Adjuvante Behandlung bei älteren Patienten mit Parodontitis durch die Verabreichung eines Nahrungsergänzungsmittels, das reich an Oleuropein aus dem Olivenblatt ist (OLIVAGING)

Zur Berechnung der Stichprobengröße wird das GRANMO-Tool (https://www.imim.es/ofertadeserveis/software-public/granmo/) unter Berücksichtigung eines Alpha-Risikos von 0,05, eines bilateralen Kontrasts, eines Beta-Risikos von 0,20, einer Standardabweichung der Differenzen von 2,5, einer minimalen Differenz von 1 mm Verringerung der Sondierungstiefe, die zwischen dem Ausgangswert und dem Ende der Studie festgestellt werden muss, und ein prognostizierter Verlustanteil von 20 % Tracking.

Behandlungen Alle Patienten werden zu Studienbeginn und 4 Monate nach der Behandlung einer vollständigen mündlichen Untersuchung unterzogen. Die anfängliche Therapie wird bei allen Patienten durchgeführt und besteht aus einer Zahnsteinentfernung im gesamten Mund und einer Wurzelplanung von Hand und bei Bedarf mit Ultraschallinstrumenten. Diese Behandlung wird mit einer Mundhygieneinstruktion abgeschlossen. Alle initialen Therapieverfahren werden von demselben Parodontologen durchgeführt.

Nach der Parodontalbehandlung werden die eingeschriebenen Freiwilligen von einem zweiten Parodontologen nach dem Zufallsprinzip einer von zwei Gruppen zugeteilt. Die Kontrollgruppe erhält Hartgelatinekapseln mit Placebo (nur die Hilfsstoffe), während die Versuchsgruppe die gleichen Hartgelatinekapseln erhält, die jedoch 200 mg eines Olivenblattextrakts enthalten. Die Randomisierung erfolgt durch die Verwendung von Zufallszahlentabellen (durch Münzwurf), die zum Zeitpunkt der Einschreibung des ersten Probanden durchgeführt werden, und der nächste Proband wird der anderen Gruppe basierend auf der Zuweisung des ersten Probanden zugewiesen. Sowohl das Placebo als auch die Kapseln werden von derselben Person verabreicht, und die Probanden erhalten mündliche und schriftliche Anweisungen zur Verwendung. Wenn Freiwillige aufgenommen werden, werden ihnen fortlaufende Studiennummern zugewiesen und sie werden mit ihren Kapseln versorgt, die für einen Monat ausreichen. Die Probanden kommen im Verlauf der Studie alle 4 Wochen zur Fakultät, um ihre Kapseln aufzufüllen. Die Einnahme der Kapseln reicht für insgesamt 4 Monate. Verbleibende Medikamente werden auf Compliance überprüft. Die Kapseln werden im CIDAF (Centro de Investigación Sobre Alimentos Funcionales) im Technological Health Park in Granada hergestellt. Der Olivenextrakt wird von der Firma Natac (Madrid, España) bezogen.

Probennahme und Analysen Alle Datensammlungen und Bestimmungen werden zu Studienbeginn und nach 4 Monaten durchgeführt.

A) Orale Untersuchungen Parodontale klinische Messungen umfassen das Vorhandensein oder Nichtvorhandensein von supragingivaler Zahnplaque und Zahnfleischbluten beim Sondieren (BOP) sowie die parodontale Sondierungstiefe (PPD) und die Rezession des Gingivarands (GM). Die Parameter werden an sechs Stellen (mesiobukkale, bukkale, distobukkale, distolinguale, linguale und mesiolinguale) an jedem Zahn mittels einer kalibrierten Parodontalsonde (Hu-Friedy®, Chicago, IL, USA), 15 mm lang und 0,35 mm, gemessen mm Durchmesser. Der Clinical Attachment Level (CAL) wird berechnet, indem die Rezession zum PDD addiert wird. Die Anzahl der verbleibenden Zähne wird ebenfalls erfasst. O´Learys Plaqueindex, Van der Veldens Blutungsindex werden ebenfalls berechnet. Patienten mit BOP-Stelle < 10 %, PPD ≤ 3 mm, fehlendem Erythem und Ödem werden als parodontal gesunde Probanden betrachtet.

B) Soziodemografische Datenerhebung

1. Grundlegende soziodemografische Daten: Dazu gehören Alter, Geschlecht, Ausbildungsjahre.
2. Finanzielle Situation: Die Teilnehmer werden gebeten, ihr durchschnittliches Einkommen in den letzten drei Jahren anhand einer vierstufigen Skala anzugeben (niedrig, unzureichend, um die täglichen Ausgaben zu decken = 1, mittel, bemüht sich, die täglichen Ausgaben zu decken = 2, gut, ausreichend zur Deckung Tagesausgaben = 3, sehr gut, sehr ausreichend zur Deckung der Tagesausgaben = 4).
3. Raucherstatus: Aktuelle Raucher werden zum Zeitpunkt des Interviews als Raucher definiert. Ehemalige Raucher werden definiert als diejenigen, die zuvor geraucht haben, dies jedoch seit einem Jahr oder länger nicht mehr getan haben. Die übrigen Teilnehmer werden als Gelegenheits- oder Nicht-Raucher definiert.
4. Grad der körperlichen Aktivität: Er wird in metabolischen Äquivalenten (MET)-Minuten pro Woche unter Verwendung des selbstberichteten International Physical Activity Questionnaire (IPAQ) bewertet. Diejenigen, die mindestens 3 MET-Minuten pro Woche gemeldet haben, werden als körperlich aktiv (minimal aktiv – oder „gesundheitsfördernde körperliche Aktivität (HEPA) aktiv“) eingestuft. Alle anderen werden als körperlich inaktiv definiert. Weiterhin wird die wöchentliche Häufigkeit der körperlichen Aktivität erfasst.
5. Depressionssymptome des letzten Monats: Sie werden anhand einer validierten verkürzten geriatrischen Depressionsskala (GDS) (Bereich 0-20) zur Selbsteinschätzung bewertet. Ein GDS-Score zwischen 0 und 4 wird verwendet, um keine Depression anzuzeigen, während Scores von 5-10 und N 10 eine leichte bzw. schwere Depression anzeigen.
6. Gesundheitsversorgung: Das Vorhandensein von niedergelassenen Arztpraxen, öffentlichen oder privaten Gesundheitszentren oder Krankenhäusern im Wohngebiet sowie die jährliche Anzahl der Besuche zur regelmäßigen Überprüfung des Gesundheitszustands werden erfasst.
7. Soziale Teilhabe Erwachsener: Zu diesem Zweck werden die wöchentliche Häufigkeit ihrer sozialen Aktivitäten mit ihrer Familie, ihren Freunden sowie ihre jährliche Häufigkeit von Ausflügen erfasst.

C) Anthropometrische Merkmale und Blutdruck

1. Gewicht, Größe und Taillenumfang werden gemessen. BMI und Waist-to-Hip-Ratio werden berechnet. Übergewicht wird als BMI zwischen 25,0 und 29,9 kg/m2 definiert, während Adipositas als BMI > 29,9 kg/m2 definiert wird.
2. Blutdruck: Patienten mit Blutdruckwerten > 140/90 mmHg oder Patienten, die blutdrucksenkende Medikamente einnehmen, werden als Bluthochdruck eingestuft.

D) Bewertung der Ernährungsgewohnheiten Die Bewertung der Ernährungsgewohnheiten basiert auf einem halbquantitativen Fragebogen zur Häufigkeit der Ernährung (FFQ). FFQ wird verwendet, um den Grad der Einhaltung der Mittelmeerdiät zu bewerten, der MedDietScore (theoretischer Bereich 0-55) wurde verwendet.

E) Blutentnahme und Analyse Blutproben (16 ml) werden durch Unterarm-Venenpunktion nach 12-stündigem Fasten über Nacht ohne Stasis in sitzender Position entnommen. Vollblutproben werden für hämatologische Auswertungen verwendet. Der größte Teil des Blutes wird in EDTA-haltige Röhrchen (1 mg/ml) gezogen und das Plasma wird durch 10-minütige Zentrifugation bei 1000 xg isoliert und zur sofortigen Analyse oder zur Lagerung bei -80 °C in Aliquots von 250 μl aufgeteilt . Blut wird auch zur Gewinnung isolierter mononukleärer Blutzellen (BMCs) für andere zusätzliche Analysen verwendet. Aliquots, die beides enthalten, Plasma oder BMCs, werden bis zur Analyse bei -80 °C aufbewahrt.

Blutanalysen werden wie folgt sein:

1. Biochemische Auswertungen: Nüchtern-Blutfettwerte (einschließlich High-Density-Lipoprotein-Cholesterin (HDL), Low-Density-Lipoprotein-Cholesterin (LDL), direktes LDL-Cholesterin, Very-Low-Density-Cholesterin (VLDL) und Triglyceride (TG), Plasmaglukose , hochempfindliches C-reaktives Protein, LPa, Cortisol, Fibrinogen und Homocystein werden im Plasma mit einem automatischen Analysegerät bestimmt. Patienten, die einen Nüchternblutzucker > 126 mg/dl aufweisen, Antidiabetika einnehmen oder bei denen zuvor Diabetes diagnostiziert wurde, werden gemäß den diagnostischen Kriterien der American Diabetes Association als Typ-2-Diabetes mellitus eingestuft. Hypercholesterinämie wird gemäß den Richtlinien des National Cholesterol Education Program Adult Treatment Panel III definiert als Gesamtcholesterinspiegel im Serum > 200 mg/dL oder Verwendung von lipidsenkenden Mitteln.
2. Hämatologische Studie: Hämogramm und Blutzellenprofil in Vollblutproben.
3. Zirkulierende entzündungsfördernde Marker: Zirkulierende Spiegel mehrerer entzündlicher Zytokine, einschließlich IL-1β und IL-18, werden mit einem kommerziellen Multiplex-Kit (Cytokine Panel 1B 25plex, Thermo Fisher Scientific) analysiert. Darüber hinaus werden die Proteinspiegel der aktiven Caspase-1 und die Genexpression von Nlrp3 (CIAS1) und Caspase-1 in isolierten PBMCs durch Western-Blotting bzw. RT-PCR bestimmt, um die Inflammasom-Aktivität zu bewerten.
4. Autophagie-Marker: MAP-LC3, ATG12, p62, TFEB, Beclin-1 und B- und D-Kathepsine werden durch Western-Blotting in isolierten PBMC-Proteinisolaten bestimmt. Beclin-1, y Maplc3-Genexpressionen werden durch RT-PCR in isolierten PBMCs unter Verwendung von beta-Actin als Housekeeper-Gen bestimmt.
5. Marker für oxidativen Stress und antioxidative Kapazität: Lipidschäden werden durch die Bestimmung von 15-F2-Isoprostanen im Urin, Proteinschäden durch die Bestimmung von Carbonylproteinen im Plasma68 und DNA-Schäden durch die Bestimmung von 8-Hydroxyguanosin (8OHdG) im Urin analysiert. . Zusätzlich wird die Bestimmung des in situ Redox-Zustandes bei den Probanden in der Klinik anhand eines Blutstropfens vom Finger durchgeführt. Sie wird durch das Redoxsys-System (Aytu BioScience, Inc., Englewood, USA) durchgeführt, das auch die antioxidative Kapazität der Probe misst. Dies ist ein neuartiges System, das mit einer zuvor nicht verfügbaren Zuverlässigkeit die gesamte Redoxladung in biologischen Proben sowie deren antioxidative Kapazität misst.
6. Metabolomische Studie: Um diese Analysen durchzuführen, werden zunächst die Metaboliten der verschiedenen Proben extrahiert. Anschließend werden die im methanolischen Extrakt enthaltenen Moleküle chromatographisch aufgetrennt. Das Eluat wird in einem ESI-Q-TOF-MS/MS-System per Elektrospray98 überwacht. Die Analyse der Ergebnisse wird in Zusammenarbeit mit Dr. Reinald Pamplona von der Universität Lleida durchgeführt, mit dem wir seit Jahren zu diesem Thema zusammenarbeiten und mit dem wir eine Reihe von Forschungsarbeiten und Veröffentlichungen zur Metabolomik teilen.

F) Studie zur parodontalen Mikrobiota. Subgingivale Plaqueproben werden von den drei Stellen mit den höchsten PPDs gesammelt, indem die Spitze eines Filterpapiers während 30 Sekunden nach dem Isolieren der Zone auf die parodontale Tasche gelegt wird.

In trockenen Papieren gesammelte subgingivale Plaqueproben werden durch PCR analysiert, um das Vorhandensein bekannter Peridontopathogene zu bewerten: Phophyromonas gingivalis, Tannerella forsythia, Treponema denticola, Aggregatibacter actinomycetemcomitans, Prevotella intermedia, Fusobacterium nucleatum. Die Mikrobiota-Studien werden unter Verwendung von 16S-rDNA-Massensequenzierungstechniken durchgeführt. Die Sequenzierung und bioinformatische Analyse wird von der Integrated Microbiome Resource der University of Dalhousie in Kanada durchgeführt.

G) Bestimmungen im Urin.

Nüchternurin wird gesammelt und die folgenden Bestimmungen werden durchgeführt:

1. Marker für oxidative Schäden: 8-Hydroxy-2-desoxyguanosin und Gesamt-F2-Isoprostane werden im Urin durch einen kompetitiven Enzymimmunoassay gemessen. Die Ergebnisse werden auf Kreatinin im Urin normalisiert.
2. Oleuropein-Metabolitenkonzentration: Sie werden wie in früheren Studien durch LC-ESI-MS/MS quantifiziert.

H) Berechnung des Index für erfolgreiches Altern Der Index für erfolgreiches Altern (SAI) mit möglichen Werten im Bereich von 0 bis 10 wird verwendet, um das Altern der Studienteilnehmer zu bewerten. Der vollständige Index umfasst Bildung, Finanzstatus, körperliche Aktivität, BMI, GDS-Score, Teilnahme an sozialen Aktivitäten mit Freunden, mit der Familie, jährliche Ausflüge, CVD-Risikofaktor-Score und Einhaltungsgrad der Mittelmeerdiät, um den Index zu entwickeln. Eine kumulative Variable (Bereich 0–4), die die Gesamtbelastung durch klassische Risikofaktoren für Herz-Kreislauf-Erkrankungen (d. h. Fettleibigkeit und Vorgeschichte von Bluthochdruck, Diabetes und Hypercholesterinämie) angibt, wird entwickelt (Teilnehmer, die keinen der oben genannten Risikofaktoren aufweisen, erhalten die Punktzahl 0). eine Faktornote 1 usw.).

I) Erfolgskriterien der Intervention Um den Erfolg der Intervention mit Oleuropein zu beurteilen, wird die Verringerung der Sondierungstiefe (PD) um 1 mm oder mehr als Hauptvariable herangezogen. Darüber hinaus wird als sekundäres Erfolgskriterium eine Reduktion des Attachmentniveaus um 1 mm oder mehr sowie eine Reduktion der Zahnfleischblutung bei Sondierung um mehr als 20 % angenommen.

J) Statistische Analyse Es wird eine deskriptive Analyse der untersuchten Hauptvariablen durchgeführt. Für normale quantitative Variablen werden der Mittelwert und die Standardabweichung berechnet, oder der Median und die Perzentile im Falle einer Nicht-Normalität. Qualitative Variablen werden mit absoluten und relativen Häufigkeiten ausgedrückt. Die Normalität der Variablen wird mit dem Kolmogorov-Smirnov-Test überprüft, um festzustellen, ob vor Durchführung der Vergleichsstudien Transformationen (logarithmische und andere) durchgeführt werden müssen. Um die Wirkung der Behandlung auf die verschiedenen Variablen in derselben Gruppe zu untersuchen, wird der Student's t-Test für verwandte Stichproben verwendet. Um vergleichende Analysen zum gleichen Versuchszeitpunkt zwischen beiden Versuchsgruppen durchzuführen, wird der Student's t-Test für unabhängige Stichproben verwendet.