Poszukiwanie biomarkerów transkrypcyjnych w protokole konwersji z inhibitorów kalcyneuryny do mykofenolanu mofetylu (TBCP)

Wstęp: Leczenie immunosupresyjne (IS) ma kilka i często występuje działań niepożądanych; wśród nich są: ciężkie infekcje, cukrzyca, nadciśnienie tętnicze, osteoporoza, zaburzenia neurologiczne, niewydolność nerek, dyslipemie, zwiększone ryzyko sercowo-naczyniowe, nowotwory itp. Po 5 latach u 18% receptorów wątrobowych rozwija się niewydolność nerek, ryzyko zachorowania na raka jest trzykrotnie większe po LT, a 30% receptorów przeszczepu wątroby zakażonych wcześniej wirusem zapalenia wątroby typu C (HCV) ma marskość wątroby 5 lat po LT, prawdopodobnie z powodu wpływ IS na kinetykę wirusa. Idealną sytuacją byłoby, gdyby biorcy wątroby otrzymywali wystarczającą ilość IS, aby zahamować odpowiedź immunologiczną przeciwko alloprzeszczepowi, unikając jednocześnie nadmiernego wpływu na zdolność układu odpornościowego do rozpoznawania patogenów, komórek nowotworowych i minimalizując działania niepożądane, a nawet więcej, nieokreślony akceptacja przeszczepu przy całkowitym braku IS, koncepcja, która w klinice nazywana jest tolerancją operacyjną (OT). OT występuje u około 20% biorców wątroby. Więc chociaż potencjalna korzyść jest ważna, dotyczy tylko niewielkiej części biorców wątroby. Inna, ale pokrewna strategia została oceniona w kilku badaniach w przeszłości i polega na zmianie IS opartego na inhibitorach kalcyneuryny (CNI) na inną, mniej intensywną, opartą na mykofenolanie mofetylu (MMF), o którym wiadomo, że ma mniej działań niepożądanych zachowują funkcję nerek i nie wpływają na czynność i proliferację limfocytów T regulatorowych, które biorą udział w rozwoju OT. W niedawnym badaniu (w druku) badacze przeprowadzili wycofanie IS u ponad stu biorców wątroby i badacze stwierdzili, że te, które zostały sklasyfikowane jako tolerancyjne pod względem operacyjnym (40%), gdzie te, u których upłynął dłuższy czas od wycofania LT do IS, ci, którzy otrzymywali mniejsze dawki CNI i ci, którzy otrzymywali monoterapię MMF. Badacze byli również w stanie rozróżnić biorców wątroby z tolerancją operacyjną od tych, u których rozwinęło się odrzucenie w oparciu o zróżnicowaną ekspresję genów (ocenioną za pomocą mikromacierzy całego genomu) tuż przed wycofaniem IS.

Cel badania: przeprowadzenie konwersji IS z monoterapii CNI na MMF i poszukiwanie biomarkerów transkrypcyjnych z wykorzystaniem całego badania ekspresji genomu przeprowadzonego z mikromacierzami na linii podstawowej na tkance wątroby i PBMC, aby spróbować znaleźć zestaw genów o zróżnicowanej ekspresji, które są w stanie skorelować z udaną konwersją i w ten sposób, aby wygenerować zestaw biomarkerów transkrypcyjnych potencjalnie zdolnych do przewidywania wyniku konwersji IS na niezależnej kohorcie biorców wątroby.

Metody: Czterdziestu pacjentów zostanie zrekrutowanych spośród naszej kohorty biorców przeszczepu wątroby. Badanie potrwa 48 tygodni. Kryteriami włączenia będą: a) przeszczep wątroby sprzed ponad 2 lat, b) stabilna funkcja przeszczepu, b) brak autoimmunologicznej choroby wątroby w wywiadzie, c) brak odrzucenia w ciągu ostatnich 12 miesięcy, d) stosowanie inhibitorów kalcyneuryny (CNI) jako monoterapia, e) brak odrzucenia w wyjściowej biopsji wątroby, d) minimalne stężenia takrolimusu > 3 ng/ml lub cyklosporyny C2 > 30 ng/ml, e) podpis formularza świadomej zgody. Po procedurze przesiewowej mykofenolan mofetylu zostanie rozpoczęty (tydzień -4) od dawki 500 mg dwa razy dziennie przez dwa tygodnie, a następnie (tydzień -2) zostanie zwiększony do 1000 mg dwa razy dziennie, a CNI zostanie obniżony do 50% dawka początkowa. Po dwóch tygodniach (tydzień 0) CNI zostanie całkowicie wycofane (całkowita konwersja IS). Badacze będą obserwować pacjentów co 4 tygodnie do 48 tygodni po całkowitej konwersji IS. Pełny okres nauki potrwa 52 tygodnie. Wyjściowo zostanie wyizolowany mRNA z próbek wątroby i komórek jednojądrzastych krwi obwodowej. Ten mRNA zostanie użyty do oceny ekspresji całego genomu przy użyciu mikromacierzy Affimetrix. Poza tym częstość limfocytów T regulatorowych będzie mierzona za pomocą immunofenotypowania krwinek obwodowych na początku badania i pod koniec obserwacji. Zmienne kliniczne zostaną ocenione w celu określenia ewolucji funkcji nerek i innych czynników ryzyka sercowo-naczyniowego.

Oczekiwane wyniki: Badacze spodziewają się, że pod koniec badania większość biorców będzie w stanie pomyślnie odrzucić, a mniejsza grupa (około 30%) nie będzie w stanie tego zrobić z powodu odrzucenia. Następnie wyjściowe próbki mRNA zostaną użyte do wykonania mikromacierzy całego genomu. Korzystając z procedur bioinformatycznych, badacze podejmą próbę ustalenia różnic w ekspresji genów między tymi, u których doszło do udanej konwersji, a tymi, u których doszło do odrzucenia. Pozwoli to badaczom określić najmniejszy zestaw genów zdolnych do rozróżnienia tych pacjentów. Ekspresja genów będzie również skorelowana z immunofenotypowaniem komórek krwi obwodowej i zmiennymi klinicznymi.