Mikrobiologiczna ocena czyszczenia protez i przechowywania przez noc

Cel badania

Obecność biofilmu – tj. ustrukturyzowanych zbiorowisk drobnoustrojów, które są przyczepione do powierzchni i otoczone matrycą z egzopolimeru – na ruchomych protezach akrylowych wiąże się z poważnymi chorobami ogólnoustrojowymi, zwłaszcza u niesamodzielnych osób w podeszłym wieku [1]. Bakterie jamy ustnej są zaangażowane między innymi w bakteryjne zapalenie wsierdzia [2], zachłystowe zapalenie płuc [3, 4], przewlekłą obturacyjną chorobę płuc [5, 6] [1, 7]. Istnieje wiele dowodów dotyczących związku między właściwą higieną jamy ustnej a ogólnym stanem zdrowia organizmu.

Płytka nazębna na protezach jest złożonym agregatem zawierającym ponad 108 organizmów na miligram i obejmującym ponad 600 gatunków prokariotów [8]. Różne gatunki współpracują, tworząc symbiotyczny biofilm. Biofilmy u pacjentów z zębami były szeroko badane, ale przeprowadzono niewiele badań dotyczących mikroflory biofilmu całkowitych protez akrylowych [10-18]. Wydaje się, że różne biofilmy, z towarzyszącym ryzykiem patogennym, są obecne u „zdrowych” uczestników dotkniętych protetycznym zapaleniem jamy ustnej [15, 16, 18]. Nie tylko złe czyszczenie protez, ale także niewłaściwe nawyki, takie jak noszenie protez przez noc, okazały się być związane z występowaniem zapalenia jamy ustnej związanego z Candida [19, 20]. Dlatego w warunkach klinicznych zaleca się wyjmowanie akrylowych protez ruchomych na noc. Chociaż dostępne są oparte na dowodach wytyczne dotyczące pielęgnacji i konserwacji protez [21], brak jest wytycznych dotyczących nocnych warunków przechowywania protez. W związku z tym badacze przeprowadzili badanie (przesłane do publikacji), aby ocenić wpływ różnych protokołów przechowywania przez noc na tworzenie się i dojrzewanie biofilmu protezy. Wyniki tego badania wykazały, że stosowanie tabletek czyszczących (Corega Tabs Anti-bacteria®, GlaxoSmithKline Consumer Healthcare SA, Genval, Belgia) do przechowywania ruchomych protez akrylowych przez noc zmniejsza masę biofilmu protezy i patogenność w porównaniu z konserwacją suchą i wodą.

Ponieważ we wspomnianym badaniu nie przeprowadzono mechanicznego czyszczenia protez, celem proponowanego badania jest ocena łącznego wpływu czyszczenia mechanicznego i warunków przechowywania przez noc na skład mikrobiologiczny i kolonizację Candida albicans w tworzeniu biofilmu protezy. Informacje te są niezbędne do opracowania wytycznych klinicznych dotyczących czyszczenia i przechowywania protez akrylowych przez noc, mających na celu zmniejszenie ryzyka stwarzanego przez drobnoustroje chorobotwórcze, zwłaszcza u pacjentów obłożnie chorych i pacjentów z obniżoną odpornością.

Pytania badawcze

•Jaki jest wpływ czyszczenia mechanicznego na powstawanie biofilmu na ruchomych protezach akrylowych?

• Czy czyszczenie ultradźwiękowe jest skuteczniejsze niż szczotkowanie protez pod względem zapobiegania tworzeniu się biofilmu na ruchomych protezach akrylowych?
• Jaki jest wpływ nocnego przechowywania w wodzie z tabletką oczyszczającą na powstawanie biofilmu na czyszczonych mechanicznie ruchomych protezach akrylowych?

Materiały i metody

• Liczba uczestników: 30 Kryteria włączenia: Chory starszy w placówce Całkowity brak zębów w dolnej i górnej szczęce Użytkownik protezy ruchomej w dolnej i górnej szczęce Dobry stan zdrowia jamy ustnej

  - Kryteria wykluczenia: Obecne lub przebyte leczenie kortykosteroidami w ciągu 3 miesięcy poprzedzających badanie Obecne lub przebyte leczenie przeciwdrobnoustrojowe w ciągu 3 miesięcy poprzedzających badanie Niezdolność do wyrażenia świadomej zgody Niezdolność do spełnienia wymagań badania

• Warunki badania Metoda czyszczenia protezy Warunki przechowywania protezy przez noc

  1Szczotkowanie wodą i mydłem Zanurzenie w wodzie z tabletką czyszczącą 2Szczotkowanie wodą i mydłem Zanurzenie w wodzie bez tabletki oczyszczającej (= kontrola ujemna) 3Czyszczenie ultradźwiękowe Zanurzenie w wodzie z tabletką czyszczącą 4Czyszczenie ultradźwiękowe Zanurzenie w wodzie bez tabletki oczyszczającej

• Badanie to zostało zatwierdzone przez Institutional Ethics Committee (S54968, University Hospitals Leuven, Belgia) i zarejestrowane w belgijskiej bazie danych badań klinicznych (identyfikator: B322201316863).

• Projekt badania

  - Badanie krzyżowe z losową sekwencją 4 warunków testowych Oznacza to, że wszystkie 4 warunki testowe zostaną wykonane u każdego z 30 uczestników badania.

  • Kolejność warunków testowych dla poszczególnych uczestników zostanie ustalona losowo.
  • Podwójna ślepa próba (zarówno uczestnicy, jak i badacze nie znają warunków testu)
• Wszystkie warunki testowe będą obowiązywać przez 5 dni. Oznacza to, że wszyscy pacjenci przejdą 4 okresy testowe po 5 dni.
• Każdy okres testowy będzie poprzedzony 2-dniowym okresem wymywania, w którym zastosowany zostanie standard pielęgnacji. Ten standard pielęgnacji polega na czyszczeniu protezy poprzez szczotkowanie wodą z mydłem oraz przechowywanie w wodzie przez noc.
• Przed rozpoczęciem badania wszystkie protezy zostaną odwapnione za pomocą octu.
• Na początku badania wszystkie protezy zostaną oczyszczone mechanicznie poprzez szczotkowanie protez oraz dodatkowe czyszczenie ultradźwiękowe. Po oczyszczeniu mechanicznym protezy zostaną również zdezynfekowane 1% żelem diglukonianu chlorheksydyny (żel Corsodyl, GlaxoSmithKline Consumer Healthcare SA, Genval, Belgia).
• Po mechanicznym czyszczeniu i dezynfekcji protez na początku każdego okresu testowego zostaną pobrane próbki kontrolne (n=4) w celu oceny skuteczności procedur czyszczenia i dezynfekcji.
• Po każdym okresie testowym zostaną pobrane próbki do badań (n=4).
• Uczestnicy zostaną poproszeni o nieczyszczenie protez samodzielnie. 2 opiekunów biorących udział w badaniu wykona czyszczenie protezy i zastosuje odpowiednie warunki przechowywania przez noc.
• Mierniki rezultatu:

Stan kliniczny błony śluzowej nośnej protezy Metoda: ocena kliniczna Analizy mikrobiologiczne Metoda: jakościowe i ilościowe analizy PCR dla 20 wybranych bakterii jamy ustnej (Aa, Pg, Tf, Td, Pi, Fn, Pm, Pn, Cg, Cr, En, Ec, Cs, Cc, Sm, Sg, Sc, Ao, Av, Vp) oraz dla Candida albicans.

Pobieranie biofilmu zostanie pobrane z okrągłego obszaru o średnicy 5 mm, położonego policzkowo-dystalnie od dolnych drugich zębów przedtrzonowych (Ryc. 1). W celu ujednolicenia położenia i wymiarów tego regionu oraz zapewnienia optymalnej powtarzalności pobierania próbek drobnoustrojów, każda dolna proteza zostanie wykonana na zamówienie z pierścieniami zastępczymi (Optosil®, Heraeus Kulzer GmbH, Hanau, Niemcy) (ryc. 1). Pierścienie zastępcze zostaną umieszczone w taki sposób, aby przejście między sztucznymi zębami a dziąsłami znajdowało się centralnie. Formy te zostaną wytworzone po zdezynfekowaniu protez na początku badania i będą ponownie wykorzystywane w trakcie badania ze względu na brak zmian wymiarowych w czasie, jeśli będą odpowiednio konserwowane (tj. suchy iw plastikowej torbie). Formy i pierścienie będą dezynfekowane po każdym pobraniu mikrobiologicznym.

Ocena płytki nazębnej Metoda: Płytka na protezę zostanie oceniona niezależnie przez 2 badaczy przy użyciu 4% roztworu ujawniającego erytrozynę według Augsburgera i Elahi [22] (zakres punktacji 0-4)

• Protokół badania Punkt czasowy Czynność Pobieranie próbek drobnoustrojów Dzień 0 (rano) usuwanie kamienia nazębnego za pomocą octu mechaniczne czyszczenie protez ° Dzień 0-2 standardowa pielęgnacja Dzień 3 (rano) Mechaniczne czyszczenie protez° i dezynfekcja Próbka kontrolna 1* Dzień 3-7 okres testowy 1 Dzień 7 (wieczorem) Mechaniczne czyszczenie protez° i dezynfekcja Próbka kontrolna 1** Dzień 8-9 standardowa pielęgnacja (okres wypłukiwania) Dzień 10 (rano) Mechaniczne czyszczenie protez° i dezynfekcja Próbka kontrolna 2* Dzień 10-14 Okres testowy 2 Dzień 14 (wieczór) Mechaniczne czyszczenie protezy° i dezynfekcja próbki testowej 2** Dzień 15-16 standardowa pielęgnacja (okres wypłukiwania) Dzień 17 (rano) Mechaniczne czyszczenie protezy° i dezynfekcja kontrola 3* Dzień 17-21 okres badania 3 Dzień 21 (wieczór) Mechaniczne czyszczenie protezy° i dezynfekcja próbka testowa 3** Dzień 22-23 standardowa pielęgnacja (okres wypłukiwania) Dzień 24 (rano) Mechaniczne czyszczenie protezy° i dezynfekcja kontrola 4* Dzień 24-28 okres testowy 4 Dzień 28 (wieczorem) Mechaniczne czyszczenie protezy° i desin fectionii KONIEC BADANIA próbka testowa 4**

°mechaniczne czyszczenie protez: szczotkowanie wodą z mydłem + dodatkowe czyszczenie ultradźwiękowe i standard pielęgnacji: szczotkowanie protez wodą z mydłem i przechowywanie przez noc w wodzie z kranu )

*próbki kontrolne: po czyszczeniu mechanicznym i dezynfekcji

**pobieranie próbek do badań: przed czyszczeniem mechanicznym dezynfekcja