Nível Sistêmico de Glutationa no Glaucoma de Tensão Normal

O glaucoma de tensão normal é uma das causas mais comuns de glaucoma primário de ângulo aberto na Coréia. Mesmo assim, ainda não sabemos qual é a causa. Apenas os medicamentos para redução da PIO são o método terapêutico atualmente disponível. A glutationa é um dos antioxidantes intracelulares mais concentrados. Encontramos apoptose de células neuronais na retina de camundongos por depleção sistêmica de glutationa usando butionina sulfoximina. A glutationa também é conhecida por ser reduzida no glaucoma primário de ângulo aberto com PIO alta. Portanto, estamos planejando avaliar o nível de glutationa sistêmica no glaucoma de tensão normal.

Amostras de sangue serão obtidas por punção venosa da veia antecubital de pacientes com glaucoma de tensão normal e controles normais pareados por idade. Cinco mililitros de sangue serão coletados em tubos tratados com EDTA (para evitar a oxidação). Trinta microlitros de sangue serão então transferidos para tubos de centrífuga, e serão adicionados 33,3 microlitros de ácido 5-sulfosalicílico (SSA), 100mg/mL em 10 minutos a partir da coleta de sangue. Cada amostra será então diluída com 936,7 microlitros de tampão fosfato de sódio (pH 7,5), e o conteúdo de cada tubo será misturado rapidamente em centrífuga a 13.000 rpm por 5 minutos. Uma porção do sobrenadante (150 microlitros) será então coletada em tubos de centrífuga limpos e imediatamente resfriada a -70°C. Para cada poço de uma placa de 96 poços, 150 microlitros de tampão diário (3 mg NADPH em 10 mL de tampão fosfato de sódio), 50 microlitros de solução DTNB e 25 microlitros de padrões ou amostras serão adicionados em quadruplicado e a placa será incubados a 37 °C por 3 minutos. Finalmente, 25 microlitros de GSSGR serão adicionados à mistura anterior, e a placa será lida a 410 nm usando um leitor de placas de 96 poços (espectrofotômetro UV).