Adjuvante behandeling bij oudere patiënten met parodontitis door toediening van een supplement dat rijk is aan oleuropeïne uit het olijfblad (OLIVAGING)

Om de steekproefomvang te berekenen, de GRANMO-tool (https://www.imim.es/ofertadeserveis/software-public/granmo/) is gebruikt, rekening houdend met een alfarisico van 0,05, een bilateraal contrast, een bètarisico van 0,20, een standaarddeviatie van verschillen van 2,5, een minimaal verschil van 1 mm reductie in te detecteren sondediepte tussen basislijn en einde van onderzoek, en een voorspeld verliespercentage van 20% tracking.

Behandelingen Alle patiënten ondergaan een volledig oraal onderzoek bij aanvang en 4 maanden na de behandeling. De initiële therapie zal bij alle patiënten worden uitgevoerd en zal bestaan ​​uit het verwijderen van de volledige mond en wortelplanning met de hand en indien nodig met ultrasone instrumenten. Deze behandeling wordt afgesloten met instructies voor mondhygiëne. Alle initiële therapieprocedures worden uitgevoerd door dezelfde parodontoloog.

Na parodontale behandeling worden ingeschreven vrijwilligers willekeurig toegewezen aan een van de twee groepen door een tweede parodontoloog. De controlegroep krijgt harde gelatinecapsules met placebo (alleen de hulpstoffen), terwijl de experimentele groep dezelfde harde gelatinecapsules krijgt, maar dan met 200 mg olijfbladextract. De randomisatie wordt gedaan door het gebruik van kaarten met willekeurige getallen (door middel van toss), die worden uitgevoerd op het moment dat de eerste proefpersoon zich inschrijft, en de volgende proefpersoon wordt toegewezen aan de andere groep op basis van de opdracht van de eerste proefpersoon. Zowel de placebo als de capsules worden door dezelfde persoon verstrekt en proefpersonen krijgen mondelinge en schriftelijke instructies over het gebruik ervan. Als vrijwilligers worden ingeschreven, krijgen ze opeenvolgende studienummers toegewezen en krijgen ze hun capsules, voldoende voor een maand. Gedurende de proef komen de proefpersonen om de 4 weken naar de faculteit om hun capsules bij te vullen. De inname van de capsules duurt in totaal 4 maanden. Resterende medicijnen worden gecontroleerd op naleving. Capsules zullen worden bereid in het CIDAF (Centro de Investigación Sobre Alimentos Funcionales) in het Technological Health Park in Granada. Het olijfextract zal worden betrokken bij het bedrijf Natac (Madrid, España).

Monsterverzameling en analyses Alle gegevensverzameling en bepalingen worden uitgevoerd bij baseline en na 4 maanden.

A) Mondelinge onderzoeken Parodontale klinische metingen omvatten de aan- of afwezigheid van supragingivale tandplak en gingivale bloeding bij sonderen (BOP), evenals parodontale sondediepte (PPD) en recessie van de gingivale rand (GM). Parameters worden gemeten op zes plaatsen (mesiobuccaal, buccaal, distobuccaal, distolinguaal, linguaal en mesiolinguaal) op elke tand door middel van een gekalibreerde parodontale sonde (Hu-Friedy®, Chicago, IL, VS), 15 mm lang en 0,35 mm in doorsnee. Klinisch hechtingsniveau (CAL) wordt berekend door recessie toe te voegen aan PDD. Ook het aantal resterende tanden wordt geregistreerd. De plaque-index van O'Leary en de bloedingsindex van Van der Velden worden ook berekend. Patiënten met BOP-plaats <10%, PPD ≤3 mm, erytheem en oedeemafwezigheid worden beschouwd als parodontaal-gezonde proefpersonen.

B) Sociodemografische gegevensverzameling

1. Sociodemografische basisgegevens: deze omvatten leeftijd, geslacht, opleidingsjaren.
2. Financiële status: deelnemers wordt gevraagd hun gemiddelde inkomen over de afgelopen drie jaar te rapporteren met behulp van een vierpuntsschaal (laag, onvoldoende om dagelijkse uitgaven te dekken = 1, gemiddeld, hard proberen om dagelijkse uitgaven te dekken = 2, goed, voldoende om de dagelijkse uitgaven te dekken dagelijkse uitgaven = 3, zeer goed, zeer toereikend om de dagelijkse uitgaven te dekken = 4).
3. Rookstatus: huidige rokers worden gedefinieerd als rokers op het moment van het interview. Voormalige rokers worden gedefinieerd als degenen die eerder hebben gerookt, maar dit al een jaar of langer niet meer hebben gedaan. De overige deelnemers worden gedefinieerd als occasionele of niet-huidige rokers.
4. Fysiek activiteitsniveau: het wordt geëvalueerd in metabole equivalent (MET) minuten per week, met behulp van de zelfgerapporteerde International Physical Activity Questionnaire (IPAQ). Degenen die minstens 3 MET-minuten per week rapporteerden, worden geclassificeerd als fysiek actief (minimaal actief - of "gezondheidsbevorderende fysieke activiteit (HEPA) actief"). Alle anderen worden gedefinieerd als fysiek inactief. Verder wordt de wekelijkse frequentie van fysieke activiteit geregistreerd.
5. Depressiesymptomen van de afgelopen maand: ze worden beoordeeld met behulp van een gevalideerde verkorte, zelfgerapporteerde Geriatrische Depressieschaal (GDS) (bereik 0-20). Een GDS-score tussen 0 en 4 wordt gebruikt om aan te geven dat er geen depressie is, terwijl scores van 5-10 en N 10 respectievelijk milde en ernstige depressie aangeven.
6. Zorggebruik: de aanwezigheid van particuliere artsenpraktijken, openbare of particuliere gezondheidscentra of ziekenhuizen in het woongebied, evenals het jaarlijkse aantal bezoeken voor regelmatige controle van de gezondheidstoestand, wordt geregistreerd.
7. Sociale participatie van volwassenen: de wekelijkse frequentie van hun sociale activiteiten met hun familie, hun vrienden en hun jaarlijkse frequentie van excursies wordt voor dit doel geregistreerd.

C) Antropometrische kenmerken en bloeddruk

1. Gewicht, lengte en tailleomtrek worden gemeten. BMI en taille-tot-heup ratio worden berekend. Overgewicht wordt gedefinieerd als een BMI tussen 25,0 en 29,9 kg/m2, terwijl obesitas wordt gedefinieerd als een BMI >29,9 kg/m2.
2. Bloeddruk: patiënten met bloeddrukwaarden>140/90 mmHg of die antihypertensiva gebruiken, worden geclassificeerd als hypertensief.

D) Beoordeling van voedingsgewoonten De evaluatie van voedingsgewoonten zal gebaseerd zijn op een semi-kwantitatieve voedselfrequentievragenlijst (FFQ). FFQ zal worden gebruikt om het niveau van naleving van het mediterrane dieet te evalueren, de MedDietScore (theoretisch bereik 0-55) werd gebruikt.

E) Bloedafname en -analyse Bloedmonsters (16 ml) worden afgenomen door onderarmvenapunctie na 12 uur 's nachts vasten, zonder stase in zittende positie. Volbloedmonsters zullen worden gebruikt voor hematologische evaluaties. Het grootste deel van het bloed wordt afgenomen in EDTA-bevattende buisjes (1 mg/ml) en plasma wordt geïsoleerd door centrifugatie bij 1000 xg gedurende 10 minuten en verdeeld in aliquots van 250 μl voor onmiddellijke analyse of voor opslag bij -80 °C . Bloed zal ook worden gebruikt voor het verkrijgen van geïsoleerde mononucleaire bloedcellen (BMC's) voor andere aanvullende analyses. Aliquots die beide bevatten, plasma of BMC's, worden tot analyse bewaard bij -80 ºC.

Bloedanalyses zullen als volgt zijn:

1. Biochemische evaluaties: nuchtere bloedlipideniveaus (inclusief lipoproteïne-cholesterol met hoge dichtheid (HDL), lipoproteïne-cholesterol met lage dichtheid (LDL), direct LDL-cholesterol, zeer lage dichtheid-cholesterol (VLDL) en triglyceriden (TG), plasmaglucose , hooggevoelig C-reactief proteïne, LPa, cortisol, fibrinogeen en homocysteïne worden in plasma bepaald met behulp van een automatische analysator. Patiënten die nuchtere bloedglucose > 126 mg/dL vertonen, antidiabetica gebruiken of bij wie eerder diabetes is vastgesteld, zullen worden aangemerkt als type 2 diabetes mellitus in overeenstemming met de diagnostische criteria van de American Diabetes Association. Hypercholesterolemie wordt gedefinieerd als totale serumcholesterolwaarden >200 mg/dL of gebruik van lipidenverlagende middelen, volgens de richtlijnen van het National Cholesterol Education Program Adult Treatment Panel III.
2. Hematologische studie: hemogram en bloedcelprofiel in volbloedmonsters.
3. Circulerende pro-inflammatoire markers: circulerende niveaus van meerdere inflammatoire cytokines waaronder IL-1β en IL-18 zullen worden geanalyseerd door een commerciële multiplexkit (Cytokine Panel 1B 25plex, Thermo Fisher Scientific). Daarnaast zullen eiwitniveaus van actieve caspase-1 en genexpressie van Nlrp3 (CIAS1) en caspase-1 worden bepaald in geïsoleerde PBMC's door middel van respectievelijk Western-Blotting en RT-PCR om de ontstekingsactiviteit te evalueren.
4. Autofagie-markers: MAP-LC3-, ATG12-, p62-, TFEB-, Beclin-1- en B- en D-cathepsineniveaus zullen worden bepaald door middel van Western-blotting in geïsoleerde PBMC-eiwitisolaten. Beclin-1, en Maplc3 genexpressies zullen bepaald worden door middel van RT-PCR in geïsoleerde PBMC's met beta-actine als huishoudgen.
5. Oxidatieve stressmarkers en antioxidantcapaciteit: schade aan lipiden zal worden geanalyseerd door bepaling in urine van 15-F2 isoprostanen, schade aan eiwitten door bepaling van carbonylproteïnen in plasma68 en schade aan DNA door bepaling in urine van 8-hydroxyguanosine (8OHdG) . Daarnaast zal de bepaling van de in situ redoxtoestand bij de proefpersonen in de kliniek worden uitgevoerd door middel van een bloeddruppel uit een vinger. Het zal worden uitgevoerd via het Redoxsys-systeem (Aytu BioScience, Inc., Englewood, VS), dat ook de antioxidantcapaciteit van het monster meet. Dit is een nieuw systeem dat met een nog nooit beschikbare betrouwbaarheid de totale redoxlading in biologische monsters meet, evenals de antioxidantcapaciteit ervan.
6. Metabolomisch onderzoek: om deze analyse uit te voeren, worden eerst de metabolieten van de verschillende monsters geëxtraheerd. Vervolgens worden de in het methanolextract aanwezige moleculen door chromatografie gescheiden. Het eluaat wordt gecontroleerd in een ESI-Q-TOF-MS/MS-systeem door electrospray98. De analyse van de resultaten zal worden uitgevoerd in samenwerking met Dr. Reinald Pamplona, ​​van de Universiteit van Lleida, met wie we al jaren samenwerken aan dit onderwerp en met wie we een lijn van onderzoek en publicaties over metabolomics delen.

F) Onderzoek naar parodontale microbiota. Subgingivale plaquemonsters zullen worden verzameld van de drie locaties met de hoogste PPD's door gedurende 30 seconden na het isoleren van de zone de punt van een filtreerpapier op de parodontale pocket te plaatsen.

Subgingivale plaquemonsters verzameld in droog papier zullen worden geanalyseerd met PCR om de aanwezigheid van bekende peridontopathogenen te evalueren: Phorphyromonas gingivalis, Tannerella forsythia, Treponema denticola, Aggregatibacter actinomycetemcomitans, Prevotella intermedia, Fusobacterium nucleatum. De microbiota-onderzoeken zullen worden uitgevoerd met behulp van 16S rDNA-massasequencingtechnieken. Sequentiebepaling en bio-informatica-analyse zullen worden uitgevoerd door de Integrated Microbiome Resource, van de Universiteit van Dalhousie, in Canada.

G) Bepalingen in urine.

Nuchtere urine wordt verzameld en de volgende bepalingen worden uitgevoerd:

1. Markers voor oxidatieve schade: 8-hydroxy-2-deoxyguanosine en totaal F2-isoprostanen zullen in de urine worden gemeten door middel van een competitieve enzym-immunoassay. De resultaten worden genormaliseerd naar creatinine in de urine.
2. Concentratie van oleuropeïnemetabolieten: ze zullen worden gekwantificeerd door LC-ESI-MS/MS zoals in eerdere studies.

H) Berekening van succesvolle verouderingsindex Succesvolle verouderingsindex (SAI), met mogelijke scores van 0 tot 10, zal worden gebruikt om veroudering van studiedeelnemers te evalueren. De volledige index omvat opleiding, financiële status, fysieke activiteit, BMI, GDS-score, deelname aan sociale activiteiten met vrienden, met familie, jaarlijkse excursies, CVD-risicofactorenscore en nalevingsniveau van mediterrane voeding om de index te ontwikkelen. Er zal een cumulatieve variabele (bereik 0-4) worden ontwikkeld die de totale last van klassieke risicofactoren voor hart- en vaatziekten aangeeft (d.w.z. obesitas en geschiedenis van hypertensie, diabetes en hypercholesterolemie) (deelnemers die geen van de bovengenoemde risicofactoren hebben, krijgen score 0, met één factorscore 1, enz.).

I) Criteria voor succes van de interventie Om het succes van de interventie met oleuropeïne te beoordelen, wordt de reductie van 1 mm of meer van de sondediepte (PD) als hoofdvariabele genomen. Daarnaast wordt als secundair succescriterium een ​​reductie van 1 mm of meer van het aanhechtingsniveau genomen, evenals een reductie van meer dan 20% van tandvleesbloeding bij sonderen.

J) Statistische analyse Er zal een beschrijvende analyse van de belangrijkste bestudeerde variabelen worden uitgevoerd. Voor normale kwantitatieve variabelen worden het gemiddelde en de standaarddeviatie berekend, of de mediaan en percentielen in het geval van niet-normaliteit. Kwalitatieve variabelen zullen worden uitgedrukt met behulp van absolute en relatieve frequenties. De normaliteit van de variabelen zal worden gecontroleerd met de Kolmogorov-Smirnov-test om te bepalen of transformaties (logaritmisch en andere) moeten worden uitgevoerd alvorens de vergelijkingsstudies uit te voeren. Om het effect van behandeling op de verschillende variabelen in dezelfde groep te bestuderen, wordt de Student's t-toets voor gerelateerde steekproeven gebruikt. Om vergelijkende analyses uit te voeren op hetzelfde experimentele tijdstip tussen beide experimentele groepen, wordt de Student's t-toets voor onafhankelijke steekproeven gebruikt.