Ricerca di biomarcatori trascrizionali in un protocollo di conversione da inibitori della calcineurina a micofenolato mofetile (TBCP)

Introduzione: Il trattamento immunosoppressivo (IS) ha numerosi e frequenti effetti avversi; tra questi ci sono: infezioni gravi, diabete mellito, ipertensione arteriosa, osteoporosi, disturbi neurologici, insufficienza renale, dislipidemia, aumento del rischio cardiovascolare, cancro, ecc. Dopo 5 anni, il 18% dei recettori del fegato sviluppa insufficienza renale, il rischio di sviluppare il cancro è tre volte più alto dopo il trapianto di fegato e il 30% dei recettori del trapianto di fegato precedentemente infettati dal virus dell'epatite C (HCV) hanno la cirrosi 5 anni dopo il trapianto, probabilmente a causa di l'effetto di IS sulla cinetica virale. Una situazione ideale sarebbe che i riceventi di trapianto di fegato ricevano abbastanza IS per inibire la risposta immunitaria contro l'allotrapianto, evitando un effetto eccessivo sulla capacità del sistema immunitario di riconoscere agenti patogeni, cellule tumorali e minimizzando gli effetti avversi o, ancor di più, l'indefinito accettazione dell'innesto in completa assenza di IS, concetto che in clinica viene chiamato tolleranza operativa (OT). L'OT si verifica in circa il 20% dei riceventi di fegato. Quindi, sebbene il potenziale beneficio sia importante, interessa solo una piccola parte dei riceventi del fegato. Una strategia diversa ma correlata è stata valutata in diversi studi in passato e consiste nel passare da un IS basato sugli inibitori della calcineurina (CNI) ad un altro meno intenso basato sul mofetil micofenolato (MMF), che è noto per avere meno effetti avversi , preservare la funzione renale e non influenzare la funzione e la proliferazione delle cellule T regolatorie, che sono coinvolte nello sviluppo di OT. In un recente studio (in corso di stampa), i ricercatori hanno eseguito un prelievo di IS su oltre un centinaio di riceventi di fegato e i ricercatori hanno scoperto che coloro che erano classificati come tolleranti dal punto di vista operativo (40%) dove quelli con un tempo più lungo trascorso dal ritiro da LT a IS, quelli che hanno ricevuto dosi più basse di CNI e quelli che hanno ricevuto la monoterapia con MMF. I ricercatori sono stati anche in grado di discriminare tra i riceventi di fegato tolleranti dal punto di vista operativo e quelli che hanno sviluppato un rigetto basato sulla sua espressione genica differenziale (valutata mediante microarray dell'intero genoma) appena prima del ritiro dell'IS.

Scopo dello studio: eseguire la conversione di IS da CNI a MMF in monoterapia e cercare biomarcatori trascrizionali impiegando uno studio di espressione del genoma completo eseguito con microarray al basale su tessuto epatico e PBMC per cercare di trovare un insieme di geni espressi differenzialmente in grado di correlare con una conversione riuscita e quindi, per generare una serie di biomarcatori trascrizionali potenzialmente in grado di predire il risultato della conversione IS su una coorte indipendente di riceventi di fegato.

Metodi: quaranta pazienti saranno reclutati nella nostra coorte di pazienti sottoposti a trapianto di fegato. Lo studio durerà 48 settimane. I criteri di inclusione saranno a) trapianto di fegato da più di 2 anni, b) funzione del trapianto stabile, b) nessuna storia di malattia epatica autoimmune, c) assenza di rigetto negli ultimi 12 mesi, d) uso di inibitori della calcineurina (CNI) come monoterapia, e) assenza di rigetto alla biopsia epatica basale, d) livelli minimi di tacrolimus > 3 ng/ml o livelli di ciclosporina C2 > 30 ng/ml, e) firma del modulo di consenso informato. Dopo la procedura di screening, il micofenolato mofetile verrà iniziato (settimana -4) alla dose di 500 mg due volte al giorno per due settimane e poi (settimana -2) aumentato a 1000 mg due volte al giorno e il CNI sarà ridotto al 50% del dose iniziale. Dopo due settimane (settimana 0) la CNI verrà completamente interrotta (conversione completa dell'IS). Gli investigatori seguiranno i pazienti ogni 4 settimane fino a 48 settimane dopo la conversione IS completa. Il periodo di studio completo durerà 52 settimane. Al basale saranno isolati mRNA da campioni di fegato e cellule mononucleate di sangue periferico. Questo mRNA sarà utilizzato per valutare l'espressione dell'intero genoma utilizzando i microarray Affimetrix. Inoltre, la frequenza delle cellule T regolatorie sarà misurata utilizzando l'immunofenotipizzazione delle cellule del sangue periferico al basale e alla fine del follow-up. Le variabili cliniche saranno valutate per determinare l'evoluzione della funzione renale e altri fattori di rischio cardiovascolare.

Risultati attesi: i ricercatori si aspettano che alla fine dello studio la maggior parte dei destinatari sarà stata in grado di avere un rifiuto positivo e un gruppo minore (circa il 30%) non sarà in grado di farlo a causa del rifiuto. Quindi i campioni di mRNA di base verranno utilizzati per eseguire microarray dell'intero genoma. Utilizzando procedure bioinformatiche i ricercatori cercheranno di stabilire un'espressione genica differenziale tra quelli con conversione riuscita e quelli che sviluppano rigetto. Ciò consentirà agli investigatori di determinare il più piccolo insieme di geni in grado di discriminare tra quei pazienti. L'espressione genica sarà anche correlata con l'immunofenotipizzazione delle cellule del sangue periferico e le variabili cliniche.