Livello sistemico di glutatione nel glaucoma a tensione normale

Il glaucoma a tensione normale è una delle cause più comuni di glaucoma primario ad angolo aperto in Corea. Anche se, ancora non sappiamo quale sia la causa. Solo i farmaci che riducono la PIO sono il metodo terapeutico attualmente disponibile. Il glutatione è uno degli antiossidanti intracellulari maggiormente concentrati. Troviamo l'apoptosi della cellula neuronale nella retina del topo mediante deplezione sistemica del glutatione usando butionina sulfoximina. Il glutatione è anche noto per essere ridotto nel glaucoma primario ad angolo aperto con IOP elevata. Quindi stiamo pianificando di valutare il livello sistemico di glutatione nel glaucoma da tensione normale.

I campioni di sangue saranno prelevati mediante prelievo venoso nella vena antecubitale di pazienti normali con glaucoma tensivo e controlli normali di pari età. Cinque millilitri di sangue saranno raccolti in provette trattate con EDTA (per prevenire l'ossidazione). Trenta microlitri di sangue verranno quindi trasferiti in provette da centrifuga e verranno aggiunti 33,3 microlitri di acido 5-sulfosalicilico (SSA), 100 mg/mL entro 10 minuti dal prelievo del sangue. Ogni campione verrà quindi diluito con 936,7 microlitri di tampone fosfato di sodio (pH 7.5), e il contenuto di ciascuna provetta sarà miscelato rapidamente in una centrifuga a 13.000 rpm per 5 minuti. Una parte del supernatante (150 microlitri) sarà quindi raccolta in provette da centrifuga pulite e immediatamente raffreddate a -70°C. A ciascun pozzetto di una piastra a 96 pozzetti, verranno aggiunti 150 microlitri di tampone giornaliero (3 mg NADPH in 10 mL di tampone fosfato di sodio), 50 microlitri di soluzione DTNB e 25 microlitri di standard o campioni in quadruplicato e la piastra verrà incubate a 37 °C per 3 minuti. Infine, alla miscela precedente verranno aggiunti 25 microlitri di GSSGR e la piastra verrà letta a 410 nm utilizzando un lettore di piastre a 96 pozzetti (spettrofotometro UV).