Adjuverende behandling hos ældre patienter med paradentose gennem administration af et tilskud rigt på oleuropein fra olivenbladet (OLIVAGING)

For at beregne stikprøvestørrelsen skal du bruge GRANMO-værktøjet (https://www.imim.es/ofertadeserveis/software-public/granmo/) er blevet brugt under hensyntagen til en alfa-risiko på 0,05, en bilateral kontrast, en beta-risiko på 0,20, en standardafvigelse af forskelle på 2,5, en minimumsforskel på 1 mm reduktion i sonderingsdybde, der skal detekteres mellem baseline og afslutning af undersøgelsen, og en forventet andel af tab på 20 % sporing.

Behandlinger Alle patienter vil modtage en komplet mundtlig undersøgelse ved baseline og efter 4 måneder efter behandlingen. Den indledende behandling vil blive udført hos alle patienter og vil bestå af fuldmundsskalning og rodplanlægning i hånden og med ultralydsinstrumentering efter behov. Denne behandling vil blive afsluttet med mundhygiejneinstruktioner. Alle indledende behandlingsprocedurer vil blive udført af den samme parodontist.

Efter parodontal behandling vil indskrevne frivillige blive tilfældigt fordelt til en af ​​to grupper af en anden parodontist. Kontrolgruppen vil modtage hårde gelatinekapsler indeholdende placebo (kun hjælpestofferne), hvorimod forsøgsgruppen vil modtage de samme hårde gelatinekapsler, men indeholdende 200 mg af et olivenbladekstrakt. Randomiseringen vil ske ved brug af tilfældige tal-diagrammer (ved møntkast), som vil blive udført på tidspunktet for det første fags tilmelding, og det næste emne vil blive tildelt den anden gruppe baseret på det første fags opgave. Både placebo og kapsler vil blive dispenseret af den samme person, og forsøgspersonerne vil blive givet mundtlige og skriftlige instruktioner om deres brug. Efterhånden som frivillige vil blive tilmeldt, vil de blive tildelt sekventielle undersøgelsesnumre og forsynet med deres kapsler, tilstrækkeligt til en måned. Forsøgspersonerne kommer til fakultetet hver 4. uge i løbet af forsøget for at genopfylde deres kapsler. Kapslernes indtagelse vil vare i i alt 4 måneder. Resterende medicin vil blive kontrolleret for overholdelse. Kapsler vil blive forberedt på CIDAF (Centro de Investigación Sobre Alimentos Funcionales) i den teknologiske sundhedspark i Granada. Olivenekstrakten vil blive hentet fra Natac Company (Madrid, España).

Prøveindsamling og analyser Al dataindsamling og -bestemmelser vil blive udført ved baseline og efter 4 måneder.

A) Orale undersøgelser Parodontale kliniske målinger vil omfatte tilstedeværelse eller fravær af supragingival tandplak og tandkødsblødning ved sondering (BOP), samt periodontal sonderingsdybde (PPD) og recession af tandkødsmarginen (GM). Parametre vil blive målt på seks steder (mesiobukkal, bukkal, distobukkal, distolingual, lingual og mesiolingual) på hver tand ved hjælp af en kalibreret parodontal sonde (Hu-Friedy®, Chicago, IL, USA), 15 mm i længden og 0,35 mm i diameter. Klinisk tilknytningsniveau (CAL) vil blive beregnet ved at tilføje recession til PDD. Antallet af resterende tænder vil også blive registreret. O´Learys plakindeks, Van der Veldens blødningsindeks vil også blive beregnet. Patienter med BOP-sted <10 %, PPD ≤3 mm, erytem og fravær af ødem vil blive betragtet som parodontal-sunde forsøgspersoner.

B) Sociodemografisk dataindsamling

1. Grundlæggende sociodemografiske data: disse vil omfatte alder, køn, uddannelsesår.
2. Økonomisk status: Deltagerne vil blive bedt om at rapportere deres gennemsnitlige indkomst i løbet af de foregående tre år ved hjælp af en fire-punkts skala (lav, utilstrækkelig til at dække daglige udgifter = 1, medium, forsøger hårdt at dække daglige udgifter = 2, god, tilstrækkelig til at dække daglige udgifter = 3, meget god, meget tilstrækkelig til at dække daglige udgifter = 4).
3. Rygestatus: nuværende rygere vil blive defineret som rygere på tidspunktet for interviewet. Tidligere rygere vil blive defineret som dem, der tidligere havde røget, men ikke havde gjort det i et år eller mere. De resterende deltagere vil blive defineret som lejlighedsvise eller ikke-nuværende rygere.
4. Fysisk aktivitetsniveau: det vil blive evalueret i metaboliske ækvivalenter (MET)-minutter om ugen ved hjælp af det selvrapporterede International Physical Activity Questionnaire (IPAQ). De, der rapporterede mindst 3 MET-minutter om ugen, vil blive klassificeret som fysisk aktive (minimalt aktive - eller "sundhedsfremmende fysisk aktivitet (HEPA) aktiv"). Alle andre vil blive defineret som fysisk inaktive. Endvidere vil den ugentlige frekvens af fysisk aktivitet blive registreret.
5. Sidste måneds depressionssymptomer: de vil blive vurderet ved hjælp af en valideret forkortet, selvrapporterende Geriatric Depression Scale (GDS) (interval 0-20). En GDS-score mellem 0 og 4 vil blive brugt til at angive ingen depression, mens score på 5-10 og N 10 vil angive henholdsvis mild og svær depression.
6. Sundhedsanvendelse: Tilstedeværelsen af ​​private lægekontorer, offentlige eller private sundhedscentre eller hospitaler i bopælsområdet, samt det årlige antal besøg til regelmæssig kontrol af helbredstilstanden, vil blive registreret.
7. Voksnes sociale deltagelse: ugentlig hyppighed af deres sociale aktiviteter med deres familie, deres venner samt deres årlige hyppighed af udflugter vil blive registreret til dette formål.

C) Antropometriske karakteristika og blodtryk

1. Vægt, højde og taljeomkreds vil blive målt. BMI og talje-til-hofte-forhold vil blive beregnet. Overvægt vil blive defineret som BMI mellem 25,0 og 29,9 kg/m2, mens fedme vil blive defineret som BMI >29,9 kg/m2.
2. Blodtryk: Patienter med blodtryksniveauer >140/90 mmHg eller bruger antihypertensiv medicin vil blive klassificeret som hypertensive.

D) Kostvanevurdering Evalueringen af ​​kostvaner vil blive baseret på et semi-kvantitativt spørgeskema med madfrekvens (FFQ). FFQ vil blive brugt til at evaluere niveauet af overholdelse af middelhavsdiæten, MedDietScore (teoretisk interval 0-55) blev brugt.

E) Blodprøvetagning og analyse Blodprøver (16 ml) vil blive opsamlet ved underarmsvenepunktur efter 12 timers faste natten over uden stase i siddende stilling. Fuldblodsprøver vil blive brugt til hæmatologiske evalueringer. Det meste af blodet vil blive trukket ind i EDTA-holdige rør (1 mg/ml), og plasma vil blive isoleret ved centrifugering ved 1000 xg i 10 minutter og opdelt i alikvoter på 250 μl til øjeblikkelig analyse eller til opbevaring ved -80 °C . Blod vil også blive brugt til at opnå isolerede mononukleære blodceller (BMC'er) til andre yderligere analyser. Alikvoter indeholdende begge, plasma eller BMC'er, vil blive opbevaret ved -80ºC indtil analyser.

Blodanalyser vil være som følger:

1. Biokemiske evalueringer: fastende blodlipidniveauer (herunder high-density lipoprotein-kolesterol (HDL), low-density lipoprotein-kolesterol (LDL), direkte LDL-kolesterol, meget lav densitet-kolesterol (VLDL) og triglycerider (TG), plasmaglucose , vil højfølsomt C-reaktivt protein, LPa, cortisol, fibrinogen og homocystein niveauer blive bestemt i plasma ved hjælp af en automatisk analysator. Patienter, der viser fastende blodsukker > 126 mg/dL, bruger antidiabetisk medicin eller med en tidligere diagnose af diabetes, vil blive bestemt som type 2 diabetes mellitus i overensstemmelse med American Diabetes Associations diagnostiske kriterier. Hyperkolesterolæmi vil blive defineret som totalt serumkolesterolniveauer >200 mg/dL eller brug af lipidsænkende midler i henhold til retningslinjerne fra National Cholesterol Education Program Adult Treatment Panel III.
2. Hæmatologisk undersøgelse: hæmogram og blodcelleprofil i fuldblodsprøver.
3. Cirkulerende pro-inflammatoriske markører: Cirkulerende niveauer af flere inflammatoriske cytokiner inklusive IL-1β og IL-18 vil blive analyseret med et kommercielt multiplex-kit (Cytokine Panel 1B 25plex, Thermo Fisher Scientific). Derudover vil proteinniveauer af aktiv caspase-1 og genekspression af Nlrp3 (CIAS1) og caspase-1 blive bestemt i isolerede PBMC'er ved henholdsvis Western-Blotting og RT-PCR for at evaluere inflammasomaktivitet.
4. Autophagy-markører: MAP-LC3, ATG12, p62, TFEB, Beclin-1 og B- og D-kathepsinniveauer vil blive bestemt ved Western-Blotting i isolerede PBMC-proteinisolater. Beclin-1, y Maplc3 genekspressioner vil blive bestemt ved RT-PCR i isolerede PBMC'er under anvendelse af beta-actin som husholdergen.
5. Oxidative stressmarkører og antioxidantkapacitet: skade på lipider vil blive analyseret gennem bestemmelse i urin af 15-F2 isoprostaner, skade på proteiner ved bestemmelse af carbonylproteiner i plasma68 og beskadigelse af DNA gennem bestemmelse i urin af 8-hydroxyguanosin (8OHdG) . Desuden vil bestemmelsen af ​​in situ redoxtilstanden blive udført hos forsøgspersonerne på klinikken ved brug af en bloddråbe fra en finger. Det vil blive udført gennem Redoxsys-systemet (Aytu BioScience, Inc., Englewood, USA), som også måler prøvens antioxidantkapacitet. Dette er et nyt system, der måler med en pålidelighed, før den ikke er tilgængelig, den totale redoxladning i biologiske prøver samt deres antioxidantkapacitet.
6. Metabolomisk undersøgelse: For at udføre disse analyser ekstraheres metabolitterne af de forskellige prøver først. Derefter adskilles molekylerne i methanolekstrakten ved kromatografi. Eluatet overvåges i et ESI-Q-TOF-MS/MS-system med elektrospray98. Analysen af ​​resultaterne vil blive udført i samarbejde med Dr. Reinald Pamplona fra University of Lleida, som vi har samarbejdet med om dette emne i årevis, og som vi deler en forskningslinje og publikationer om metabolomics med.

F) Periodontal mikrobiota undersøgelse. Subgingivale plakprøver vil blive indsamlet fra de tre steder med de højeste PPD'er ved at lægge spidsen af ​​et filterpapir på parodontallommen i løbet af 30 s efter isolering af zonen.

Subgingivale plakprøver indsamlet i tørre papirer vil blive analyseret ved PCR for at evaluere tilstedeværelsen af ​​kendte peridontopatogener: Phorphyromonas gingivalis, Tannerella forsythia, Treponema denticola, Aggregatibacter actinomycetemcomitans, Prevotella intermedia, Fusobacterium nucleatum. Mikrobiotaundersøgelserne vil blive udført ved hjælp af 16S rDNA massesekventeringsteknikker. Sekvensering og bioinformatisk analyse vil blive udført af Integrated Microbiome Resource, fra University of Dalhousie, i Canada.

G) Bestemmelser i urin.

Fastende urin vil blive opsamlet, og følgende bestemmelser vil blive udført:

1. Oxidative skadesmarkører: 8-hydroxy-2-deoxyguanosin og total F2-isoprostaner vil blive målt i urin ved en konkurrerende enzymimmunoassay. Resultaterne vil blive normaliseret til urinkreatinin.
2. Oleuropein-metabolitterkoncentration: de vil blive kvantificeret ved LC-ESI-MS/MS som i tidligere undersøgelser.

H) Beregning af succesfuldt aldringsindeks Succesfuldt aldringsindeks (SAI), med potentielle scorer fra 0 til 10, vil blive brugt til at evaluere aldring for undersøgelsesdeltagere. Det fulde indeks omfatter uddannelse, økonomisk status, fysisk aktivitet, BMI, GDS-score, deltagelse i sociale aktiviteter med venner, med familie, årlige udflugter, CVD-risikofaktorer og overholdelsesniveau for middelhavskost for at udvikle indekset. En kumulativ variabel (interval 0-4), der angiver den overordnede byrde af risikofaktorer for klassiske kardiovaskulære sygdomme (dvs. fedme og historie med hypertension, diabetes og hyperkolesterolæmi), vil blive udviklet (deltagere, der ikke har nogen af ​​de førnævnte risikofaktorer, får score 0, idet de har én faktor score 1 osv.).

I) Interventionssucceskriterier For at vurdere succesen af ​​interventionen med oleuropein vil reduktionen på 1 mm eller mere i sonderingsdybden (PD) blive taget som hovedvariabel. Derudover vil der som sekundære succeskriterier blive taget en reduktion på 1 mm eller mere i tilknytningsniveauet, samt en reduktion på mere end 20 % i tandkødsblødning ved sondering.

J) Statistisk analyse En deskriptiv analyse af de undersøgte hovedvariable vil blive udført. For normale kvantitative variable vil middelværdien og standardafvigelsen blive beregnet, eller medianen og percentilerne i tilfælde af ikke-normalitet. Kvalitative variabler vil blive udtrykt ved hjælp af absolutte og relative frekvenser. Variablernes normalitet vil blive kontrolleret med Kolmogorov-Smirnov-testen for at bestemme behovet for at udføre transformationer (logaritmiske og andre), før sammenligningsundersøgelserne udføres. For at studere effekten af ​​behandling på de forskellige variable i samme gruppe, vil Elevens t-test for relaterede prøver blive brugt. For at udføre sammenlignende analyser på samme eksperimentelle tidspunkt mellem begge forsøgsgrupper, vil Elevens t-test for uafhængige prøver blive brugt.