multiplexkit (Cytokine Panel 1B 25plex, Thermo Fisher Scientific). Dessutom kommer proteinnivåer av aktivt kaspas-1 och genuttryck av Nlrp3 (CIAS1) och kaspas-1 att bestämmas i isolerade PBMCs genom Western-Blotting respektive RT-PCR för att utvärdera inflammasomaktivitet.
4. Autofagimarkörer: MAP-LC3, ATG12, p62, TFEB, Beclin-1 och B- och D-kathepsinnivåer kommer att bestämmas med Western-Blotting i isolerade PBMC-proteinisolat. Beclin-1, y Maplc3 genuttryck kommer att bestämmas med RT-PCR i isolerade PBMCs med användning av beta-aktin som hushållsgen.
5. Oxidativ stressmarkörer och antioxidantkapacitet: skador på lipider kommer att analyseras genom bestämning i urin av 15-F2 isoprostaner, skador på proteiner genom bestämning av karbonylproteiner i plasma68 och skador på DNA genom bestämning i urin av 8-hydroxiguanosin (8OHdG) . Dessutom kommer bestämning av in situ redoxtillstånd att utföras hos försökspersonerna på kliniken med hjälp av en bloddroppe från ett finger. Det kommer att utföras genom Redoxsys-systemet (Aytu BioScience, Inc., Englewood, USA), som också mäter provets antioxidantkapacitet. Detta är ett nytt system som mäter med en tillförlitlighet innan den inte är tillgänglig den totala redoxladdningen i biologiska prover såväl som antioxidantkapaciteten hos dem.
6. Metabolomisk studie: för att utföra dessa analyser extraheras först metaboliterna från de olika proverna. Därefter separeras molekylerna som finns i metanolextraktet genom kromatografi. Eluatet övervakas i ett ESI-Q-TOF-MS/MS-system med elektrospray98. Analysen av resultaten kommer att utföras i samarbete med Dr. Reinald Pamplona, ​​från University of Lleida, som vi har samarbetat med i denna fråga i flera år och som vi delar en forskningslinje och publikationer om metabolomik med.

F) Studie av parodontal mikrobiota. Subgingivala plackprover kommer att samlas in från de tre platserna med de högsta PPD-värdena genom att sätta spetsen på ett filterpapper på parodontalfickan under 30 s efter isolering av zonen.

Subgingivala plackprover som samlas in i torra papper kommer att analyseras med PCR för att utvärdera förekomsten av kända peridontopatogener: Phorphyromonas gingivalis, Tannerella forsythia, Treponema denticola, Aggregatibacter actinomycetemcomitans, Prevotella intermedia, Fusobacterium nucleatum. Mikrobiotastudierna kommer att utföras med 16S rDNA-masssekvenseringstekniker. Sekvensering och bioinformatisk analys kommer att utföras av Integrated Microbiome Resource, från University of Dalhousie, i Kanada.

G) Bestämningar i urin.

Fastande urin kommer att samlas upp och följande bestämningar kommer att utföras:

1. Oxidativa skademarkörer: 8-hydroxi-2-deoxyguanosin och totala mängder F2-isoprostaner kommer att mätas i urin med en konkurrerande enzymimmunanalys. Resultaten kommer att normaliseras till urinkreatinin.
2. Oleuropeinmetaboliters koncentration: de kommer att kvantifieras med LC-ESI-MS/MS som i tidigare studier.

H) Beräkning av framgångsrikt åldrandeindex Framgångsrikt åldrandeindex (SAI), med potentiella poäng från 0 till 10, kommer att användas för att utvärdera åldrande för studiedeltagare. Det fullständiga indexet omfattar utbildning, ekonomisk status, fysisk aktivitet, BMI, GDS-poäng, deltagande i sociala aktiviteter med vänner, med familj, årliga utflykter, poäng för CVD-riskfaktorer och följsamhetsnivå för medelhavskost för att utveckla indexet. En kumulativ variabel (intervall 0-4) som anger den totala bördan av riskfaktorer för klassiska kardiovaskulära sjukdomar (d.v.s. fetma och anamnes på högt blodtryck, diabetes och hyperkolesterolemi) kommer att utvecklas (deltagare som inte har någon av de ovan nämnda riskfaktorerna kommer att få poäng 0, med en faktor poäng 1, etc.).

I) Interventionens framgångskriterier För att bedöma framgången av interventionen med oleuropein kommer minskningen av 1 mm eller mer i sonderingsdjupet (PD) att tas som huvudvariabel. Dessutom, och som sekundära framgångskriterium, kommer en minskning av fästnivån med 1 mm eller mer att tas, samt en minskning med mer än 20 % av tandköttsblödning vid sondering.

J) Statistisk analys En deskriptiv analys av de studerade huvudvariablerna kommer att genomföras. För normala kvantitativa variabler kommer medelvärdet och standardavvikelsen att beräknas, eller medianen och percentilerna vid icke-normalitet. Kvalitativa variabler kommer att uttryckas med hjälp av absoluta och relativa frekvenser. Variablernas normalitet kommer att kontrolleras med Kolmogorov-Smirnov-testet för att bestämma behovet av att utföra transformationer (logaritmiska och andra) innan jämförelsestudierna utförs. För att studera effekten av behandling på de olika variablerna i samma grupp kommer Students t-test för relaterade prover att användas. För att utföra jämförande analyser vid samma experimentella tidpunkt mellan båda experimentgrupperna kommer Studentens t-test för oberoende prover att användas.