Ogólnoustrojowy poziom glutationu w jaskrze normalnego napięcia

Jaskra normalnego ciśnienia jest jedną z najczęstszych przyczyn jaskry pierwotnej otwartego kąta w Korei. Mimo to nadal nie wiemy, co jest przyczyną. Obecnie dostępną metodą terapeutyczną są wyłącznie leki obniżające IOP. Glutation jest jednym z najbardziej skoncentrowanych wewnątrzkomórkowych przeciwutleniaczy. Stwierdzamy apoptozę komórek nerwowych w siatkówce myszy poprzez ogólnoustrojowe wyczerpanie glutationu przy użyciu sulfoksyminy butioniny. Wiadomo również, że glutation jest redukowany w jaskrze pierwotnej otwartego kąta z wysokim IOP. Planujemy więc ocenę ogólnoustrojowego poziomu glutationu w jaskrze normalnego ciśnienia.

Próbki krwi będą pobierane przez nakłucie żyły do ​​żyły przedłokciowej pacjentów z jaskrą z normalnym napięciem i dobranych pod względem wieku zdrowych osób kontrolnych. Pięć mililitrów krwi zostanie pobranych do probówek poddanych działaniu EDTA (aby zapobiec utlenianiu). Trzydzieści mikrolitrów krwi zostanie następnie przeniesionych do probówek wirówkowych i zostanie dodane 33,3 mikrolitra kwasu 5-sulfosalicylowego (SSA), 100 mg/ml w ciągu 10 minut od pobrania krwi. Każda próbka zostanie następnie rozcieńczona 936,7 mikrolitrami buforu fosforanu sodu (pH 7,5), a zawartość każdej probówki szybko wymieszać w wirówce przy 13 000 obr./min przez 5 minut. Porcję supernatantu (150 mikrolitrów) należy następnie zebrać do czystych probówek wirówkowych i natychmiast schłodzić do temperatury -70°C. Do każdego dołka 96-dołkowej płytki należy dodać 150 mikrolitrów dziennego buforu (3 mg NADPH w 10 ml buforu fosforanu sodu), 50 mikrolitrów roztworu DTNB i 25 mikrolitrów wzorców lub próbek w czterech powtórzeniach, a następnie płytkę inkubowano w temperaturze 37°C przez 3 minuty. Na koniec do poprzedniej mieszaniny dodano 25 mikrolitrów GSSGR i płytkę odczytano przy 410 nm przy użyciu 96-studzienkowego czytnika płytek (spektrofotometr UV).