Systemischer Glutathionspiegel beim Normaldruckglaukom

Das Normaldruckglaukom ist eine der häufigsten Ursachen für das primäre Offenwinkelglaukom in Korea. Auch wenn wir immer noch nicht wissen, was die Ursache ist. Als Therapiemethode stehen derzeit ausschließlich IOD-senkende Medikamente zur Verfügung. Glutathion ist eines der meist hochkonzentrierten intrazellulären Antioxidantien. Wir finden Apoptose neuronaler Zellen in der Netzhaut der Maus durch systemischen Abbau von Glutathion unter Verwendung von Buthioninsulfoximin. Es ist auch bekannt, dass Glutathion beim primären Offenwinkelglaukom mit hohem Augeninnendruck reduziert ist. Daher planen wir, den systemischen Glutathionspiegel beim Normaldruckglaukom zu bewerten.

Blutproben werden durch Venenpunktion der Vena antecubitalis von Normaldruckglaukompatienten und altersentsprechenden normalen Kontrollpersonen entnommen. Fünf Milliliter Blut werden in mit EDTA behandelten Röhrchen gesammelt (um Oxidation zu verhindern). Anschließend werden 30 Mikroliter Blut in Zentrifugenröhrchen überführt und innerhalb von 10 Minuten nach der Blutentnahme mit 33,3 Mikroliter 5-Sulfosalicylsäure (SSA) (100 mg/ml) versetzt. Anschließend wird jede Probe mit 936,7 Mikroliter Natriumphosphatpuffer verdünnt (pH 7,5) und der Inhalt jedes Röhrchens wird in einer Zentrifuge bei 13.000 U/min 5 Minuten lang schnell gemischt. Ein Teil des Überstands (150 Mikroliter) wird dann in sauberen Zentrifugenröhrchen gesammelt und sofort auf -70 °C abgekühlt. In jede Vertiefung einer 96-Well-Platte werden 150 Mikroliter täglicher Puffer (3 mg NADPH in 10 ml Natriumphosphatpuffer), 50 Mikroliter DTNB-Lösung und 25 Mikroliter Standards oder Proben in vierfacher Ausfertigung gegeben, und die Platte wird gereinigt 3 Minuten bei 37 °C inkubiert. Abschließend werden 25 Mikroliter GSSGR zur vorherigen Mischung hinzugefügt und die Platte wird bei 410 nm mit einem 96-Well-Plattenlesegerät (UV-Spektrophotometer) ausgelesen.