Systemisch glutathionniveau bij normale spanning DrDeramus

Normaal spanningsglaucoom is een van de meest voorkomende oorzaken van primair openhoekglaucoom in Korea. Ook al weten we nog steeds niet wat de oorzaak is. Alleen IOD-verlagende medicijnen zijn de momenteel beschikbare therapeutische methode. Glutathion is een van de meestal hooggeconcentreerde intracellulaire antioxidanten. We vinden apoptose van neuronale cellen in het netvlies van de muis door systemische uitputting van glutathion met behulp van buthioninesulfoximine. Van glutathion is ook bekend dat het wordt verminderd bij primair openhoekglaucoom met een hoge IOP. We zijn dus van plan om het systemische glutathione-niveau te evalueren bij normaal spanningsglaucoom.

Bloedmonsters zullen worden verkregen door venapunctie in de antecubitale ader van normale-spanningsglaucoompatiënten en normale controles van dezelfde leeftijd. Er wordt vijf milliliter bloed afgenomen in met EDTA behandelde buisjes (om oxidatie te voorkomen). Dertig microliter bloed wordt vervolgens overgebracht naar centrifugebuizen en er wordt binnen 10 minuten na de bloedafname 33,3 microliter 5-sulfosalicylzuur (SSA), 100 mg/ml, aan toegevoegd. Elk monster wordt vervolgens verdund met 936,7 microliter natriumfosfaatbuffer (pH 7,5), en de inhoud van elk buisje wordt snel gemengd in een centrifuge bij 13.000 rpm gedurende 5 minuten. Een deel van het supernatans (150 microliter) wordt vervolgens verzameld in schone centrifugebuizen en onmiddellijk gekoeld tot -70°C. Aan elk putje van een plaat met 96 putjes wordt 150 microliter dagelijkse buffer (3 mg NADPH in 10 ml natriumfosfaatbuffer), 50 microliter DTNB-oplossing en 25 microliter standaard of monsters in viervoud toegevoegd en de plaat wordt geïncubeerd bij 37 ° C gedurende 3 minuten. Ten slotte wordt 25 microliter GSSGR aan het vorige mengsel toegevoegd en wordt de plaat afgelezen bij 410 nm met behulp van een 96-wells plaatlezer (UV-spectrofotometer).