Busca por biomarcadores transcricionais em um protocolo de conversão de inibidores de calcineurina para micofenolato de mofetil (TBCP)

Introdução: O tratamento imunossupressor (SI) apresenta diversos e frequentes efeitos adversos; entre eles estão: infecções graves, diabetes mellitus, hipertensão arterial, osteoporose, distúrbios neurológicos, insuficiência renal, dislipidemias, aumento do risco cardiovascular, câncer, etc. Após 5 anos, 18% dos receptores hepáticos desenvolvem insuficiência renal, o risco de desenvolver câncer é três vezes maior após TH e 30% dos receptores hepáticos previamente infectados pelo vírus da hepatite C (HCV) apresentam cirrose 5 anos após TH, provavelmente devido a o efeito do IS na cinética viral. Uma situação ideal seria que os receptores de transplante de fígado recebessem IS suficiente para inibir a resposta imune contra o aloenxerto, evitando um efeito excessivo sobre a capacidade do sistema imunológico de reconhecer patógenos, células tumorais e minimizando os efeitos adversos ou ainda, a duração indefinida aceitação do enxerto na ausência total de IS, conceito que na clínica é chamado de tolerância operacional (OT). OT ocorre em cerca de 20% dos receptores de fígado. Portanto, embora o benefício potencial seja importante, ele afeta apenas uma pequena fração dos receptores de fígado. Uma estratégia diferente, mas relacionada, foi avaliada em vários ensaios no passado e consiste na mudança de um IS baseado em inibidores de calcineurina (CNI) para outro menos intenso baseado em micofenolato de mofetil (MMF), que é conhecido por ter menos efeitos adversos , preservam a função renal e não afetam a função e a proliferação das células reguladoras T, que estão envolvidas no desenvolvimento da TO. Em um estudo recente (no prelo), os investigadores realizaram uma retirada de IS para mais de cem receptores de fígado e os investigadores descobriram que aqueles que foram classificados como tolerantes operacionalmente (40%) onde aqueles com mais tempo decorrido desde a retirada de LT para IS, aqueles que receberam doses menores de CNI e aqueles que receberam monoterapia com MMF. Os investigadores também foram capazes de discriminar entre receptores de fígado operacionalmente tolerantes e aqueles que desenvolveram uma rejeição com base em sua expressão gênica diferencial (avaliada por microarray de genoma inteiro) pouco antes da retirada do IS.

Objetivo do estudo: realizar a conversão IS da monoterapia CNI para MMF e procurar biomarcadores transcricionais empregando um estudo de expressão genômica completo realizado com microarrays na linha de base em tecido hepático e PBMCs para tentar encontrar um conjunto de genes expressos diferencialmente capazes de se correlacionar com uma conversão bem-sucedida e assim, gerar um conjunto de biomarcadores transcricionais potencialmente capazes de predizer o resultado da conversão IS em uma coorte independente de receptores de fígado.

Métodos: Quarenta pacientes serão recrutados entre nossa coorte de receptores de transplante hepático. O estudo terá duração de 48 semanas. Os critérios de inclusão serão a) transplante hepático há mais de 2 anos, b) função estável do enxerto, b) ausência de histórico de doença hepática autoimune, c) ausência de rejeição nos últimos 12 meses, d) Uso de inibidores de calcineurina (CNI) como monoterapia, e) ausência de rejeição na biópsia hepática basal, d) níveis mínimos de tacrolimus > 3 ng/ml ou ciclosporina C2 > 30 ng/ml, e) assinatura do termo de consentimento livre e esclarecido. Após o procedimento de triagem, o micofenolato de mofetil será iniciado (semana -4) na dose de 500 mg duas vezes ao dia por duas semanas e depois (semana -2) aumentado para 1000 mg duas vezes ao dia e o CNI será reduzido em 50% do dosagem inicial. Após duas semanas (semana 0), o CNI será completamente descontinuado (conversão IS completa). Os investigadores acompanharão os pacientes a cada 4 semanas até 48 semanas após a conversão completa de IS. O período completo do estudo durará 52 semanas. Inicialmente, amostras de mRNA de fígado e células mononucleares de sangue periférico serão isoladas. Este mRNA será usado para avaliar a expressão do genoma inteiro usando microarrays Affimetrix. Além disso, a frequência de células T reguladoras será medida por meio de imunofenotipagem de células sanguíneas periféricas no início e no final do acompanhamento. Variáveis ​​clínicas serão avaliadas para determinar a evolução da função renal e outros fatores de risco cardiovascular.

Resultados esperados: Os investigadores esperam que no final do estudo a maioria dos receptores tenha sido capaz de ter uma rejeição bem-sucedida e um grupo menor (cerca de 30%) não será capaz de fazê-lo por causa da rejeição. Em seguida, as amostras de mRNA da linha de base serão usadas para realizar microarrays de genoma inteiro. Usando procedimentos de bioinformática, os pesquisadores tentarão estabelecer uma expressão gênica diferencial entre aqueles com conversão bem-sucedida e aqueles que desenvolvem rejeição. Isso permitirá que os investigadores determinem o menor conjunto de genes capaz de discriminar entre esses pacientes. A expressão gênica também será correlacionada com imunofenotipagem de células sanguíneas periféricas e variáveis ​​clínicas.