Nivel de glutatión sistémico en el glaucoma de tensión normal

El glaucoma de tensión normal es una de las causas más comunes de glaucoma primario de ángulo abierto en Corea. Aunque, todavía no sabemos cuál es la causa. Sólo los fármacos reductores de la PIO son el método terapéutico actualmente disponible. El glutatión es uno de los antioxidantes intracelulares en su mayoría de alta concentración. Encontramos apoptosis de células neuronales en la retina de ratón por agotamiento sistémico de glutatión usando butionina sulfoximina. También se sabe que el glutatión se reduce en el glaucoma primario de ángulo abierto con PIO alta. Así que estamos planeando evaluar el nivel de glutatión sistémico en el glaucoma de tensión normal.

Las muestras de sangre se obtendrán mediante punción venosa en la vena antecubital de pacientes con glaucoma de tensión normal y controles normales de la misma edad. Se recolectarán cinco mililitros de sangre en tubos tratados con EDTA (para evitar la oxidación). Luego se transferirán treinta microlitros de sangre a tubos de centrífuga y se agregarán 33,3 microlitros de ácido 5-sulfosalicílico (SSA), 100 mg/mL dentro de los 10 minutos posteriores a la extracción de sangre. Luego, cada muestra se diluirá con 936,7 microlitros de tampón de fosfato de sodio. (pH 7,5), y se mezclará rápidamente el contenido de cada tubo en una centrífuga a 13.000 rpm durante 5 minutos. A continuación, se recogerá una porción del sobrenadante (150 microlitros) en tubos de centrífuga limpios y se enfriará inmediatamente a -70 °C. A cada pocillo de una placa de 96 pocillos, se añadirán por cuadruplicado 150 microlitros de tampón diario (3 mg de NADPH en 10 ml de tampón de fosfato de sodio), 50 microlitros de solución de DTNB y 25 microlitros de estándares o muestras, y la placa se se incuba a 37 °C durante 3 minutos. Finalmente, se añadirán 25 microlitros de GSSGR a la mezcla anterior y se leerá la placa a 410 nm con un lector de placas de 96 pocillos (espectrofotómetro UV).